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1、无细胞表达系统的发展及优势介绍1964 年有两个人开创了体外蛋白表达的先河，这两个人的名字大家必定不会陌生马太和 尼伦伯格。因为他们的创新思维让人类破译了编码氨基酸的64 种翻译密码子。从此，体外 蛋白表达开始为科学界所关注，不过彼时这个系统蛋白表达量低、持续时间短、稳定性差 使其未能得到进一步发展。到 80 年代中期 Spirin 等对其进行优化提高了蛋白合成产率之后，体外蛋白表达系统无细 胞表达系统，开始为生物工程领域所逐步重视，逐步发展出多种类型的无细胞表达体系。常 用的有四种：大肠杆菌抽提物无细胞表达系统、酵母抽提物无细胞表达系统、小麦胚芽抽提 物无细胞表达系统和兔网织红细胞抽提物无细
2、胞表达系统。利用细胞抽提物（比如大肠杆菌、酵母细胞、小麦胚芽、兔红血球细胞等）提供RNA聚合酶、 tRNA、核糖体、氨基酸、起始因子、延伸因子、终止因子等物质，添加表达模板质粒或PCR 产物，并不断提供反应底物氨基酸、能量-ATP等物质，同时通过透析等手段去除反应副产 物，在体外环境中进行蛋白的表达，这项技术称为无细胞表达技术。无细胞表达的几大重磅级优势：1. 无细胞表达系统最大优势是避开了细胞内环境对细胞表达的影响，可以人为控制反应条 件和进程。金开瑞生物的无细胞表达系统可对系统进行各项优化，如 Tag 优化、 M 优化、 K 优化，以此得到最优表达条件。11 h 445 fl对 yua3
3、蛋白的 Tag 优化对 VACV I5 蛋白的 M 优化12 小时，节省了不少时间成本，为那些着急毕业的实验小伙伴解决了燃眉之急。3. 对常规细胞内表达难以表达的蛋白也可轻松解决，例如膜蛋白和毒性蛋白等。哺乳 动物基因组的近三分之一由膜蛋白组成，其中约一半可以成为药物靶标，研究这些靶标膜蛋 白，开发潜在的生物靶向药物，对疾病的致病机理及药物开发具有重要意义。I 16.0七次跨膜蛋白 ADRB2 的表达毒性蛋白ExoU的表达4. 可以制备蛋白复合物，研究蛋白的相互作用。无细胞系统表达的蛋白可用于下游 pull-down 及凝胶迁移试验，研究蛋白-蛋白及蛋白-核酸相互作用。5. 可在特定位点插入非天然氨基酸。在特定位点插入非天然氨基酸，对重组蛋白类药 物的研发具有重大意义。CcnnFoaiiBmin&-acy1 tRNA ifrfthctnw-yjfflrw-JAfl 1RHA synthEfiawCanonical amina addCDn-DniacItRNAUnn址曲非天然氨基酸引入原理6.可用于表达类颗粒病毒。这个表达产物既具有引起免疫响应的能力，又不含遗传物 质。所以无法复制，是一类理想的病毒类疫苗。
