《细胞转染的步骤》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞转染的步骤（2页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、【试剂与仪器】 1.小牛血清。2 双抗溶液(链霉素 10+ 青霉素 10 单位）。 DEM 培养基。4转染试剂（ LIPOFECME200 )。5 细胞培养基( DMM+10%NC)。6 PBS 。7 .无血清培养基。8 .胰酶( rysin )。 培养皿,移液管,量筒,恒温水浴箱，离心机,15ml 离心管，微量移液器,荧光显微镜和 CD。【操作步骤】 1转染前一天，胰酶消化细胞并计数，细胞铺板，使其在转染日密度为90%。细胞铺板在 0.5ml 含血清,不含抗生素的正常生长的培养基中。2 对于每孔细胞,使用 50l 无血清 DMEM 培养基稀释 0.8-.0g DN 。多孔操作可以批量制备。.
2、 对于每孔细胞，使用0 DME 培养基稀释 3 LIPOFECAMIN 200 试剂。LIOFECAMIE 2000稀释后,在 5 分钟内同稀释的DA混合。保温时间过长会降低活性。4. 混合稀释的 DNA（由第步）和稀释的LIOFECTANE 200 （由第 步）。在室温保温 0 分钟。注意:溶液可能会混浊,但不会影响转染。复合物可以在室温保持小时稳定。5. 直接将复合物加入到每孔中,摇动培养板，轻轻混匀。注意：如果在无血清条件下转染,使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板。在加入复合物前移去生长培养基,替换为 0.5l 无血清培养基。6. 在 7 , 5 的 CO 中保温2-48小时,无须去
3、掉复合物或更换培养基或者在45 小时后更换生长培养基也不会降低转染活性。. 在细胞中加入复合物 24-72 小时后,分析细胞抽提物或进行原位细胞染色，检测报告基因活性。这依赖于细胞类型和启动子活性。对稳定表达,在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素。进行稳定表达需要数天或数周。内容总结()【试剂与仪器】 1 小牛血清（）细胞铺板在.5l 含血清，不含抗生素的正常生长的培养基中(3). 直接将复合物加入到每孔中，摇动培养板，轻轻混匀（4)注意:如果在无血清条件下转染,使用含血清的正常生长培养基进行细胞铺板(5）在加入复合物前移去生长培养基,替换为 0ml 无血清培养基（6）对稳定表达，在开始转染一天后将细胞传代至新鲜培养基中，两天后加入筛选抗生素(7）进行稳定表达需要数天或数周
