《维生素C的定量测定实验报告》由会员分享，可在线阅读，更多相关《维生素C的定量测定实验报告（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、生物化学实验报告维生素C的定量测定（2, 6-二氯酚靛酚滴定法）一、实验目的掌握2, 6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法二、实验原理维生素C又称抗坏血酸。在1928年从牛的肾上腺皮质中提出的结晶物质，证明对治疗 和预防坏血病有特殊功效,因此称为抗坏血酸。还原型抗坏血酸能还原染料2,6-二氯酚靛酚钠盐,本身则氧化成脱氢抗坏血酸。在酸 性溶液中,2,6-二氯酚靛酚呈红色,被还原后变为无色。因此,可用2,6-二氯酚靛酚滴定样品中的还原型抗坏血酸。当抗坏血酸全部被氧化后, 稍多加一些染料,使滴定液呈淡红色,即为终点。如无其他杂质干扰,样品提取液所还原的 标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸
2、量呈正比。三、实验器材1、松针、菜椒、大枣；2、取液器3、容量瓶100ml4、微量滴定管5ml5、电子天平6、研钵、烧杯数只7、漏斗两个四、实验试剂1、2%草酸溶液：称取草酸8.0311g，溶于400ml蒸馏水中；2、1%草酸溶液：称取草酸4.0254g,溶于400ml蒸馏水中；3、标准抗坏血酸溶液；4、1%HCl；5、0.1% 2,6-二氯酚靛酚溶液。五、实验操作1、样品的提取 松针：从南京大学教学楼前摘取的新鲜松针,用水清洗干净,吸去表面的水。准确称取2.0004g，放在研钵中加入1 %HCl溶液5ml 一起研磨，研细。放置片刻，将提取液转入100ml 容量瓶中，如此反复几次加入提取液。最
3、后用1 %HCl溶液定容，混匀，（每10ml样液中含松 针0.20004g）静置10min,过滤，备用；菜椒和大枣：用水洗净，吸去表面水分。准确称取得大枣2.0025g、菜椒1.9963g。分 别加2%草酸10ml于研钵中，研细，转移提取液于100ml容量瓶中并用2%草酸溶液定容。（这 样，每10ml样液中含有枣0.20025g，或者菜椒1.9963g）静置10min,过滤，弃去最初几 毫升滤液，备用；2、滴定标准抗坏血酸溶液：准确吸取标准抗坏血酸溶液1.0ml加9ml 1%草酸在100ml锥形瓶 中，微量滴定管以0.1%2, 6-二氯酚靛酚滴定至淡红色，并保持15s即终点；样品滴定准确称取1
4、0.0ml样品溶液，放入100ml锥形瓶中，用与标准抗坏血酸溶液滴 定相同的方法滴定；六、数据记录标准维生素C松针大枣菜椒2，6二氯酚靛酚/ml0.260.571.120.480.260.561.110.48七、数据计算由标准液滴定数据求出1ml染料相当于多少mg抗坏血酸:T = 0.1mg / 0.26ml= 0.385 mg/ml计算每100g样品中含抗坏血酸的质量VT公式：m 二 一 x 100m0其中：m 100g样品中含抗坏血酸的质量；V 滴定时所用去染料的体积数；T 每毫升染料能氧化抗坏血酸质量数，0.385mg/ml；mo 10ml样液相当于含样品之质量数。松针：m = 0.56
5、5 x 0.385 一 0.20004 x 100 = 108.7mg /100g大枣：m = 1.115 x 0.385 一 0.20025 x 100 = 214.4mg /100g菜椒：m = 0.48 x 0.385 一 0.19963 x 100 = 92.6mg /100g八、实验讨论与注意事项1、维生素C是人体必需的营养素，其生理功能首先是作为酶的辅因子或辅助底物参与 多种重要的生物合成过程，目前已知至少有8种酶保持高度活性需要维生素C。其次，维生 素C作为抗氧化剂可清除O2-、0Cl3-、OH-、NO-、N02-等自由基，在保护DNA、蛋白质和膜 结构免遭损伤方面起着重要作用。
6、因为维生素C可以医治坏血病，因此又叫抗坏血酸。维 C主要存在于蔬菜和水果中，通常水果大都以生食为主，维C损失甚少，而蔬菜绝大多数在 食用前需加热熟制，会导致维C不同程度的丢失。在所有维生素中，水溶性的维C最不稳定， 在收获、加工、烹饪及贮藏期间容易被破坏，特别是在有O2存在或光、热、碱性环境中极 易被破坏。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。维生素 C是具有L系糖型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及 许多水果（如橘子、苹果、草莓、山楂等）、蔬菜（黄瓜、洋白菜、西红柿等）中的含量更 为丰富。2、维生素C具有很强的还原性。它可分为还原
7、性和脱氢型。金属铜和酶（抗坏血酸氧 化酶）可以催化维生素C氧化为脱氢型。根据它具有还原性质可测定其金属含量。3、整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过2min。滴 定所用的染料不应小于1ml或多于4ml，如果样品含维生素C太高或太低时，要酌情增减样 液用量或改变提取液稀释度。4、干扰滴定因素有：若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加1 ml氯仿，到 达终点时，氯仿层呈现淡红色。Fe2+可还原二氯酚靛酚。对含有大量Fe2 +的样品可用8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此 时Fe2+不会很快与染料起作用。样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时 染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于 15s 内不消退为终点。5、本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。
