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1、果脯中苯甲酸含量的测定紫外分光光度法高效液相色谱法酸碱滴定法测定苯甲酸钠荧光光谱标准加人法测定苯甲酸钠的含量电势滴定法测定苯甲酸钠含量高效离子色谱法测定辣椒红色素中苯甲酸的含量气相色谱法测定苯甲酸的含量一、 紫外分光光度法一、实验目的 、掌握紫外分光光度计的使用方法及正确操作方法； 、了解不同果脯中苯甲酸测定的处理方法及测定方法。二、实验原理 苯甲酸及苯甲酸钠在近紫外光区具有较强的吸收。通过A-实验找到苯甲酸最大吸收锋位置。 另一方面，苯甲酸的钠盐在水中具有适当的溶解度，所以，可将标样和样品处理成水溶液，采用紫外分光光度计，通过标准曲线法而实现酸性食品中苯甲酸（钠）含量的测定。三、仪器和试剂
2、7500或240型紫外-可见分光光度计，分析天平，研钵，容量瓶（50mL若干），抽滤瓶，布氏漏斗，吸量管若干。 苯甲酸标准储备液 (0.5000mg/mL):准确称取0.5000g苯甲酸(AR)溶于少量0.01mol/L的NaOH中，然后用上述NaOH溶液定容于1000mL容量瓶中即得。 0.01mol/L的NaOH溶液。四、实验内容 1.制作标准溶液系列 取5mL标准储备液于50mL容量瓶中，用0.01MNaOH溶液定容。另取6只50mL容量瓶（标号05）分别移取稀释液0.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL、8.00mL、10.00mL于容量瓶中，定容。 2.样品处理 称取待
3、测果脯样品10g（记录实际称取量）置于研钵中，加入适量0.01M的NaOH，充分研磨。抽滤，注意用氢氧化钠溶液洗涤研钵和布氏漏斗。将滤液收集于同一50mL容量瓶中，定容。从中取2.5mL于50mL容量瓶中，定容。 （如果实验中发现浓度不合适，可另取不同体积样品液稀释） 3.制作A-曲线 以0号样为参比，对3号样进行扫描，波长范围210240nm，找出最大吸收波长。 4.标准曲线制作与未知样测定 以0号样为参比，在找到的最大吸收波长下测定标准溶液系列的吸光度，最后 测定未知液的吸光度。五、计算 制作标准曲线并计算二、高效液相色谱法一、实验目的1.学习高效液相色谱仪的操作2.了解高效液相色谱法测定
4、苯甲酸的基本原理3.掌握高效液相色谱法进行定性定量分析的基本方法二、实验原理将浓度不同的苯甲酸标准溶液与未知样品在相同色谱条件下进行分离试验，分别测得它们在色谱图上的保留时间tR和峰面积A，可直接用tR进行定性分析，并以峰面积A作为定量测定的参数，采用工作曲线法（外标法）测定食品中的苯甲酸。三、 仪器试剂 Agilent1100高效液相色谱仪（带紫外检测器）；色谱柱(Kromasil C18,5 um*150mm*4.6mm),平头微量注射器；分析天平(精度0.1mg)、料理机。甲醇(SG)、乙酸铵 (AR)、苯甲酸标准品(99%,国家标准物质中心)实验用水为超纯水甲醇：经滤膜0.45um过滤
5、；乙酸铵溶液(0.02mol/l):准确称取1.54g乙酸铵，加入1000mlH2O溶解，并经0.45um滤膜过滤；NaHCO3溶液(20g/L):称取2g NaHCO3,加水100ml,摇匀；苯甲酸标准储备液（1mg/ml）：准确称取100mg苯甲酸，加NaHCO3溶液（20g/L）5ml,加热溶解，移入100ml容量瓶并定容；流动相：甲醇:乙酸铵溶液(0.02mol/l)=5:95,流动相进入色谱前，用超声波发生装置脱气10min；待测试样：果脯样品。四、实验内容（1）苯甲酸标准使用液（100ug/ml）的配置：取储备液10ml,放入100ml容量瓶，加水稀释至刻度摇匀，并经0.45um滤
6、膜过滤。（2）标准溶液： 分别精密量取 5、 10 、20、40 mL 的标准使用液至 50mL 容量瓶中 ，用超纯水定容，得 10 、2040 、80 、100 ug/mL 的系列标准溶液 . （3）样品处理：准确称取0.05g果脯置于100ml洁净干燥的烧杯中，用20ml蒸馏水煮沸10min，冷却后，将上层清液经0.45um滤膜过滤于50ml容量瓶，残渣按此步骤再重复一次，将清液全部转移至容量瓶，并定容至刻度。4）色谱仪器条件：泵的流速1.0ml/min;检测波长230nm,进样量20ul，柱温室温。 （5）待仪器基线稳定后，由低浓度至高浓度进苯甲酸标准液，记录不同浓度下保留时间及峰高、峰
7、面积；再测定果脯试液的色谱图，分别记录三个样品的保留时间及峰高、峰面积。五、 数据处理（1）以标样的峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。（2）根据保留时间确定样品的中的苯甲酸的色谱峰。（3）根据求取样品中苯甲酸的浓度。三、酸碱滴定法测定苯甲酸钠 （应该会有其他物质干扰，具体量也不好确定）一、实验原理： 试样中加入饱和氯化钠溶液，在碱性条件下进行萃取，分离出蛋白质、脂肪等，然后酸化，用乙醚提取试样中的苯甲酸，再将乙醚蒸去，溶于中性醚醇混合液中，最后以标准碱液滴定。二、仪器和试剂： 中性乙醇 0.05mol/L 氢氧化钠标准滴定溶液Nacl、无水乙醚、1：1盐酸、无水硫酸钠、1%酚酞指示剂电
8、子天平、分液漏斗、滴定装置、蒸馏装置三、 实验内容1、样品处理：称取待测果脯样品100g（记录实际称取量）置于研钵中，加入适量0.01M的NaOH，充分研磨。抽滤，注意用氢氧化钠溶液洗涤研钵和布氏漏斗。将滤液收集于同一50mL容量瓶中，加AR NaCl直到不溶解为止（降低苯甲酸在水中溶解度，以减少在提取及水洗过程中的损失），用10%NaOH调为碱性（这时苯甲酸生成苯甲酸钠，并以苯甲酸钠状态存在）用饱和NaCl定容50ml静置2小时过滤弃去初液收集滤液2、氢氧化钠的标定：用邻苯二甲酸氢钾标定准确分别称取邻苯二甲酸氢钾0、20、01g 3份与锥形瓶中，酚酞作为指示剂，用配好的氢氧化钠分别滴定，直至
9、溶液变为红色为滴定终点，记录消耗氢氧化钠的体积，计算取平均值3、 提取及滴定：吸滤液100ml于500ml分液漏斗加11 HCl 4ml酸化用50ml乙醚分三次提取每次振荡不能太激烈以防乳化合并醚层连接蒸馏装置回收乙醚（50水浴）用20ml中性醚醇+50ml水溶解残渣加2滴酚酞用0.05mol/L NaOH滴出微红色（同时要求做空白实验）四、 数据处理四、 荧光光谱标准加人法测定苯甲酸钠的含量我国国标G B2 7 6 O一19% 规定食品中苯丙酸钠含量低于0. 2g/Kg , 苯甲酸和苯甲酸钠作为防腐剂适用范围: 碳酸饮料、低盐酱菜、酱类、蜜饯、葡萄酒、果酒、软糖、酱油、食醋、果酱(不包括罐头
10、)、果汁(味)型饮料、食品工业塑料桶装浓缩果汁。绿色食品食品添加剂使用准则中规定绿色食品中禁用苯甲酸钠和苯甲酸。当前对苯甲酸钠的测定方法主要有: 滴定法、紫外分光光度计法、液相色谱法、毛细管电泳法等,而被研究所用的是荧光光谱法, 其优点主要是测量准确、灵敏度高、选择性强。1 实验部分1 主要的试剂和仪器试剂: 苯甲酸钠(纯度 9 9. 5 % , 上海来泽精细化学品研究所), NaA c3H2O (纯度9 9 % , 宜兴市第二化学试剂厂), 浓盐酸(纯度36 % 一38 % , 莱阳市康德化工有限公司), 饮料(市售, 密度1.00 9g/m L), 试验用水为二次蒸馏水。仪器: 日立8 5
11、0 型荧光分光光度计, p H 计(3 20 一s , 梅特勒一托利多仪器(上海)有限公司)容量瓶(100ml) 电分析天平(0.0001g)1.2 主要方法1.2.1 N aA c 一H A C 缓冲溶液的配制精密称取2. 7 2g Na A c3H ZO 晶体, 重蒸水溶解后转移至10 0 m L 的容量瓶中, 用1mol / L 的盐酸溶液调解p H 值为2. 5 , 加重蒸水至刻度, 即得到p H值为2. 5 的Na A c 一HA C 缓冲溶液。1.2. 2 标准溶液的配制精密称取0. 0 2g 苯甲酸钠晶体,蒸馏水溶解后定容于l00 m L 容量瓶中, 既可配成0. 2 g/L 的
12、苯甲酸钠溶液。1.2. 3.l 苯甲酸钠的荧光发射光谱的测定: 以2 7 On m 为检测波长, 从260 一400n m 进行扫描, 窄缝宽度为5n m 。苯甲酸钠的荧光激发光谱的测定: 以最大发射波长为固定发射波长, 改变激发光波长2 00 -400nm 进行扫描。2. 4 荧光光谱最佳p H 的确定准确量取2.5 ml 0. 2 g/L 苯甲酸钠溶液于13 个1O0 m L 容量瓶中, 用0.lm o l/ L HCl 和N a O H 溶液调节p H 值, 加重蒸水至刻度摇匀, 用p H 计准确测定p H , 并测定溶液的荧光发射强度fo2. 5 标准曲线的测定准确移取O 、1 、2
13、、6 、8 、10 m L 0.2g/l的苯甲酸钠标准溶液分别放人7 个100 m L 容量瓶中, 加人10m L pH 值为2.72 的NaAc 一HAc 缓冲溶液, 加蒸馏水至刻度, 以缓冲溶液为空白对照测荧光强度。2. 6 标准加人法测苯甲酸钠的浓度精确移取0 、1 、1.5 、2 、3 、4mL 0.2g/l苯甲酸钠标准溶液分别放人6 个5 0 ml 的容量瓶, 各加5mlNaA c 一H A c 缓冲溶液和lmL 饮料式样, 再加重蒸水至刻度, 以缓冲溶液为空白对照测各溶液的荧光强度2 结果与讨论1 苯甲酸钠的荧光光谱. 1 苯甲酸钠的荧光发射光谱以2 7 0 n m 为检测波长,
14、从26 0 一4 0 0 n m 进行扫描, 得苯甲酸钠的荧光发射光谱如图1 所示。其最佳发射光波长为315n m 。 2 苯甲酸钠的荧光激发光谱以最大发射波长3 15n m 为固定发射波长, 改变激发光波长200-400nm 进行扫描, 得苯甲酸钠的荧光激发光谱如图2 所示, 其最佳激发波长为2 24 n m 。荧光光谱最佳p H随着p H 的增大苯甲酸钠的荧光强度增大, 当p H 达到2. 01 是荧光强度达到最大,随之荧光强度开始降低, 达到5.25 后荧光强度达到0, 因pH 值在1.76 一3 范围内时荧光强度较大, 故测定较合适的p H 值范围为1.7 6 一3 , 为方便试验我们
15、选取合适的pH 为2 一3, 实验中的pH 为2. 5。2. 3 标准曲线的测定苯甲酸钠的浓度基本上和荧光强度是成正比的, 其线性相关方程为f=6.58757c + 0. 0 3 59 , 相关性系数r = 0.9999 , 即其相关性较好。2. 4 标准加人法测定的苯甲酸钠浓度由图5 可知, 样品的荧光强度f 与苯甲酸钠的加入体积呈直线关系, 其方程为: f= 11 .989v+ 13.404, r= 0.9978 。当荧光强度为零时, 可计算出加人苯甲酸钠的浓度为: V=-0. 9 9ml , 因此可得到样品中的苯甲酸钠的浓度为: V 样=0. 2*0.9 9 /1=0.198g/l=0. 19 6 g/Kg ,故此样品所含苯甲酸钠在规定范围之内, 但已接近规定范围的上限.回收率的测定在饮料的试样中加人一定量的苯甲酸钠标准溶液, 然后测定其荧光强度, 用标准加人法测量苯甲酸钠的总量, 同时
