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1、专题 2 微生物的培养与应用课题 2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数1. 尿素（分子式CO（NH2）2_）是一种重要的氮肥，农作物不能 （能，不能）直接吸 收利用，而是首先通过土壤中的细菌将尿素分解为氨（C02）。能分解尿素的细菌 能合成脲酶。2. 选择培养基是指允许特定种类的微生物 牛长而同时抑制或阻止 其他种类微生物牛 生长的培养基。选择培养基的选择性条件（限制性条件）包括 营养、温度、Ph 等。举一反三 写出分离出下列微生物的选择性条件1)将土壤中的固氮菌分离出来不加氮源的培养基2)将土壤中自养微生物分离出来不加碳源的培养基3)筛选出抗青霉素的微生物加入青霉素的培养基4)筛选出耐高浓度
2、食盐的微生物一加入高浓度的氯化钠3. 在统计菌落数目时常用显微镜直接计数法或稀释涂布平板法 细菌的数量还可以 滤膜法计数。4当 稀释度足够高 时，培养基上的一个标准菌落来源干 稀释液中的一个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板进行计数。5. 每克样品细菌数=（C/V）XM （C菌落平均数，V涂布稀释液的体积，M代表稀释倍数）_。6. 菌落数往往比活菌数少，原因是当2个或多个细菌连在一起时只形成 一个菌落。7. 土壤微生物主要分布在距地表 3-8 cm&分离不同的微生物采用不同的稀释倍数，其中细菌为104、105、106倍，放线菌为103、104、105倍，真菌为 102、
3、103、104倍。培养不同微生物需要不同温度，其 中细菌一般在30-37 C培养，放线菌一般在25-28 C培养，霉菌一般在25-28 C 培养。9. 在菌落计数时每隔_24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定 时的记录作为结果。 在一定条件下同种微牛物表现出稳定的菌落特征，包扌舌菌落的形状、大小、隆起的程度、颜色等，是区分菌种的主要依据。10. 对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学 的方法。例如：在尿素培养基中加入酚红 指示剂，若培养基变红，说明细菌能分解尿素：大肠杆菌在固 体培养基上培养，加入 伊红-美蓝菌落呈现黑 色。鉴别培养基：在培养基中加入化学物质或指示剂，使培养后会发生某
4、种变化，从而 区别不同类型的微生物。课题 3 纤维素分解微生物的分离1. 纤维素是一种由葡萄糖相连而成的 含量最丰富多糖类化合物。2. 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素在纤维素酶酶的催化作用 分解。C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶3刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，红色复合物无法形成，出现以 纤维素分解菌 为中心的 透明圈，我们可以通过 是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。4. 实验流程选择培养、梯度稀释、将样品涂布在鉴别纤维素分解菌的培养基上、筛选产生透明圈的菌 落纤维素分解菌选择培养基属于液体（液体、固体）培养基。纤维素分解菌鉴别培养基属于固体（液体、固体）培养
5、基。5. 刚果红染色法染色法优点缺点颜色反应基本上是纤维操作繁琐方法一素分解菌的作用刚果红会使菌落之间发生混杂操作简便不存在菌落混1.产生淀粉酶的微生物也产生模糊透明圈方法二杂问题2.有些微生物能降解色素，形成明显的透明圈。6为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。7.纤维素酶的测定方法，一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素产生的葡萄糖含量进行定量测定。8. 填表比较比较项目分解尿素的细菌纤维素分解菌选将细菌涂布在只有将细菌涂布在只有择原理尿素做氮源的选择纤维素粉做碳源的培培养基上选择培养基上养培养基类型固体培养基液体培养基基目的筛选菌株选择培养在细菌分解尿素的化学反应刚果红可以与纤维素形成中，细菌合成的脲酶将尿素红色复合物，当纤维素被鉴分解成了氨，氨会使培养基纤维素酶催化分解后红色定原理的碱性增强，pH升高。在培复合物无法形成，培养基培养基中加入酚红指示剂，如上就会出现以纤维素分解养基果pH升高指示剂会变红菌为中心的透明圈观察菌落周围是否出现观察菌落周围是否有着色的现象环带出现来鉴定尿素分解菌透明圈来筛选纤维素分解菌方法脲酶检测法刚果红染色法
