月季组培方案

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1、月季的组培一、工作目标通过此项工作掌握植物组织培养的基本知识,并掌握月季的组培技术二、材料用具超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、无菌培养皿、酒精灯、接种工具、无菌瓶、烧杯三、工作过程1. 培养基的配置初代培养基:MS+6-BA0.53.0mg/L+NAA0.011.0mg/L继代培养基:MS+BA0.52.0mg/L+NAA0.010.05mg/L生根培养基:1/2MS+IBA 0.2mg/L+活性炭2. 培养过程(1) 外植体的选择一般选取生长健壮的带腋芽的枝条是较适宜的外植体,选芽以茎段 中芽为最好,采样成活率较高,枝条须保留一部分包裹住腋芽的叶柄,避免在消毒时芽受到 太大损伤(2) 外植体

2、的消菌灭毒接种材料为当年抽生侧芽饱满的幼嫩茎段,自来水冲洗10-20min 75%或70%乙醇浸泡30s,0.1%升汞表面消毒3min无菌水冲洗4-5次,将侧芽切下接 种到MS培养基上,获得无菌苗备用取回枝条用自来水冲洗干净,无菌条件下 用70%酒精表面消毒30-40s,再用0.1%Hgcl2溶液灭菌5-10min最后用无菌水冲洗3-5次(3)初代培养将消毒后的外植体放入带有滤纸的无菌平皿中,用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成5mm大小、 茎段长23cm,每段至少有一个侧芽、将花苞打开取花药,分别接种到带有培养基的培养皿 中并封口(每皿35个),标记好后,放入培养室中培养2周左右(4)继代培养挑选长有

3、愈伤组织的外植体,将其转移到分化培养基中。在超净工作台中,将培养皿封口膜在酒 精灯旁打开,将长有愈伤组织的外植体用灭菌的镊子从平皿中取出,转移到带有分化培养基 三角瓶中(每瓶最多)并封口。(5)生根培养苗高23cm,茎粗0.1cm左右,苗开始木质化,此时进行生根培养,把苗转移到生根培养基上。 观察它生长情况。(6)驯化小苗接到生根培养基上后,14d可见基部分化出根点,20d则长出许多白根。此时组培阶段结束,进入试管苗移栽成活阶段。所有试管苗移栽前都应先将生根 苗移至室温进行移栽前的锻炼。锻炼时问与移栽成活率有关,练苗7d以上,成活率达到 95%。(7)移栽移栽时应保持90%以上湿度,1825C的环境温度,基质用0.2 %的高锰酸钾或其他灭菌剂 进行消毒灭菌。而基质的选择上,以蛭石和珍珠岩的栽培效果较好。移栽成活后喷极稀的营养液,使 小苗得到营养补充。1015d即长出新叶,且根系快速生长,可适时进行大田移栽。

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