革兰氏染色法

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1、革兰氏染色法革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884 年 由丹麦医师、细菌学家 Christain Gram 创立。细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色， 在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌 分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+）,后者为革兰氏阴性菌（G ）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红 等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌 和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧 菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。革兰氏阳性 菌对青霉素敏感，革兰氏阴性菌对链霉素

2、敏感。可根据革兰氏染色法 鉴别不同菌种并对症下药。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多 差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的 核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢， 不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染 色反应的主要依据。另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同 PH 条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴 性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下 进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时， 则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫碘复合物的通

3、 透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱 色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。革兰氏染色原理：G +菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱 色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。 呈紫色。6一菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩， 其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁， 蕃红染液复染后呈红色。革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具 体操作方法是：1）涂片固定。在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干 净的载玻片上涂布均匀，固定。2）草酸铵结晶紫染1分钟。3）自来水冲洗，去掉浮色。4）用碘-碘化钾溶液媒染1分钟，倾去多余溶液。5）用中性脱色剂如乙醇（95%）或丙酮酸脱色，革兰氏阳性菌 不被褪色而呈紫色，革兰氏阴性菌被褪色而呈无色。6）用蕃红染液复染1分钟，革兰氏阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴 性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌即被区别开。