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1、bobardxera巴德生物科技有限公司1.目的规范单克隆抗体标记荧光FITC （快速标记法）标准操作程序2. 适用范围适用于本公司抗体标记荧光FITC （快速标记法）操作3. 术语和定义单克隆抗体采用异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate, FITC）。其标记原理：FITC是在荧光素的基础上通过化学反应增加 （异）硫氰酸基团得到的，硫氰酸基团可以和生物活性物质例如蛋白质上的伯胺基团反应形成硫脲键，从而实现对生物活性物质的 荧光标记。4. 职责和权限实验员负责实施本规范，主管负责人监督执行。5. 实验试剂.5.1溶液配制0.01mol/L PBS溶液配制0.01m
2、ol/L Phosphate Buffered Saline，pH 7.40试剂名称配方量批号用量Water1LNaCl (MW 58.44)0.799gKH2PO4(MW 136.09)0.2gKCl (MW 74.55)0.2gNa2HPO4 12H2O(MW 358.14)2.89g调节pH 7.40后，加水定容至1.0L，再调节pH至7.40,过滤备用。&巴德生物科技有限公司巴德生物科技有限公司Storage Buffer, pH 7.40试剂名称配方量批号用量0.01mol/L PBS/BSA0.5%NaN30.1%调节pH 7.40后，加水定容至1.0L，再调节至pH 7.40。&
3、巴德生物科技有限公司5.2其他试剂试剂名称厂家批号活化液（m odifier）淬灭剂（quencher）FITC荧光素6.操作流程6.1抗体活化将抗体用O.Olmol/L PBS稀释为lmg/mL，加入mL活化液（体积比为抗体溶液：反应活化液=10:1）,旋涡振荡器混匀后,室温避光反应10min。6.2与FITC反应形成共轭物将抗体混合液（步骤6.1）加入mg FITC荧光素中（加入量：抗体与荧光素质量比为1:1），在室温条件下避光反应3小时,反应开始时间：至结束时间：；（或2-8度条件下避光过夜）。6.3荧光淬灭向共轭物（步骤6.2）中加入mL淬灭剂（淬灭剂添加量按抗体体积：淬灭剂体积=10:1添加）。混匀后，室温孵育30分钟，去除游离的荧光素的荧光效应。淬灭开始时间 ：至结束时间：。&巴德生物科技有限公司uniifeiii-K：-6.4透析PBS中4度避光透析，3小时换液一次，连续透析8小时。或者PBS中4度避光透析过夜后换液一次，继续透析三小时。6.5保存收集得到的标记抗体（步骤6.4）,上机测试后根据效价，用Storage Buffer按比例稀释后，4C避光保存，有效期一年。
