培养基制备实验报告

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1、文档从互联网中收集，已重新修正排版，word格式支持编辑，如有帮助欢迎下载支持。培养基制备实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法2. 掌握培养基的配置原则和方法。3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又 称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖 所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭

2、菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的 效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过 加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气 从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出， 压力增大，沸点升高，获得高于100C的温度导致菌体蛋白 凝固变性，而达到灭菌的目的。三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、lmol/L的NaOH 和 HCl 溶液。2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、 试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花 等。四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1玻璃器

3、皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培 养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中用毛刷刷洗，然后用 自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再 用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘 干后备用。2灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可 用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内 加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花 （勿用脱脂棉），它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入 口中。塞入此小段棉花应距管口约 0.5cm 左右，棉花自身长

4、度约115cm。塞棉花时可用一外围拉直的曲别针、将少 许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而 又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉 花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45C角，折叠纸条包住尖端， 用左手握住移液管身，有手将移液管压紧在桌面上向前搓 转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭 菌。（二）液体及固体培养基的配制过程 1液体培养基配制（1）称量（假定配制1000ml培养基）按培养基配方比例依次准确地称取30g牛肉膏、10.0 g 蛋白胨、5. 0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中.牛 肉膏常用玻棒挑取，放在小

5、烧杯或表面皿中称量，用热水溶 化后倒入烧杯。（2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约 700ml）， 用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，将药品完全 溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；如果配制固体 培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化， 最后补足所损失的水分。（3）调 pH调pH： 一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一 小段 pH 试纸，然后用镊子夹取此段 pH 试纸，在培养基中蘸 一下，观看其 pH 范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用 1mol/L NaoH 或 1mol/L HCl 溶液进行调节。调节 pH 时，应逐滴加入 NaOH或HCI

6、溶液，防止局部过酸或过碱,破坏培养基中成分。 边加边搅拌，并不时用 pH 试纸测试，直至 pH 达 7.4-7.6。 反之，用 1molLHCl 进行调节。2固体培养基的配制 配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸 再将称好的琼脂（1. 52）加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼 脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。（三）培养基的分装根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶 内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。 如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小 块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。1试管的分装取一个玻璃漏斗，装

7、在铁架上，漏斗下连一根橡皮管， 橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹 分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插 入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹 佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的 量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15X150 mm 时，液体培养基可分装至试管高度 14左有为宜；如分装 固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于 试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高 1 5（约34mI），半固体培养基分装量为管高的1/3为宜。2三角瓶的分装 用于振荡培养微生物时，可在250 m1 用于制作平板培养基用

8、时，可在250 ml三角瓶中加入150ml 粉（按2计算），灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。（四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为 防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行 过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。1试管棉塞的制作制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺 展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中 央压入团孔中制成棉塞然后直接压入试管或三角瓶口。也 可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿 缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管 不

9、下落为准。棉塞的 23 在试管内，13 在试管外。目前 也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外 面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培养基名称及配制日期， 灭菌待用。2三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了 进行液体振荡培养加大通气量，则可用 8 层纱布代替棉塞包 在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在瓶口上。在装好培养基并塞好棉塞或包扎八层纱布或盖好硅胶 塞的三角瓶口上，再包上一层牛皮纸并用线绳捆好，灭菌待 用。（五）培养基的灭菌将上述培养基以0103MPa, 121C, 20min高压蒸气灭菌。灭菌过程：1 加水：首先将内层

10、锅取出，再向外层锅内加入适量 的水，使水面没过加热蛇管，与三角搁架相平为宜。切勿忘记检查水位，加水量 过少，灭菌锅会发生烧干引起炸裂事故。2 装料：放回内层锅，并装入待灭菌的物品。注意不 要装得太挤，以免妨碍蒸汽流通而影响灭菌效果。装有培养基的容器放置时要防 止液体溢出，三角瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷 凝水淋湿包扎的纸而透入棉塞。3 加盖：将盖上与排气孔相连的排气软管插入内层锅 的排气槽内，摆正锅盖，对齐螺口，然后以对称方式同时旋紧相对的两个螺栓， 使螺栓松紧一致，勿使漏气，并打开排气阀。4 排气：打开电源加热灭菌锅，将水煮沸，使锅内的 冷空气和水蒸汽一起从排气孔中排出。一般认为当排

11、出的气流很强并有嘘声时， 表明锅内的空气已排尽，沸腾后约需 5分钟。5 升压：冷空气完全排尽后，关闭排气阀，继续加热， 锅内压力开始上升。6. 保压：当压力表指针达到所需压力时，控制电源， 开始计时并维持压力至所需的时间。如本实验中采用0lMpa,121 5C, 20分钟 灭菌。灭菌的主要因素是温度而不是压力，因此锅内的冷空气 必须完全排尽后，才能关闭排气阀，维持所需压力。7. 降压：达到灭菌所需的时间后，切断电源，让灭菌 锅温度自然下降，当压力表的压力降至“0”后，方可打开排气阀，排尽余下的 蒸汽，旋松螺栓，打开锅盖，取出灭菌物品，倒掉锅内剩水。 压力一定要降到“ 0”后，才能打开排气阀，开

12、盖取物。否 则就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基或试剂由于内外压力不平衡而冲出容器口，造成瓶口被污 染，甚至灼伤操作者。（六）斜面和平板的制作1斜面的制作将已灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒或玻棒 上，使成适当斜度，凝固后即成斜面。斜面长度不超过试管 长度 l2 为宜。如制作半团体或固体深层培养基时，灭菌 后则应垂直放置至凝固。2平板的制作将装在三角瓶或试管中已灭菌的琼脂培养基融化后，待 冷至50C左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷 凝水太多；温度低于50C,培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进行，左手拿培养皿，右手拿三角 瓶的底部或试管，左手同时用小指和手

13、掌将棉塞打开，灼烧 瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开一缝，至瓶口正好伸入， 倾入 1015mL 培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转 平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。（七）培养基的灭菌检查灭菌后的培养基，一般需进行无菌检查。最好取出 12 管（瓶），置于37C温箱中培养12天，确定无菌后方可使用。 篇二：培养基的制备与消毒灭菌 实验报告培养基的制备与消毒灭菌 实验报告实验目的1. 学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配 制为例）的一般方法和原理。2. 了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步 骤。实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢 产物

14、的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物 或积累代谢产物。在自然界中微生物种类繁多，营养类型 多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。 但是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、 能源、无机盐、生长因素等。不同微生物对PH要求不一样雷 菌和酵母的培养基的 pH 一般是偏酸性的，而细菌和放线菌 的培养基的 pH 一般为中性或微碱性的（嗜碱细菌和嗜酸细菌 例外）。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将 培养基的 pH 调到合适的范围。此外，由于配制培养的各类 营养物质和容器等含有各种微生物，因此，已配制好的培养 基必须立即灭菌如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以

15、防止 其中的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所 带来不利的影响。高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压 灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。 待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭 排气阀继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌 器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100C的温度。导 致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细 菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中 含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可 供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨 和NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维 生素，蛋白胨主要提供氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂，琼脂在 常用浓度下96C时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下 而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40C时凝固, 通常不被微生物分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼 脂的质量和气温的不同而有所不同。由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或微碱性，以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：牛肉膏 3