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1、氟苯尼考在南美白对虾体内药物代谢及残留消除规律郑重莺，丁雪燕，张海琪，薛辉利，姚高华，何 丰 (浙江省水产技术推广总站，浙江 杭州 310012) 摘要：研究了南美白对虾口服氟苯尼考药饵给药后，在血液、肌肉中的残留及消除规律，采 用 Agilengt 1100 型液相色谱仪测定组织中药物含量. 口服给药后血液中氟苯尼考浓度在 1 h 立即达到峰值，药物开始向肌肉组织中运转，血药浓度在1 h后下降，而肌肉中浓度达到峰 值；此后无论血液还是肌肉中氟苯尼考浓度均缓慢下降，到10d后血液中的氟苯尼考不能检 出. 口服氟苯尼考后，在南美白对虾体内吸收快，血药浓度高；药物在肌肉中消除缓慢，维 持时间长.关
2、键词：氟苯尼考；血液；肌肉；药代动力学氟苯尼考(florfenico 1)是种氯霉素类广谱抗菌药物，于1999年被批准投入使用于防治细菌性 疾病，由于其结构中不含氯霉素中抑制骨髓造血机能有关的一no2基团，大大降低了对动物 和人体的毒性，在安全性和有效性方面比氯霉素和甲砜霉素具有明显的优势1. 目前氟苯尼 考已成为专用于水产饲料的替代常规氯霉素抗生素类药物之一，广泛应用于防治细菌性疾 病，国内外已有氟苯尼考在虹鳟(Oncorhynchus mykiss)2、鳕(Gadus morhua)3、中国明对 虾(Fenneropenaeus chinensis)4、中华鳖(Trionyx smells
3、)5和几种淡水鱼(河鲶、湖鲟、湖鳟、 杂交条纹鲈等)6等水产动物上的研究报道. 本次实验首次研究并探讨了氟苯尼考在南美白 对虾血液和肌肉中的代谢情况及合理休药期，为水产用药提供理论依据.1 材料与方法1.1 试样材料氟苯尼考标准品，纯度299.0%, Augsburg公司生产.Agilent1100型高效液相色谱仪(二极管 阵列检测器)，电子天平、离心机、恒温振荡器、真空旋发仪.试验用对虾平均规格8.35cm、7.48g,由杭州下沙周宏水产养殖场提供.配合饲料购自宁波 天邦科技股份有限公司(原料经测定不含任何抗生素)，按2%。比例在空白饲料中添加氟苯尼 考，制成药饵.1.2 方法1.2.1 给
4、药殖场育苗室8m2小型水泥池中进行.对虾放养后第二天开始进食，稳定2d后，开始投喂药 饵，投喂5d后抽样并改喂普通饲料.试验期间饲料1d投喂2次，水深保持3040cm，水 温21.516C，比重1.0020, pH值7.8，并视水质情况适量换水和泼洒少量微生物制剂，及 时清除残饵和死虾.1.2.2 缓冲液、流动相和标准溶液的配制磷酸盐缓冲液(pH值7.0):准确称取磷酸氢二钠7.164g和磷酸二氢钠2.76g,用超纯水中溶 解并定容至100mL，浓度均为0.2molL-1,然后按磷酸氢二钠:磷酸二氢钠=61:39(V/V)的 比例混合即成.流动相：乙腈:水=27:73(V/V).准确称取氟苯尼
5、考10(10.1)mg，流动相定容至10mL，浓度为1mg mL-1，实验过程按要 求用流动相稀释到适当浓度，备用，保存期3个月.1.2.3 样品采集以 5d 药饵投喂结束后的 1h 作为起始时间，从该时刻起按 0.5h、1h 、2h、4h、8h、24h 、48h 、 72h、96h、120h、168h、240h、480h 时间段，每次随机抽取对虾样本10 尾，提取对虾的血 液、肝胰腺、肌肉，于一18C保存备用.为防止血液凝固，放置和提取血液的离心管和针筒 均用 0.2肝素钠处理后使用.1.2.4 样品处理称取泥状样品1.0g于20mL离心管中.加入1mL磷酸盐缓冲液，4mL乙酸乙酯，均质后超
6、 声提取30min, 5000r min-1离心10min,取上清液于另一玻璃离心管中.残渣中再加入4mL 乙酸乙酯，重复提取一次，合并上清液40C水浴氮气吹干，加入1mL流动相，1.0mL正己 烷，涡动2min溶解离心管中的残留物，4000rmin-1离心15min，弃去正己烷，下层过0.22 M m滤膜，待测.1.2.5 色谱条件ODS C18柱；柱温30C ；流速1.0 mLmin-1；进样量20p L；紫外检测波长为224nm；流 动相：乙腈:水=27:73(V/V).1.2.6 回收率的确定将10M gmL-1、20m gmL-1、50p gmL-1氟苯尼考标准液1mL加入空白样品1
7、O.Og, 按1.2.5 方法处理后，上机测定. 每个水平重复5 次.计算绝对回收率.绝对回收率=(预处理后样品的药物峰面积宁溶于流动相的药物峰面积)X 100%.2 测定结果2.1 氟苯尼考线性范围和灵敏度用浓度为0.05、0.5、1.0、5.0、10.0M gmL-1标准液上机测定.结果表明，氟苯尼考在0.0510.0M gm L-1范围内线性关系良好，相关系数r=0.99999.将引起三倍基线噪音的药物浓 度定义为最低检测限.该方法的最低检测限为0.05m g mL-1.2.2 回收率的测定以1m g g-1、2m g g-1、5m g g-1 3个水平分别测定在肌肉、血液中的回收，每个
8、水平 重复 3 次，求出平均回收率，如表1 所示.表 1 氟苯尼考在 2 种组织中的回收率浓度/ (“g* g肌肉/ %血液/ %1.01000.9695.30.232.097.82.1596.41.055.098.01.9893.01.21平均值98.694.92.3 氟苯尼考在两种组织中的浓度变化 表2列出了南美白对虾喂药后，不同时间的肌肉、血液样品内经液相色谱检测所得平均药物 浓度值；氟苯尼考在肌肉、血液中药时曲线见图1.表2 氟苯尼考在2种组织中的浓度时间/ h肌肉/ (ugg-1)血液/ (ugg-1)0.50.150.010.530.0110.120.001.080.1320.35
9、0.030.990.0240.360.030.860.0280.250.010.520.02240.150.000.400.06480.130.010.350.02720.120.010.320.02960.110.010.300.011200.110.010.370.001680.110.010.090.002400.110.00N.D.4800.070.00N.D.2.4氟苯尼考在南美白对虾体内的消除情况 南美白对虾在口服氟苯尼考后，0.5h后即可在肌肉、血液中检 测到药物的存在，浓度分别为0.15购-1和0.53购-1，在肌肉中4h左右药物浓度达到最高，为0.36购-1 ； 血液中在1h
10、左右药物浓度最高浓度为1.08购。-1，随后浓度即开始下降.氟苯尼考在肌肉中消除较慢，20d 时仍有低量检出，为0.07RgQ-1 ;在血液中消除较肌肉中稍快，在168h仍可检测到氟苯尼考药物残留存在， 为0.098 gg1，但在第十天开始则未检出.3 讨论3.1 氟苯尼考在南美白对虾体内代谢特征 氟苯尼考在南美白对虾体内吸收速度较快，在其他动物体内的吸收速度也都很快，国内蒋红 霞等人7研究其在猪体内代谢、李秀波等人8研究其在绵羊体内代谢时，血药浓度均于静 注后5min达到峰值.氟苯尼考在中国对虾4体内的血药浓度达到峰值后，维持很短的时间 后开始下降，以15mg kg-1的剂量注射2h后血药浓
11、度已降至lp g ml-1以下，但是在绵 羊和猪体内以20 mg kg-l的剂量静注后则能维持血药浓度在lp gml-l以上可达712h.根 据杨先乐等人9报道中华绒螯蟹肌注环丙沙星后，血药浓度立即达到峰值，房文红等研究 肌注诺氟沙星在斑节对虾体内的代谢中报道血药浓度于给药后12 min内达到峰值.说明 药物在甲壳类中的代谢比较快，这可能与其特殊的水生环境和开放式循环系统有关.在喂药后前8h内肌肉、血液代谢较快，8h后，速度明显放慢，肌肉中维持在O.lp gg-1 左右，含量变化不大.血液中维持在0.3p gg-1左右，均在一个比较高的水平上.当药物 代谢到10d后，血液未检出有氟苯尼考，当药
12、物代谢到20d时，仍可在肌肉中检出，含量为 0.07p gg-1，说明氟苯尼考在肌肉蛋白结合率较高，代谢需要较长时间本次试验中，氟苯 尼考在南美白对虾体内代谢时间，与所报道的其在肉鸡10、猪7等体内代谢时间相比，消 除速度不是很快. 比较其他药物在甲壳类中的代谢时间，杨先乐等人9报道盐酸环丙沙星在 中华绒螯蟹体内的药物半衰期也远大于该药在其他动物体内的半衰期. 对于此间差异，杨先 乐认为，甲壳类这种低等的水生动物主要通过触角腺和肝胰腺对药物进行排泄和降解，而鱼 类等可以通过肾脏、呼吸器官等进行扩散消除，哺乳动物还可以通过肾脏等器官的主动运转 对药物加以消除，因而不同动物种属间代谢器官的差异，造
13、成其对药物代谢消除机能的差别. 表2 氟苯尼考在 2种组织中的浓度图1 氟苯尼考在肌肉、血液中的药时曲线图3.2 氟苯尼考在南美白对虾体内休药期探讨制定渔药休药期是为了保障动物食品的安全性，通常根据国家规定的最大残留限量(MRL)标准和动物对药 物的残留消除规律来确定.欧盟和我国规定鱼类肌肉中氟苯尼考最大残留限量(MRL)为1pgg-1，而日本对 冻虾仁中氟苯尼考最大残留限量标准为0.1pgg-1.本次实验中，在给药温度为21.516C时，连续5d投喂 含2%。的氟苯尼考药饵(相当于4060mgkg-1给药量)的情况下，不需要制订休药期即可达到欧盟和我国的 最大残留限量.而对于出口日本较多的冻
14、虾仁来说，168h(7d)时肌肉和血液中含量达到0.11、0.098 gg1 仍高于日本肯定列表中对冻虾仁氟苯尼考限量(0.1 Rgg-1 )的要求.20 d时肌肉中含量达到0.07 g.g-1，血液 中未检出，已符合日本肯定列表中对冻虾仁氟苯尼考限量(0.1Mgg-1)的要求.考虑到出口水产品的安全性， 因此在此给药剂量和环境条件下，建议氟苯尼考在南美白对虾中的休药期大于20 d.参考文献：1 杜向党，阎若潜，沈建忠，等.氯霉素类药物耐药机制的研究进展J.动物医学进展,2004, 25(2):27-29.2 Lunden T, Micttinen S, Lonnstrom L G, et a
15、1. Effect of f1orfenico1 on the immune response of rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)J. Veterinary and Immunopatho- 1ogy， 1999， 67:317-325.3 O1e B S. Efficacy of ova11y administered f1orfenico1 and oxo1inic acid for the treatment of vibriosis in cod(Gadus morhua)J. Aquac， 2004， 235:27-35.4 李静云，王群，李健，等.氟苯尼考在中国对虾组织内的代谢动力学及残留消除规律J.水产学报,2004, 28:63-68.5 朱丽敏， 杨先乐， 林启存， 等. 肌注和口服氟苯尼考在中华鳖体内残留分析及药代动力学 J. 水产学报， 2006， 30(4):515-519.6 Chue V， Larry J S， Guy R S， e1
