薄层层析显色剂

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1、薄层层析,显色剂薄层层析溶剂/展开剂/显色剂的选择配制及注意事项摘要： 薄层色谱方法总结：使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”， 溶剂组成采用体积量比（如正丁醇-冰乙酸-水二4:1:1, V/V/V），或 者绝对量（如18ml甲苯+ 2 ml甲醇）。其总量应足以使TLC/HPTLC板 的浸入深度约为5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用，如 需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用相关专题薄层层析（TLC ）技术薄层色谱方法总结1. 方法原理（1）流动相利用毛细管力带着样品穿过固定相。（2）样品与固定相的相互作用是指组份在移行过程中由于偶极- （诱 导） - 偶极相互

2、作用，氢键和范德华力的作用而产生不同程度的延缓、吸附、分散、离 子交换和络合等分离机理。2. 溶剂 使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”，溶剂组成采用体积量比（如正丁醇-冰乙酸-水二4:1:1, V/V/V），或者绝对量（如18ml 甲苯+ 2 ml 甲醇）。其总量应足以使 TLC/HPTLC 板的浸入深度约为 5mm。展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用，如需分层，则按要求 放置分层后取需要的一相（上层或下层）,备用。一、溶剂选择规则:1、考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。2、先加入极性较小的溶剂,若不容再加入少量极性大的溶剂3、一般根据相似相溶原则,需要注意,极性相差大的不混溶。4、混

3、合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。5、展开剂的比例要靠尝试 .一般根据文献中报道的该类化合物用 什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好的展开剂。6、一般把两种溶剂混合时,采用高极性/低极性的体积比为 1/3 的 混合溶剂,如果有分开的迹象,再调整比例（或者加入第三种溶剂）,达到最 佳效果;如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。二、展开剂的选择条件： 对的所需成分有良好的溶解性; 可使成分间分开; 待测组分的Rf在0.20.8之间，定量测定在0.30.5之间； 不与待测组分或吸附剂发生化学反应;沸点适中，黏度较/丫 展开后

4、组分斑点圆且集中; 混合溶剂最好用新鲜配制。三、溶剂极性参数表环已烷：-0.2、石油醚（I类，3060。0、石油醚（口类，6090。0、 正已烷:0.0、甲苯:2.4、二甲苯:2.5、苯:2.7、二氯甲烷:3.1、异丙 醇:3.9、正丁醇 :3.9、四氢呋喃 :4.0、氯仿 :4.1、乙醇 :4.3、乙酸乙 酯:4.4、甲醇:5.1、丙酮:5.1、乙腈:5.8、乙酸:6.0、水:10.21、一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再 根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离 效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;2、中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相

5、组成，由甲醇、乙醇， 乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂 素和萜类的分离;3、强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯 等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。四、展开剂的选择 物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的 极性就增加，展开剂极性也增加了。以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。1、类极性较小的挥发性物质冰片：石油醚（3060。0醋酸乙酯（17:3）、厚朴酚：苯-醋酸乙酯(9:1.5)、a-香附酮：苯-醋酯乙酯-冰醋酸(92:5:5)、丹皮酚：环己烷-

6、醋酸 乙酯(3:1)，结论：以石油醚、正构烷和苯为体积百分数比较大的溶剂，通常 起溶解和分离化合物的作用，而用醋酸乙酯为调节Rf(比移值)的溶剂。 为了减少拖尾之类其他相似相溶原则以外的影响，适当加入添加剂， 如有机酸或者有机碱。2、类极性较小的不挥发性物质P -谷甾醇：环己烷-醋酸乙酯-甲醇(625:1)或者环己烷-丙酮(5:2)、 熊果酸：甲苯-醋酸乙酯-冰醋酸(12:4:0.5)、齐墩果酸：氯仿-甲醇 (40:1)、猪去氧胆酸：氯仿-乙醚-冰醋酸(2:2:1)、大黄素：苯醋酸乙酯甲醇(15:2:0.2)或者苯乙醇(8:1)、丹参酮口A:苯-醋酸乙酯-甲酸(40:25:4)、穿心莲内酯：氯

7、仿-无 水乙醇(9:1)靛玉红、靛蓝氯仿-乙醇(9:1)或者苯-氯仿-丙酮(5:4:1)结论：这类物质展开剂极性比极性较小的挥发性物质洗脱力强一 些，因为这类物质极性小的母核大，而极性大的基团通常可以形成氢 键，比如羧酸、羟基。以上物质，母核分子量减小、母核结构中不饱 和健的增加(尤其是出现苯环)，极性基团的增加，都使极性增加，展开 剂极性也增大。这个范围内的物质很多，一般展开剂大百分数的溶 剂可以从环己烷甲苯二甲苯苯氯仿的顺序，按照极 性要求选择。这里注意，异丙醇、正丁醇极性指数也比较小，在这范 围的化合物很少用，因为粘性大、展开慢，造成斑点扩散 ;另外，羟基 的氢键作用力也有不利。调节 R

8、f 值的溶剂，从醋酸乙酯甲醇 丙酮乙醇。挥发性物质也有很多带羰基、羟基的，但从它的挥发 性就可以明白，分子间作用力不强，另外，母核与石油醚、正构烷和 苯的结构差异小，估计更容易脱离硅胶吸附，更快进入溶剂中，而不 需要通过提高展开剂的极性。由于存在糖的多羟基结构，苷元的结构影响变小。展开剂中使用 极性大的有机溶剂(氯仿、醋酸乙酯、甲醇、正丁醇)和水。乙酸和甲酸 的使用，一方面增大展开剂极性，另外也可以抑制硅胶羟基的作用， 减少拖尾。由于混溶性和硅胶耐酸能力的限制，水和酸的使用是有限 度的。3、类极性大的小分子有机酸： 没食子酸：氯仿 -醋酸乙酯-甲酸(5:4:1)、阿魏酸、咖啡酸、菊苣 酸、绿原

9、酸、异绿原酸。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性 基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。依次为 肉桂酸、阿魏酸、咖啡酸、菊苣酸、绿原酸。相应展开剂分别为：正 己烷乙醚冰醋酸(5:5:0.1)、苯-冰醋酸-甲醇(30:1:3)、氯仿-甲醇-甲酸(9:1: 0.5)、石油醚-乙酸乙酯-甲酸(3:6: 1)、醋酸丁酯-甲酸-水(7:2.5:2.5)。结论： 这类物质多数是苯乙烯母核的，这个结构的极性本身比较大，另 外有酚羟基和羧酸基团，个别有多羟基配基。皂苷的展开剂差不多， 极性大。注意甲酸通常指的是浓度85%左右的，含有水。4、类含氮有机物： 盐酸小檗碱：苯-醋酸乙酯-甲醇-异

10、丙醇-浓氨试液(12：6：3：3： 0.6)(氨蒸气饱和)或正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)、麻黄碱：氯仿-甲醇-浓氨试液(20:5:0.5)或正丁醇-冰醋酸-水(8:2:1) 甘草酸铵：醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15:1:1:2)。结论分析：由于NH2硅醇基的作用很强，在强极性展开剂加有机 酸、有机碱扫尾。对于极性化合物，使用正丁醇对斑点扩散影响较小， 因为化合物和硅胶的作用强。当被分离物质为弱极性物质，一般选用弱极性溶剂为洗脱剂 ;被分 离物质为强极性成分，则须选用极性溶剂为洗脱剂。如果对某一极性 物质用吸附性较弱的吸附剂(如以硅藻土或滑石粉代替硅胶)，则洗脱剂 的极性亦须相应降低。3.

11、 TLC的通用显色方法理想的显色希望灵敏度高，斑点颜色稳定、斑点与背景间的对比度好，斑点的大小及颜色的深度与物质的量成正比，在样品组成并不 完全已知的情况下，通用显色方法显得尤为重要，通用显色方法主要 有： E/m T2K gVp Fg4244131、紫外照射法：方便、不破坏样品；Pl o;E rm?z s? d T$V4244132碘蒸气法：通用性强，与紫外法 结合灵敏度高于该两法单独使用；$b8M?（P +e4244133、荧光试剂：制造荧光背景，使原来紫 外下无荧光物质被鉴别，有荧光物质更明显 ;小木虫学术博客 J- M0D6Rf;r4、硫酸溶剂：对绝大多数有机物有效，但有破坏性。4.

12、薄层层析和纸色谱操作注意事项1、点样点样器点样于薄层板上 ,一般为圆点，点样基线距底边 1.01.5cm，样点直径一般不大于2mm,点间距离可视斑点扩散情况 以不影响检出为宜。若因样品溶液太稀，可重复点样，但应待前次点 样的溶剂挥发后方可重新点样，以防样点过大，造成拖尾、扩散等现 象，而影响分离效果。点样时必须注意勿损伤薄层表面2、展开将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂 的深度为距原点5mm为宜，密封，待展开至规定距离（一般为8 15cm），取出薄层板，晾干，待检测。注：展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开 剂，密闭，一般保持15-30分钟。3、显色与检视供试品

13、含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下 检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在 日光下检视。有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在 356nm 紫外光灯下观察荧光色谱。对于可见光下无色，但在紫外光下 有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254nm紫外 光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱。把我的祖传秘方告诉你吧PE（60-90）EtAc/PE=1:2 EtAc/PE/AcOH=15:5:1 EtAc/AcOH/n-Butanol/H2O=2:1:1:18 年来我用这四种体系,没有出现过什么问题.我一直在用的是乙酸 乙酯：环已烷，不断调节比

14、例，直到有满意的Rf值，有拖尾时可能要 加酸或碱，我一般乙酸和三乙胺。我用了好几年了，都还好。不妨一试!铺板 铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造 成的层纹;过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水 = 1:23,硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。研磨匀浆的时间， 根据经验来定，与空气湿度有关，一般通过拿起研棒时匀浆下滴的情 况来判断，越稠越难下滴。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板 涂层的厚度，进一步影响上样量。涂层薄，点样易过载 ;涂层厚，显色 不那么明显。通常，板的质量对薄层鉴别的影响不是很大，影响最大 的是展开剂的配制和展开系统的饱和。点样尽量用

15、小的点样管。如果有足够的耐性，最好只用 1 微升的点样 管。这样，点的斑点较小，展开的色谱图分离度好，颜色分明。样品 溶液的含水量越小越好，样品溶液含水量大，点样斑点扩散大。样品 溶液的溶剂一般是无水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。点好样的薄层 板用电吹风的热风吹干或放入干燥器里晾干。展开剂配制选择合适的量器把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液 充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。绝对不 应该把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。混合不均 匀和没有分液的展开剂，会造成层析的完全失败。各组成溶剂的比例 准确度对不同的分析任务有不同的要求，尽量达到实验室仪器的最高 精确度，比如：取1ml的溶剂，应使用1ml的单标移液管，移液管应 符合计量认证要求，尽管多数时候这不是必须的。展开系统的饱和一 般使用的是双槽的展开缸，一槽用来放展开剂，另一槽可加入氨水或 硫酸。把待展开的板放入两槽间的平台，斜架着，盖上展开缸的盖子。 让展开剂的蒸气充满展开缸，并使薄层板吸附蒸气达到饱和，防止边 沿效应，饱和时间在半个小时左右。展开时难免要打开盖子把薄层板 放入展开剂中，不过对薄层板与蒸气的吸附平衡影响不大，当然动作 应该尽量轻、快。温湿度的控制温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离 越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。湿度的影响，