肌钙蛋白综述资料

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1、肌钙蛋白综述资料肌钙蛋白(Troponin. Tn)是横纹肌收缩的重要调节蛋白，存在于心肌和骨骼肌中,由三个 亚基组成：肌钙蛋白C(TnC),肌钙蛋白T(TnT)和肌钙蛋白l(Tnl)。它们和原肌球蛋白一起 通过调节Ca2+对横纹肌动蛋白ATP酶的活性来调节肌动蛋白和肌球蛋白的相互作用。肌钙蛋 白在循环血中的半衰期为大约数小时，由肾脏排出体外。游离cTnl在循环血中的半衰期大约 为67 min。TnC,分子量为18000,呈晶体结构，是肌钙蛋白的Ca2+结合亚基。骨骼肌和心肌 中的TnC是相同的。TnT,分子量为37000,可能为不对称蛋白结构，是原肌球蛋白结合亚基。TnT有三种 亚型：快骨骼

2、肌亚型、慢骨骼肌亚型和心肌亚型。它们在骨骼肌或心肌中的表达分别受不同 的基因调控。Tnl,分子量为21000，是肌动蛋白抑制亚基。它有三种亚型：快骨骼肌亚型、慢骨骼 肌亚型和心肌亚型。这三种T nl亚型分别源于三种不同的基因。心肌亚型(cT nl)相对两种骨 骼肌亚型约有40%的不同源性。AMl后cTnl的释放形式(游离形式还是与其他肌钙蛋白结合 成复合物，氧化形式还是还原形式)迄今为止还不完全清楚。其连同肌钙蛋白T和肌钙蛋白C 构成结构复合物。在心脏中的细胞间钙信号肌动蛋白-肌球蛋白相互作用的转化过程中起着 重要作用。I是一类调节肌肉收缩功能的蛋白，人的cTnl与骨骼肌中的形式在结构上有所不

3、 同，它的氨基端上多了一个氨基酸残基。使得cTn I成为一个特异性的标志物。在心肌梗死 (AMI)发生后，cTnl便迅速释放入血液循环中。释放的模式和CK-MB相同(在AMI发生 4-6个小时以后)。然而，CK-MB的水平在36-48小时后恢复正常，cTnI可以持续升高6-10天。 在正常健康人体内，cTnI水平是非常低的，在骨骼肌受损的病人体内也检测不到cTnI。正常 人血清中cTnI平均浓度0. 06 ng / ml。当心肌轻微损伤时其浓度明显升高，可达1001300 ng/ml。近年来临床心血管疾病研究结果表明，cTnI是心肌梗死(AMI)和不稳定心绞痛 (UAP)、围手术期心肌损伤等疾

4、病的高灵敏、高特异的血清学指标。心肌肌钙蛋白在临床诊断中的应用1对心肌损伤的诊断在诸多诊断急性心肌梗死(AMI)的临床生化指标中，CK-MB曾一度被 认为是诊断AMI的“金标准”，已广泛应用多年。随着对心肌肌钙蛋白(cTn)深入研究，无论 是对心肌的特异性还是诊断敏感性， CK-MB 的地位都受到了严重挑战。 cTn 被认为是目前 最好的确定标志物，正逐步取代CK-MB成为AMI的诊断“金标准”。患有各种冠状动脉疾患的病人必然会发生心肌细胞损伤。有些病人的临床表现可能不完全符 合WHO关于AMI诊断标准(不稳定心绞痛就是其中之一)，但却伴有某些心肌损伤标志物(如 cTnT等)升高，从而导致细胞

5、内的组成成分渗漏入外周血循环。这使得心肌细胞损伤标志物 的检测成为可能。cTnT和cTnl在AMI后(36 h)血中浓度很快升高，和CK-MB(38 h) 相当或稍早，它们测定的特异性和灵敏度明显高于CK-MB。cTn具有相当长的诊断窗口期 (cTnl 79 天， cTnT 更长)。 cTn 对急性胸痛病人(无论有无骨骼肌损伤)的诊断均优于 CK-MB。研究表明：在对AMI的诊断方面cTnl和cTnT无显著差异，都能鉴别出CK-MB 所不能检测出的心肌损伤。相对cTnT而言,cTnl显示出较低的初始灵敏性和较高的特异性。 就上升的相对值来说，cTnT比cTnl高；在不稳定心绞痛病人中cTnT上

6、升的频度比cTnl 高。在AMI后30天死亡率的预报方面，cTnT优于cTnl。无论是不稳定心绞痛还是无Q波的心肌梗死，最初24小时的cTnT最具预后价值。对不稳 定冠状动脉疾患病人的随访发现，cTnT和运动试验两项都正常者，死亡或AMI的仅1%； 若异常，死亡或AMI可达50%。对急性冠状动脉疾患(包括心肌梗死)病人的随访研究发现， cTnT小于0.1 pg/L的病人的死亡率仅4%,相比而言，大于0.1 pg/L的病人的死亡率则大 3 倍，发生休克的百分率大3 倍，发生充血性心功能衰竭的百分率也增加1倍。对 cTnI 的 观察研究得到了类似的结果。不稳定冠状动脉疾患病人中，cTnl大于0.1

7、 pg/L的病人死亡 率较cTnl小于0.1 pg/L的病人的死亡率大3倍多。因此，任何急性冠状动脉疾患病人同时 测得 cTn 增高，应视为高危险性。2. AMI后溶栓治疗的指示物静脉注入溶栓药物是近年来常用的AMI治疗方法，在治疗后判 断是否出现再灌注也成为临床医生最关注的问题之一。在出现再灌注时cTnT往往有双峰变 化：第1天由于梗塞开通后，血流进入病变部位，将游离的cTnT冲洗入血液而出现第1个 峰；在第4天可观察到第2个较小的峰(主要来自cTn复合物中的cTnT)。这两个峰值的比 率有助于判断是否出现再灌注：如第1峰值大于第2峰值，即比值1.0,往往说明出现再 灌注。早期冠状动脉再灌注

8、的指示物CK-MB、肌红蛋白(Mgb)、cTnT和cTnl在血栓治疗 成功后的早期动力学比较研究表明，四种标志物在溶栓后释放的早期动力学基本相似，但是 cTnT和cTnl在90 min的冠状动脉再灌注平均指数显著大于CK-MB和Mgb。3. 对围手术期心肌梗死的诊断 冠状动脉搭桥术后心肌梗死的诊断在心脏手术中有重要作 用。 cTn 是围手术期心肌梗死的敏感和特异的标志物，能够鉴别出没有达到常规围手术期心 肌梗死判断标准的微小的围手术期心肌损伤。4. 对心肌炎的诊断与CK活性相比，心肌炎时cTnT因其相对较高的血清检测值和较长的上 升时间而具有较高的检测敏感性，血清cTnT可作为急性心肌炎的诊断

9、标志物。5. 与肾功能衰竭的关系 缺血性心脏病是晚期肾病病人发病和死亡的主要原因之一，占总死 亡率的大约40%；这些缺血性心脏病中的大约25%发展为AMI。因此，在晚期肾脏病病人 的临床治疗中，心血管并发症的诊断成为至关重要的问题。在晚期肾脏病病人血清中， cTnT 和cTnl的检测值存在着差异。晚期肾脏病病人的cTnT升高的可能原因有三：检测方法的 交叉反应；cTnT在骨骼肌中的重表达；存在着微小心肌损伤。第二代cTnT分析法不会因 为cTnT在晚期肾脏病病人骨骼肌中的重表达而产生假阳性，从而排除了分析法的交叉反应。 研究结果认为，晚期肾脏病病人血清中cTnT的升高可能是由于存在一定程度的心

10、肌损伤。6. 与骨骼肌损伤的鉴别诊断 心肌和骨骼肌细胞关系密切。在胚胎期，这两种肌肉的基因表 达有多处相同之处，但在最终分化时表达出现不同。因此骨骼肌损伤病人中的心肌损伤标志 物检测的特异性令人关注。由于第二代cTnT分析法已排除了分析法的交叉反应。因此，cTn 可作为骨骼肌损伤病人的心肌损伤诊断时的较好的标志物。7. 甲状腺机能减退病人心肌损伤的诊断 甲状腺机能减退导致了胆固醇的上升，使病人易患 冠状动脉疾病以及AMI。同时，甲状腺机能减退病人常有抽筋、肌痛等骨骼肌损伤症状。因 此，这种病人的血清CK、CK-MB、都有不同程度的增高。此时，cTn是甲状腺机能减退病 人心肌损伤诊断时较好的标志

11、物。8. 药物作用观察 cTn 还被用于观察某些药物的药理作用与心脏的关系，了解是否改善或者 加剧心肌缺血现象。9其他 如心脏移植后的排斥反应或急性心功能衰竭时，也常常出现cTn增高而CK-MB无 异常的现象。检测方法：肌肌钙蛋白l(cTnl)是组成心肌肌钙蛋白复合物的亚单位之一，具有高度的心肌特异性, 被认为是诊断心肌损伤的“金标准”。快速、灵敏、准确测定人血中的cTnl对于诊断急性心 肌梗死、急性冠状动脉综合征的危险分层、监测各种因素所导致的心肌损伤、以及心脏事件 的判断预后等有着重要的意义。目前，测定cTnl的方法主要有放射性同位素免疫分析法 (RIA)、酶联免疫吸附试验法(ELISA)

12、、化学发光免疫分析法(CLIA)、荧光免疫分析法(FIA)、 以及金标免疫分析法等。其中，RIA法因有放射性污染的危险已基本不使用；CLIA法和FIA 法灵敏度较高，但仪器价格偏高，国内在这方面的研究相对较少；金标免疫分析法主要应用 于制作定性分析用的免疫层析试纸条，现在国内各医院多使用国外公司的产品，价格昂贵, 国内学者虽在这方面有不少研究，但其灵敏度不高，难以推向市场；目前国内研究和应用最 多的方法是ELISA，该方法灵敏度适中，使用相对简便，仪器价格也不很高，但存在测定 周期偏长、灵敏度相对较低、检测范围较窄等不足。血清cTnl测定的方法学cTnl检测方法cTnl的测定始于20世纪80年

13、代中期,多采用双抗体竞争放射免疫法和竞 争性ELISA测定法。有研究者将金标记或硒标记单克隆抗体与免疫层析技术相结合,用纸条 法定量或半定量床边检测cTnl浓度,最低检测值为014 ug/ L。目前cTnl的检测多采用化学 发光法，用化学发光物质标记后作为检测抗体,大大提高了测定的精确性和敏感性，但现在通 用的cTnl测定方法尚无标准化，不同的方法采用不同的抗体识别位点，所以在使用商品cTnl 试剂盒时,必须研究商品试剂的特性。1. 用金标单抗法定性检测血清肌钙蛋白I /肌红蛋白/肌酸激酶同工酶(cTnl/MyO/CK MB)。原理：肌红蛋白是肌肉组织中的一种亚铁血红素蛋白，分子量较小。肌红蛋

14、白是低分子量胞浆 蛋白，当肌肉细胞损伤后，先于其他心肌标志物释放到血液中，12h后开始在血液中升高, 12h回落至正常水平。肌红蛋白具有较高的灵敏度，但不够特异。肌酸激酶同工酶是存在于心肌组织中的一种二聚体，参与肌肉组织的新陈代谢。肌酸激 酶同工酶分子量是85745。CK MB主要分布于心肌中。当心肌损伤后，CK MB释放到 血液中，38h后开始升高，可持续35天。当心肌损伤时，三种成分在几小时内释放到血液中，并持续不同的时间，以上三项联合 检测能尽早检测出心肌是否受损。现状和局限：据有关实验结果表明：20例AMI患者cTnI阳性率100%, MyO阳性率 95%, CK MB阳性率70%，C

15、K MB结果与有关文献报道相似2。非AMI组经最后诊断冠心病13例，风心病1例，心绞痛4例，病毒性心肌炎2例，其中1例心绞痛患者 cTnl阳性，该类患者临床治疗效果较差，易发展成AMI。以往AMI的诊断主要依靠患者的临床表现、心电图改变和血清酶的升高，典型的病例 不难确诊，但以上检查结果阴性的患者，虽然可能不是AMI，但却可能是不稳定型心绞痛或 其他形式的急性冠脉综合征3，单纯依靠上述检查方法，容易漏诊或误诊。现开展的三 项联合定性检测，操作简单，不需要特殊设备，对未开展其他早期心肌损伤标志检测的基层 医院，更适合于开展此项检验。心肌梗塞联检芯片设计原理：MB：肌红蛋白广泛而丰富地存在于肌肉中

16、，分子量小，非常容易释放入血，急性心肌梗死病人有先兆胸痛 后2小时升高。6-9小时达高峰，24-36小时恢复至正常水平。到目前为止，它是在急性心肌梗死发生后最 早的可测指标，同时也是冠脉再通后再梗阻敏感且快速的标志物，适于作为诊断心肌坏死的早期标志物， 其阴性预报值极高，接近100%，若发病4小时未见升高，则AMI可能性极低，若为阳性，确不一定是 AMI，可能因骨骼肌损伤或凡肾脏排泄功能异常的疾病所致。MB于2430小时内经肾脏清除消失，如 果患者接受血管再通治疗成功，一般应于24小时左右降到正常值，反之，临床可利用MB这个特点判断 患者是否再发血管阻塞。cTnl： cTn是心脏横纹肌收缩的重要调节蛋白，由三个亚基组成：肌钙蛋白C(TnC)，肌钙蛋白T(TnT) 和肌钙蛋白I(Tnl)。其中只有心肌肌钙蛋白I(TnI)是一种惟一存在于心肌中的收缩蛋白，未发现在心肌外 的其他组织出现，具有心肌特异性,而心肌TnC和骨骼肌TnC相同，