《石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法（7页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、石蜡切片免疫组化及免疫荧光染色方法1、组织的采集、固定和保存：采取组织后，方法一：4%多聚甲醛（4%PFA） 4OC固定1小时（根据组织大小和致密程度调整固 定时间）或过夜方法二：采用 bouins 固定 RT 2h（ 6-8d tesis） or RT 过夜（成年 tesis）PBS缓冲液洗三次，每次5min，4OC保存于70%乙醇中。2、组织的包埋、切片、展片及保存 ：固定后的样品经梯度乙醇脱水、二甲苯透明,52-54C石蜡包埋，常规切片，切片厚 4 -10ym，贴于处理过的干净载玻片上，37C烤片过夜，之后收集于载片盒中，RT密封保 存。石蜡包埋：保存于4OC 70%乙醇中的组织样品I8
2、0%乙醇 15 minI95%乙醇 15 minI100%乙醇 15min x 2I1/2乙醇1/2二甲苯 15 minI二甲苯透明 5-10 minU2 口胡州 1、2nite-iDH:30 minJ对歸(-)-bhrri歸(2) 1.525hrJ对歸(3 ) 醫JRT霍闵曲菊4nRTsss耳M-E(l) 20 minJMT(2) 20 minJ100%(N20minJ95%(n10 minJ80%(n10 min通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈I切片在PBS中浸泡5 min*2I0.4%Tritonx RT 10 minI切片在PBS中浸泡5 min*33%H2O2 RT 10min切片在
3、PBS5 min*30.25%胰酶RT 10min5 min*3Blocking buffer(3%BSA+5%NGS+0.2%Tritonx-100 in PBS) RT60min倾去 blocking buffer,勿洗一抗 4C overnight in blocking buffer取出切片复温1h，切片在PBS中浸泡5 min*3二抗 in blocking buffer GAR1：200 (GAM1：100)， RT 1h切片在PBS中浸泡5 min*3DAB 显色 5-10mi( 50 微升 A+50 微升 B+900 微升 PBS+5 微升 3%H2O2 )如果是增强型DAB只
4、要1min即可。切片浸入PBS终止显色，HE衬染1s ,玻片架放入泡沫盒，流水冲洗15min，肉眼看到淡淡的紫色即可停止。若颜色太深，可用0.1-0.5%盐酸乙醇分色1 2秒钟(或更久)脱水 85%乙醇 5 min95%乙醇 5 minI无水乙醇 5 minI无水乙醇 5minI二甲苯(1) 10minI二甲苯(2) 10min中性树胶封片，室温干燥保存4、石蜡组织切片的免疫荧光方法：密封保存于RT的组织切片二甲苯(1)20 min二甲苯(2)20 minI100%乙醇 20minI95%乙醇 10 minI80%乙醇 10 minI通风橱晾干，阻水笔在组织周围画圈I切片在PBS中浸泡5 mi
5、n*2I0.4%Tritonx RT 10 minI切片在PBS中浸泡5 min*360min切片在PBS中浸泡5 min*30.25%胰酶 RT lOmin切片在PBS中浸泡5 min*3Blocking buffer(3%BSA+5%NGS+0.2%Tritonx-100 in PBS) RT倾去 blocking buffer,勿洗V一抗 4C overnight in blocking buffer1000RT 1h荧光二抗 in blocking buffer GAR-cy3 1：1000，GAM-488 1：IDAPI （ 1 : 1000请根据二抗说明稀释二抗）切片在PBS中浸泡5 min*3moil 封片，避光 4 C 保存
