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1、大肠镜检查前三天的饮食表优质资料(可以直接使用，可编辑 优质资料，欢迎下载）大肠镜检查前三天的饮食表饮食原则：1. 饮食准备的头二天进食无渣或少渣半流饮食，如：稠粥、面条、菜泥等。要清淡、易消化。食物宜凉至微温再食，以免烫伤消化道。2. 禁食含纤维多的蔬菜（芹菜、韭菜、豆芽等）、水果及豆类。可食去皮去籽的水果及成熟瓜类，如哈密瓜、香瓜、葡萄、梨、枇杷、南瓜、冬瓜、丝瓜。3. 禁食大块的肉类及坚硬不消化的食物。4. 禁食一切产气食物，如过甜流质、豆浆、牛奶及乳制品。5. 禁食油煎、油炸、油腻及辛辣、糖醋等刺激性食物。6. 饮食准备的第三天早餐、中餐均进食无纤维流质（如白粥、婴儿米粉、不加糖的薄藕
2、粉、蒸蛋等），晚餐进食清淡无渣流质（如清米汤、果子水、去渣菜水、去油去渣肉汤）。7. 检查当日禁食。建议菜单：第一天早餐：白粥、切片面包2片、太仓肉松。午餐：白米饭1碗、清蒸鱼（去皮）。晚餐：细面、瘦肉丝。第二天早餐：瘦肉粥（少油）。午餐：阳春面（清谈，少油）、凉拌豆腐、蒸蛋一个。晚餐：白米饭1碗、盐水虾。第三天早餐：粥、蒸蛋。午餐：烂糊面、米汤、婴儿米粉、藕粉。晚餐：去渣蔬果汁2杯（500ml）。备注. 第三天应注意多补充水分（8杯水）和盐份。以上如仍有不明白请与我们联络，届时将有专人详加解释。谢谢您的合作！周一周六上班时间：7:30-17:00 ：021-63047175景康门诊部制202
3、1年4月制定,解释权归景康所有早起300ml水以上早餐三分之一杯燕麦（233k），一个鸡蛋（80k），一个香蕉或苹果（80k），一杯豆浆（50k、400ml）燕麦 400k/100 豆浆20k/100蛋白：6.6+6.6+7.2=20.4脂肪：5.4+4.5+3=13早上加餐控制在100200k之间，（一个玉米，苹果，香蕉，一袋牛奶）牛奶：54k/100，蛋白3，脂肪3.2一袋牛奶：蛋白7.5，脂肪811:00-11:30茶叶喝完吃完，喝点燕麦午餐中午可摄入800卡（地瓜玉米代替米饭）1,.鸡肉半个，土豆半个一勺（练背）两勺蛋白粉（跑步日）1块鸡胸脯肉(120.0克)含有热量160大卡，脂肪6
4、.00克,蛋白质23克下午加餐15粒花生加一袋牛奶75+135（或是加餐：一个玉米，苹果，香蕉，一袋牛奶）玉米：106k/100,一颗玉米140k，蛋白5.6，脂肪1.7花生一颗5k,蛋白2g，脂肪4g一袋牛奶：蛋白7.5，脂肪85:00茶叶吃完喝完晚餐100g燕麦加半个鸡胸加半个土豆一天需要脂肪60g，蛋白质100g140g减脂，控制在2200卡以下，每周五次有氧18圈无蛋白粉时候早起300ml水以上早餐三分之一杯燕麦（233k），一个鸡蛋（80k），一个香蕉或苹果（80k）燕麦 400k/100 豆浆20k/100 蛋白：6.6+6.6+7.2=20.4脂肪：5.4+4.5+3=13早上加
5、餐控制在100200k之间，（一个玉米，苹果，香蕉，一袋牛奶）牛奶：54k/100，蛋白3，脂肪3.2一袋牛奶：蛋白7.5，脂肪811:00-11:30茶叶喝完吃完（喝点燕麦）午餐中午可摄入800卡（地瓜玉米代替米饭）1,.小鸡肉一个，胡萝卜75g，生菜95g1块鸡胸脯肉(120.0克)含有热量160大卡，脂肪6.00克,蛋白质23克下午加餐15粒花生加一袋牛奶75+135（或是加餐：一个玉米，苹果，香蕉，一袋牛奶）玉米：106k/100,一颗玉米140k，蛋白5.6，脂肪1.7花生一颗5k,蛋白2g，脂肪4g一袋牛奶：蛋白7.5，脂肪85:00茶叶吃完喝完晚餐一个小鸡胸加大半个土豆，30多克
6、燕麦一天需要脂肪60g，蛋白质100g140g8.大肠杆菌表达系统与蛋白表达纯化大肠杆菌表达系统遗传背景清楚，目的基因表达水平高，培养周期短，抗污染能力强等特点, 是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具。因此熟练掌握并运用大肠杆菌表达系统的基本原理和常规操作是对每一个研究生来说是非常必要的。本章节介绍了实验室常用的大肠杆菌表达系统的构成特点，归纳了利用大肠杆菌表达系统纯化重组蛋白的基本流程和详细操作步骤，并且结合笔者的操作经验，总结了初学者在操作过程中可能遇到的问题和解决策略。8.1大肠杆菌表达系统的选择与构建表达载体的选择根据启动子的不同这些载体大致可以分为热诱导启动子，如PL
7、，cspA 等和另外一类就是广泛使用的IPTG诱导的启动子，如lac，trc，tac，T5/lac operator，T5/lac operator等。根据表达蛋白质的类型可分为单纯表达载体和融合表达载体。融合表达是在目标蛋白的N端或C端添加特殊的序列，以提高蛋白的可溶性，促进蛋白的正确折叠，实现目的蛋白的快速亲和纯化，或者实现目标蛋白的表达定位。常用的用于亲和纯化融合标签包括 Poly-Arg，Poly-His, Strep-Tag ，S-tag，MBP等。其中His-Tag 和GST-Tag 是目前使用最多的。His Tag 大多数是连续的六个His 融合于目标蛋白的N端或C端，通过His
8、 与金属离子：Cu2+Fe2+Zn2+Ni2+ 的螯合作用而实现亲和纯化，其中Ni2+是目前使用最广泛的。His 标签具有较小的分子量，融合于目标蛋白的N端和C端不影响目标蛋白的活性，因此纯化过程中大多不需要去除。目前常使用的表达载体主要是由Novagen 提供的pET 系列和 Qiagen 公司提供的pQE 系列。除了His 标签外，还原性谷胱甘肽S-转移酶是另一种实验室常用的融合标签。它可以通过还原性谷胱甘肽琼脂糖亲和层析而快速纯化。此外，与His 相比，GST 很多时候能够促进目标蛋白的正确折叠，提高目标蛋白表达的可溶性，因此，对于那些用his 标签表达易形成包涵体的蛋白，可以尝试用GS
9、T融合表达来改进。当然，GST 具有较大的分子量（26kDa），可能对目的蛋白的活性有影响，因此很多时候切除GST是必须的。目前，GST融合表达系统主要是由GE Healthcare（原Amersham）提供。宿主菌的选择重组质粒的构建一般选择遗传稳定，转化效率高，质粒产量高的菌株作为受体菌，常用的有E.coli DH5，E.coli JM 109，E.coli DH 10B ，E.coli NovaBle等recA和endA型细胞。作为表达宿主菌必须具备几个基本特点：遗传稳定，生长速度快，表达蛋白稳定。具体操作过程中，根据所使用的表达载体的特点，目的基因密码子的组成等选择特定的表达宿主菌。以
10、下是实验室常用的几种表达宿主：BL2： lon和ompT 蛋白酶缺陷型，避免了宿主对外源蛋白的降解。是经典的使用最广泛的表达受体。适用于Tac，Trc，Lac，PL，cspA等作为启动子的载体。BL21（DE3）： DE3噬菌体溶源于BL21 形成的带有染色体T7 RNA 聚合酶基因大肠杆菌。IPTG 诱导的lacV5 启动子控制T7 RNA 聚合酶基因表达T7 RNA 聚合酶，进而控制T7 表达系统表达目的蛋白。BL21（DE3）衍生系列：在经典的T7表达系统BL21（DE3）的基础上，Novagen 公司开发了一些特殊的表达宿主细胞。比如：Origami （DE3），Origami B（D
11、E3）和Rosetta-gami （DE3）菌株带有 trxB和gor双突变。拥有trxB和gor突变的菌株比单具，trxB突变的菌株更有可能促进二硫键的形成，使蛋白可溶性更好，活性更高。Rosetta系列：是经过修饰，专用于带有大肠杆菌稀有密码子的真核蛋白表达的菌株。经提高稀有tRNA 水平，可以提高一些真核基因表达效率（更多信息可参考相应公司的资料）。BL21-Codon Plus系列：包括BL21-CodonPlus（DE3）-RIPL，BL21-CodonPls-RIL，BL21-CodonPls（DE3）-RIL, BL21-CodonPls-RP，BL21- CodonPlus（D
12、E3）-RP等。这些受体菌添加了大肠杆菌中编码精氨酸（R），亮氨酸（L），异亮氨酸（I）和脯氨酸（P）稀有密码子的tRNA 基因，更多用于表达一些真核生物的基因。其中RIL系列常用于AT 含量高的基因，而RP系列主要用于GC含量高的基因（更多信息参考Stratagene 公司资料）。M15/SG13009：自身表达T5 RNA polymerase，主要用于pQE系列载体的表达。另一个需要考虑的是大肠杆菌的密码子及其偏爱性。表1 大肠杆菌密码子使用频率统计TAAFRQCAAFRQAAAFRQGAAFRQTTTTF19.7TCTS5.7TATY16.8TGTC5.9TTCF15TCCS5.5TA
13、CY14.6TGCC8TTAL15.2TCAS7.8TAAstop1.8TGAstop1TTGL11.9TCGS8TAGstop0TGGW10.7CCTTL12CCTP8.4CATH15.8CGTR21.1CTCL11CCCP6.4CACH13.1CGCR26CTAL5.3CCAP6.6CAAQ12.1CGAR4.3CTGL46.9CCGP26.7CAGQ27.7CGGR4.1AATTI30.5ACTT8AATN21.9AGTS7.2ATCI30.6ACCT22.8AACN24.4AGCS16.6ATAI30.7ACAT6.4AAAK33.2AGAR1.4ATGM30.8ACGT11.5AAG
14、K12.1AGGR1.6GGTTV16.8GCTA10.7GATD37.9GGTG21.3GTCV16.9GCCA31.6GACD20.5GGCG33.4GTAV16.1GCAA21.1GAAE43.7GGAG9.2GTGV16.11GCGA38.5GAGE18.4GGGG8.68.2表达条件的建立为了方便后续的纯化操作, 保持目标蛋白的活性,提高蛋白的得率，我们在进行蛋白的大量制备之前应该首先确定目标蛋白的最佳表达条件。首先，保证表达蛋白稳定，尽量避免蛋白酶的降解，我们可以通过使用一些蛋白酶缺陷性的表达宿主，其次在表达的过程中可以在培养体系中添加一些蛋白酶抑制剂等来解决。与实现外源蛋白的稳定表达相比，更多时候保证目标蛋白的可溶性表达，是建立表达条件的主要工作。很多外源基因在大肠杆菌表达时很容易形成不可容的包涵体，其原因可能有：表达量过高，研究发现在
