《BMP对TGFβ 诱导人近端肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质分泌的影响》由会员分享，可在线阅读，更多相关《BMP对TGFβ 诱导人近端肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质分泌的影响（54页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、英文缩略词表a-SMA(a-smooth muscle actin)a一平滑肌肌动蛋白BMP-7(bone moiphogenctic protein-7)骨形态发生蛋白一7Col I(type I collagen)I型胶原DEPC(diethyl pyrocaeoonate)焦碳酸二乙酯E-cadhcrinB钙粘连素ECM(extmcellular matrix)细胞外基质ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)酶联免疫吸附实验EMT(epithelial-to-mesenchymal transition)蚴胞间充质转分化CrGF(connecti
2、vc tissue growth factor)结缔组织生长因子fN(hbronectin)纤维连接蛋白HK-2(human renal proximal tubular epithelial cells)人近端肾小管上皮细胞 MET(mesenehymal-to-epithclial transition)间充质细胞E皮细胞转化 MMP-2(malri metalloproteinase-2)基质金属蛋白酶-2MFB(myofibroblast)肌成纤维细胞MCP-l(monocyte chcmoatWactant protein-I)单核细胞趋化蛋白1IGF冯,(transforming
3、growth factor一01)转化生长因子B lTm(mbmommrstitial fibrosis)肾小管间质纤维化TIMP-I(tissue inlubitor of the matri metalloproteinase-1)组织基质金属蛋白酶抑制物1TEC(r砌tubular epithelial cell)肾小管E皮细胞PAI-1(plasminogen activator inlubitor-1)纤溶酶原激活物抑制剂一1PBS(phosphate buffered saline)磷酸盐缓冲液RT-PCR(reverse Iranscription-polymerase chai
4、n system)反转录一聚合酶链式反响 SDS(sodium dodecyl sulphate)十二烷基磺酸钠I兀Jo(unilateral ureteral obstruction)单侧输尿管梗阻2学位论文原创性声明和版权使用授权书学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的真实成果。除文中已注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本论文的研究做出重要奉献的个人和集 体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承当。作者签名(手写)：聱 导师签名(手写)：学位论文版权使用授权书
5、本学位论文作者完全了解学校有关保存、使用学位论文的规定，同意学校保 留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借 阅。本人授权福建医科大学可以将本学位论文的全部或局部内容编入有关数据库 进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。同时 授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到?中国学位论文全文数据库?， 并通过网络向社会公众提供信息效劳。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)作者签名(手写)： 导师签名(手写)：印o T年月r日BMP-7对TG椰1诱导人近端肾小管上皮细胞转分化及细胞外基质分泌的影响 摘要目的：观察骨形态发生蛋8-7(洲)对转化
6、生长因子-81(TGF-B1)诱导人近端肾小管上皮细胞(HK-2)向间充质细胞转分化(D仉)及细胞外基质(ECM)分泌的影响，探讨其逆转肾间质纤维化的可能机制。方法：将HK-2细胞在体外与TGF-B1或TGF-B1+BMP-7共培养，分成对照组，不同浓 度TGF-B1诱导组，TGF-B1不同时间诱导组，3ngml TGF-B1加不同浓度BMP-7组。相差显微镜观察细胞形态的改变；间接免疫荧光测定a-SMA、E-cadherin的表达； RT-PCR检测 a-SMA、E-cadherin、Col I a1、FN、PAI-1 mRNA的表达；Western Blot检测a-SMA、E,odheri
7、n 蛋白的表达；ELISA方法测定细胞E清液Col I、FN的表达。结果：(1)随着TGF-B1浓度的增加及作用时间的延长，HK-2细胞形态逐渐发生改变， 由立方形铺路石样转变为梭形长条样；在3ngml TGF-81诱导48h后再加A200ngna BMP-7 组中，可见到已转变为梭形长条样的细胞大局部逆转回原来的形态。(2)免疫荧光检测显示， 正常HK-2细胞表达F_,cadhadn、而无a-SMA表达，经3ngml TGF-B1刺激4811后，细胞浆中a-SMA表达明显增强，细胞质膜E-eadherin表达显著减弱；去除TGF-BI，再参加200ngml BMP-7干预48h，能明显抑制a
8、-SMA的表达、恢复E-eadherin的表达。(3)TGF-81在lOngml 内呈剂量依赖性匕调a-SMAmRNA的表达。在3ngml TGF冯I诱导下，a-SMAmRNA表达随作用时间的延长而增加，Eeadherin mRNA表达随作用时间的延长而逐渐减少。在3ngml TGF-BI与BMP-7共同干预下，a-SMA mRNA及蛋白的表达随着BMP-7(100 ngml枷O ngm1)的浓度增加而减少，400 ng压llI BMP-7即可显著减少a-SMA mRNA及蛋白的表达(PaI01)。在3ngml TGF-B1的持续刺激下，E-adherin mRNA及蛋白的表达随着BMP-7的
9、浓度增加而逐渐增加，400 ngml BMP-7即可显著增加F,-odherin mRNA及蛋白的表达(咖01)。(4)在3ngml TGF-St诱导下，随刺激时间的延长，Col I al、FN mRNA表达3逐渐增加： BMP-7呈剂量依赖性抑制Col I、FN的表达，400 ngIIll BMP-7即可显著抑 制Col I、FN的表达(Po01)。(5)在3ngml TGF-B1诱导下，B讧l mRNA表达明显增 JJI(P001)；BMP-7呈剂量依赖性抑制PAI-1 mRNA表达，400ngm_l BMP-7可明显减少PAI-1 mRNA表达(P001)。结论：(1)TGF-B1呈剂量
10、和时间依赖性匕调a-SMA的表达、抑制E-cadherin的表达， 诱导HK-2细胞转分化，并促进Col I、FN的合成。(2)BMP-7可呈剂量依赖性地抑制TGF-Bl 诱导下a-SMAmRNA和蛋白的表达，并通过再诱导E-cadhcdn mRNA和蛋白的表达抑制、逆转TGF-B1诱导的EMT。(3)BMP-7可呈剂量依赖性抑制TGF-Bl诱导下HK-2细胞外基质成分C以I、FNmRNA和蛋白的表达；抑制PAI-1mRNA的表达，即BMP-7可抑制硎l诱导下肾小管上皮细胞ECM的合成、促进ECM降解。 关键词：骨形态发生蛋白质类转化生长因子B上皮细胞转分化细胞外基质4Effects of B
11、MP-7on Epithelial-to-Mensenchymal Transitionand Extraceilular MatrixAccumulationinHumanRenalProximalEpithelial Cells Induced by TGF-IhObjective：To investigate the effects of bone morphogcnic protein(BMP)-7 onepithelial-to-mesenchymal昀nsi60nand the expression 0f 6bIoIlec面(FN)and type collagenI(Col I)
12、in human renal proximal tubular ce郴-2)inducedby transforming growth factor-B1(TGF-B1)，and to explore the possible mc?Jlanisms of BMP-7 for the inlffoifion and rwemal of嗽lal intcmtitial fibrosisMethods：HK-2 cells、)l眦treated with TGF-BI or a combination of TGF-Bx and BMP-7HK-2cells divided into the fo
13、llowing groups according to different f础OlS：Control group, TGF-B1(different time and concentration)group,3ngml TGF-81+BMP-7(different concentration) groupMorphological clIanges wefc assessed by phase contrast micrcsoopyThe expression of a-SMA and E-cadherin were arlalysed by indirect immunofluoresce
14、ncc J王T-PCR and Western BlotrespectivelyThe mRNA levels of extracelluar n强由敦components(Col I al and Frq)and plasminogen activator inlubitior(PAI)-1 were measured by RT-PCRTheoetion of Col I and FN protein was quantitated by ELISAResults：(1)TGF-81 trealment of confluent HK-2 cells resulted in distinct morphological changesin a time and dose-dependent mannerThe control cells displayed t)piCal cobblestone morphology of epithelial cells3ngml TGF-Bx induced profound morphologic changes after 48h,with cells becoming elongated in shape,but addition of 200neghn BMP-7 for 48h resto
