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1、测定动态接触条件下固定化抗菌剂 抗微生物活性的试验方法1. 范围1.1 本试验方法用于评价非滤沥的抗菌活性，动态条件下的抗菌处理试样。这种烧瓶震荡测试是为了常规质量控制和筛选试验，以克服在使用传统抗菌试验方法评价底物结合的抗菌剂时遇到的困难。这些困难包括确保接种体接触要处理的表面（如AATCC 100-2004），在不同接触时间的灵活性，在静态条件下的不适当使用（如AATCC 147-2004），灵敏度和重现性。1.2 本测试方法可以适用于评估许多类型的处理原材料和广泛范围的微生物。在本试验方法中所使用的原材料可以承受各种物理/化学的应力，而且可以适应各种测试中的污染，比如硬水、蛋白质，血液，
2、血清，各种化学品与其他污染物。1.3表面抗菌活性是通过对比同时测试的试验样品的结果来确定的。1.4浸出抗菌的能力是通过测试前和测试后的两方面因素确定的。1.5本测试方法只能由通过微生物技术训练的人员执行。1.6 数值用SI单位制做为标准。标准中不会使用其他计量单位。1.7本标准可能涉及危险材料、操作和设备。本标准不会列举所有与使用有关的安全问题。本标准使用者有责任建立合适的安全和健康的实施方式，确定使用前法规限制的适用性。2. 相关文件2.1 AATCC文件AATCC 147-2004：纺织品的抗菌性平行划线法AATCC 100-2004：抗菌纺织品的评价方法3. 测试方法总结3.1 底物结合
3、非沥滤抗菌剂的抗菌活性，是通过细菌直接接触活性化学试剂来确定的。此项测试所得到的抗菌活性，是通过处理试样在高浓度的菌悬液中振荡接触一小时后确定。其中悬浮液通过接触培养前后的连续稀释，最后对比在悬浮液中存活生物体的数目，与之前正常试样中的存活生物体数目，计算得到减少百分数（或者是log10数值）。4意义和应用4.1然后在通常使用情况下，由于化学键的作用，抗菌剂不会自由扩散到它们的环境中。通常的纺织品测试方法是不适合对固定抗菌剂作评价的，例如AATCC 147-2004这种方法，它是直接在处理后织物上使用已过滤好的抗菌剂。这种测试方法通过在测试期间不断的搅拌，保证了细菌与处理过的纤维，织物，或其他
4、原材料的良好接触。4.2 被测试物种的代谢状态直接影响抗菌剂效果或是试剂浓度的测量。被测试物种对特定灭菌剂的敏感性会通过生命周期发生改变。在缓冲液中的一小时接触时间可以使物种的新陈代谢时间暂时停滞。本测试方法同时规定了被测试物种的生长条件和与原材料的接触时间，以减少微生物在成长过程中的多变性。4.3 对非浸出剂的液态抗菌活性分析可以提供完全湿润测试原材料。随着表面润湿活性剂的使用，可以减少使用疏水和亲水性原材料时带来的负面影响。4.4 这种测试方法不适合直接对比浸出与非浸出抗菌剂活性剂。在液态环境下，浸出剂可以以不同的速率释放活性成分。此时，浸出剂的抗菌活性可能会在连续稀释后还残存于悬浮液中，
5、并在接触时间后继续发挥作用，除非在实验结束时可以完全分离。对这些影响因素的控制不包括在此项测试方法内，因此必须有其它方法来确定浸出抗菌剂的残留。4.5 本试验适用于评价破坏或修正样品，条件是必须能对其有足够的控制。注1 - 破坏可能包括衣物洗涤，穿着与磨损，辐射与蒸汽灭菌，紫外线照射，溶剂处理，温度敏感变化，或类似的物理或化学处理。5设备5.1 带孔琼脂，直径8mm；5.2 空气置换吸管，100 -1000L，带一次性吸管；5.3 分析天平，用于称量化学品和原材料，移液管，用于量取培养液；5.4 玻璃器皿：5.4.1具塞250mL锥形烧瓶，耐高温；5.4.2 试管，18150mm无框细菌测试专
6、用，用于测试生物增长和连续稀释；5.5 保温装置，能够保持温度为352； 5.6 腕式振荡器，能够连续振荡细菌与底液；5.7 分光光度计，能够测量的吸光度475nm；5.8 无菌血清移液管，50mL与100mL；5.9 消毒器，任何可以制造无菌条件的蒸汽消毒器；5.10旋涡混合器，在溶液稀释过程中搅拌稀释液；5.11水浴锅，用于短期存储液化琼脂，维持在45至50。6试剂6.1 缓冲液用分析级化学品配制以下溶液溶液的制备从试剂级化学品。缓冲液（0.25M磷酸二氢钾）：每6个月至少配置一次新溶液：称取340.1g磷酸二氢钾，倒入1000mL烧杯中，加入500mL去离子水。用NaOH溶液调节pH值至
7、7.20.1。加入去离子水稀释至1000mL，倒入烧瓶中，在4条件下保存。缓冲液（0.3mM磷酸二氢钾）：每2个月至少配置一次新溶液：用无菌移液管吸取0.01mL的缓冲液，移至烧瓶中，加入800mL去离子水稀释。加塞，消毒，在室温下保存。6.2 介质6.2.1 胰蛋白酶大豆培养基，根据客户的要求制备；6.2.2 平皿计数琼脂，根据客户的要求制备；6.3 润湿剂，试剂必须预先通过测试，不会影起细菌数量的增多或减少。DC Q2-5211对于0.01的缓冲稀释溶液必须是有效的。7测试用细菌7.1大肠埃希氏菌，美国标准菌库，No.25922；7.1.1测试菌体的培养应通过良好的微生物测试，并保证纯度。
8、连续和准确的测试需要一个纯净，无污染的测试环境。通过良好的电镀消毒技术避免污染。定期通过平板划线分离法检查菌种纯度，观察大肠埃希氏菌与革兰氏染色菌落的特征。注2原始的方法，ASTM E2149-01，指定克雷伯菌作为试验的有机体。本试验方法中使用大肠杆菌因为它更容易处理，而且是一种更普遍接受的测试类型有机体。.8参数8.1 表面处理或条件必须确定。样品需要做预先处理以保证在测试时间内能达到最大活性，而且需要与之前相同处理过的样品相比较；8.2 重量，尺寸，样品的材料必须确定。8.3 试样需要通过最大限度的搅拌来制备，使得它们可以真实反映测试中表面面积的比值。9细菌培养液的制备9.1 测试前，在352的胰蛋白酶大豆培养液中振荡培养大肠杆菌18小时；9.2 用无菌缓冲溶液稀释菌群，直到溶液在475nm的吸光度达0.280.02，用分光光度计测量。此时的浓度为1.5-3.0108 CFU/mL。加入适量无菌缓冲液调节浓度为1.5-3.0105CFU/mL。最后得到测试用细菌稀释液。
