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1、分类号 学号学校代码_密级硕士学位论文肝癌患者介入手术前后免疫功能对比及愈后的改善与影响探讨学位申请人：学科专业：肿瘤学指导教师：教授答辩日期：二00七年五月Comparison of immune function wit 小时liver involvement in patients before andafter operation and Discuss on t小时 eimprovement and effect after 小时 ealingCandidate :Guo-YanWeiMajor:Supervisor :OncologyProf.小时 u-GuoQingDepartm
2、ent of oncologyTongji 小时 ospital, Tongji Medical College, 小时 uaz 小时 ong University of Science and Tec 小时nologyWu 小时 an,小时 ubei 430030, P.R. C小时inaMay, 2007独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知 ，除文中已经标明引用的内容外 ，本论文不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究 做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本 声明的法律结果由本人
3、承担。学位论文作者签名：日期：年 月 日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容 编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇 编本学位论文。本论文属于保密 在年解密后适用本授权书。不保密口。(请在以上方框内打“V”)学位论文作者签名：指导教师签名：日期： 年 月曰日期： 年 月 日目录一、中文摘要 (1)二、英文摘要.(4)三、正文前言 .(6)资料与方法(8)结果 .(15)小结 .(21)愈后
4、的改善与影响探讨 .(22)参考文献(31)四、致谢(50)肝癌患者介入手术前后免疫功能对比及愈后的改善与影响探讨华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科硕士研究生：郭彦伟硕士生导师：胡国清教授中文摘要目的：1. 根据中晚期肝癌患者的术前症状，实施有效的介入治疗，检测肝癌患者在进 行介入手术前后免疫功能状况。2. 探讨肝癌患者愈后的改善与护理，减轻介入治疗的不良反应和并发症的发生， 促进患者康复。方法：所有病例均采用Seld in ger改良法行右股动脉穿刺术置入 5FR小时导管插入 主动脉弓成襻后拉置腹腔干“冒烟”确认后在超滑导丝下将导管插入肝固有动脉 行DSA造影：肝脏实质内可见肿瘤血管及
5、肿瘤染色。遂行灌注化疗术：采用低压流控法行肿瘤血管栓塞术。拔出鞘级导管，穿刺处压迫止血后加压包扎。单向扩散法测定人体免疫球蛋白的含量， 特异性单克隆抗体法测定人体外周 血T淋巴细胞亚群，以及用植物血凝素（小时yto小时emagglutin, P 小时A）非 特异地刺激人体外周血T淋巴细胞，得到淋巴细胞转化率。比较介入手术前后不 同患者各种免疫学指标的差异，并分析肝癌患者接受手术前后与患者免疫学指标 的相关性。通过术前准备（健康教育、碘过敏试验、穿刺部位备皮、常规准备、术前用 药、介入手术用药、常用器械准备、常用手术方法）；术中配合；术后护理（穿 刺部位护理、生命体征监测、胃肠道反应症状、发热、
6、肝区疼痛、并发症、饮食 指导、心理护理、随访）等三环节。从而提高了手术成功率及降低术后并发症的 发生，提高肿瘤患者的生存年限。结果：通过介入手术前后患者的免疫指标检测，免疫指标的测量结果显示，进行介入手术前后患者的免疫指标存在差异，免疫球蛋白IgG、IgA、IgM；人体外周血淋巴细胞转化率；人体外周血 T淋巴细胞亚群CD4细胞百分比及其CD4细胞与 CD8细胞的比值，介入手术前患者上述免疫指标均明显低于介入手术后，都具有 统计学意义（PvO.001）。对患者进行合理的护理包括生理护理与心理护理，可有效提高了手术成功率 及降低术后并发症的发生，从而提高肿瘤患者的生存年限，经过合理护理的患者 的平
7、均存活年限相比较全国平均肝癌患者介入手术存活年限高出1-2年，并发症的发生率也减少10%左右，具有显著性。结论：1. 介入手术治疗可以打破免疫系统与肿瘤之间的动态平衡，提咼发挥免疫系统的 抗肿瘤效应2. 介入手术治疗是对于肝癌治疗相对经济实惠，安全有效，创伤小并且痛苦少， 是目前国内外较为工人的中晚期肝癌治疗手段。3. 肝癌患者愈后护理的注重可有效降低患者并发症的发生，提高愈后免疫功能。关键词：肝癌；免疫功能；介入手术；cd4； cd8；愈后改善与护理肝癌患者介入手术前后免疫功能对比及愈后的改善与影响探讨华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤科硕士研究生：郭彦伟硕士生导师：胡国清教授肝癌是指发
8、生于肝脏的恶性肿瘤，包括原发性肝癌和转移性肝癌两种， 人们 日常说的肝癌指的多是原发性肝癌。原发性肝癌是临床上最常见的恶性肿瘤之 一，根据最新统计，全世界每年新发肝癌患者约六十万，居恶性肿瘤的第五位。原发性肝癌按细胞分型可分为肝细胞型肝癌、胆管细胞型肝癌及混合型肝癌。按 肿瘤的形态可分为结节型、巨块型和弥漫型。原发性肝癌在我国属于高发病，一 般男性多于女性。中国是乙肝大国，我国的肝癌多在乙肝肝硬化的基础上发展而 来，丙肝病人也在逐渐增加，乙肝后也会发展为肝癌。目前我国发病人数约占全 球的半数以上，占全球肝癌病人的 55%已经成为严重威胁我国人民健康和生命 的一大杀手，其危险性不容小视。近年来，
9、随着医学影像学的发展，介入手术已被医学界广泛运用于癌症以及 其他病症的治疗。所谓介入治疗是是利用现代高科技手段进行的一种微创性治 疗。肝癌的介入手术主要通过导管动脉灌注化学药物和栓塞制剂从而阻断肿瘤的 血供，控制肿瘤的生长，使肿瘤缺血坏死缩小。因为介入手术成功率高、病症复发率低，相对于传统化疗治疗对患者体内细 胞破坏较小。因此介入治疗是目前治疗无法切除肝癌的首选手段，主要通过病人大腿部血管插入一根导管到达肝脏肿瘤部位后，对肿瘤进行栓塞/化疗。介入治疗也是不愿意接受手术的肝癌患者的首选治疗手段。和手术相比，介入治疗的优 点是对患者创伤小，手术时间短， 单次治疗费用较低，对肝癌的近期治疗效果可 以
10、，如接受介入治疗患者的1年生存率近70% 2年生存率接近40%介入治疗 还能将部分不能手术切除的肝癌转化为可以切除， 从而提高治疗效果。介入治疗 的缺点是大多数肿瘤不能完全坏死，需多次治疗。远期效果较差也是介入治疗的 主要缺点，很少有超过3年还生存者。此外，介入治疗不可避免会对正常的肝实 质带来损害，因此肝功能太差的病人也不适合治疗。 但是由于介入手术相对于传 统手术而言出治疗效果较好之外，治疗之后的住院时间相对于传统外科手术的治 疗较少，一般而言介入治疗住院时间前后大概一个多星期， 并且无论是用药还是 其他的费用也相对较为便宜，就医成本相对较低，因此越来越被广大的患者所接 受。与传统治疗一样
11、，介入手术的治疗也需要相应的完备的术前准备、病人良好 的书中配合以及术后的悉心照顾才能到到治疗效果的最大化。本文也会从这三个方面通过对患者免疫功能在各阶段的恢复情况探讨介入手术患者的身体恢复状 况与治疗效果。材料与方法1.1 一般资料所有36例研究对象均为2006年6月至2009年10月本院接收确诊的肝癌患 者，所有兵力符合中国抗癌协会肝癌专业委员会制定的肝癌诊断标准，。其中男19例，女17例，年龄20至69岁，平均（43.4 5.3 ）岁。肝功能按C小时ild-Pug 小时分级：A级28例，B级8例，患者无明显黄疸，无远处转移。1.2方法人体免疫球蛋白IgG, IgA, IgM的测定采用单向
12、扩散法；人体外周血 T淋巴 细胞亚群测定的测定采用特异性单克隆抗体法。1.3主要试剂（1）RPMI-1640培养液：美国 Gibco公司（2）淋巴细胞分层液：上海试剂二厂（3）植物血球凝集素PHA-P广州市医药工业研究所（4）青霉素和链霉素：郴州市第一人民医院（5）免疫球蛋白试剂盒购自上海微晶生物试剂有限公司；淋巴细胞试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司1.4主要仪器（1）AA-320原子吸收分光光度计：上海分析仪器总厂（2）低速离心机：北京医用离心机厂（3）自控电热消化器：核工业北京化工冶金研究院（4）恒温培养箱：上海申贤恒温设备厂（5）Olympus显微镜。研究内容和方法2.1血液与尿液样
13、品的收集对每一调查对象采集血液及尿液样本。血液样品由专人取清晨空腹静脉血8m1,以肝素(每1ml全血加0.1 ml125U/ml肝素溶液)抗凝后置入10ml 次性塑 料试管中待用；尿液样本亦由专人收取受检者清晨第一次尿液10ml，立即以2000r/min离心20分钟，弃沉渣，上清液留置待用。2.2人体免疫球蛋白的测定 标准曲线的制备：工作标准，标有IgG, IgA, IgM含量，主要供绘制标准曲线用。将工作标准先用O.5ml蒸馏水溶解，再用生理盐水稀释成五种不同浓度 (g/L)的标准液，制备IgG, IgA取以上五种不同浓度的标准液各 10卩l，制备IgM 取20卩1,分别加入IgG, IgA
14、, IgM 单向扩散板前的五孔，余孔用于测样本，水 平放置于培养箱内，37C, 48小时后观察结果。直接从板后压印的刻度上读出每孔沉淀环环上的直径，以半对数坐标纸，纵轴为Ig含量(g/L )，横轴为扩散环的直径(mm),绘制标准曲线。 样品测定：每一调查对象，取 3m1肝素抗凝静脉血，以 2000r/min离心 20min,分离血球部分，用加样器取血清0.1 ml，加0.3ml生理盐水混匀，测IgG、 IgA各取10卩l，测IgM取20卩l，分别加入IgG, IgA, IgM 板孔中，放置时间 和温度与绘制标准曲线时相同，最后测沉淀环直径与对应标准曲线中查出， 即得 到样品中免疫球蛋白的含量。
15、 质控血清为冻干品，用时加0.4m1生理盐水溶解后，按照样品测量步骤操作2.3人外周血T淋巴细胞亚群测定 用加样器吸取肝素抗凝静脉血1ml，加入试管中，再加进等体积的经室温 预温的磷酸盐缓冲液(PBS)，使血液等倍稀释。 吸取淋巴细胞分层液1 ml，置于离心管中，然后将离心管倾斜 45度，将 稀释血液1 ml在距分层界面上1 cm处沿试管壁缓慢加至分层液上面，应注意保 持两者界面清晰，勿使血液混入分层液内。 将离心管置离心机内，以 2000r/min离心30min。离心后，管内可分为以 下四层：上层为血浆、血液稀释液及绝大部分血小板；下层为红细胞及粒细胞；中层为细胞分层液；分层液与血浆交界部位浑浊的灰白层即为淋巴细胞层。 用毛吸管轻轻插入灰白层，沿管壁轻轻吸出灰白层的细胞，移入另一只离 心管中。加入5至10倍体积的RPMI-1640培养液以2000r/min离心lOmin。去 掉上清，沉淀即为淋巴细胞。 淋巴细胞涂片，室温晾干，100%酮固定20min。 滴加山羊血清封闭液，室温放置 lOmin;滴加单克隆小鼠抗
