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1、第5章 药物的杂质检查学习目标 1.掌握杂质限量的概念、限量检查的常用方法、限量的表示方法及计算；熟悉药物纯度的概念；了解药物中杂质的来源和分类。2.掌握氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、干燥失重等一般性杂质的检查原理和方法；熟悉炽灼残渣、砷盐、水分、溶液颜色、溶液澄清度、易炭化物、残留溶剂检查的原理和方法。3.了解药物中特殊杂质的检查方法和原理。第1节 药物的纯度与杂质链接： 青霉素为什么会过敏青霉素是由-内酰胺和噻唑二个环组成的小分子药物，它本身没有抗原性，不能直接引发过敏反应。研究认为青霉素过敏反应的过敏原是制剂中高分子杂质。青霉素在培养发酵过程中同时可以形成青霉噻唑蛋白、多肽等具有强致敏性
2、物质，若在青霉素生产工艺中未能完全去除就将残留在青霉素制品中，而成为重要的过敏原。近年来国内经过大量病例的临床观察和试验研究，发现杂质含量随生产厂家、生产工艺和批号的不同而不同。减少青霉素过敏反应的关键是提高产品纯度，严格控制高分子杂质的含量。一、药物的纯度药物的纯度即药物的纯净程度，它是反映药品质量优劣的一个重要指标，药物中的杂质是影响药物纯度的主要因素。药物在生产和贮藏过程中，都可能引入杂质，药物中的杂质有的会影响药物的疗效和稳定性，有的甚至危害人体健康，因此检查药物中的杂质，控制药物的纯度，是保证药品质量和疗效的一个重要方面。杂质的检查收载在药品质量标准的检查项下，检查的项目一般按杂质的
3、名称命名，如“铁盐”、“重金属”、“砷盐”等。除此以外，药物的纯度还与药品的性状、理化常数、含量测定等项目有关。药物的纯度和化学试剂的纯度是不同的，即药用规格与试剂规格，前者主要从用药的安全性、有效性以及对药物稳定性的影响等方面考虑，后者是从杂质可能引起的化学变化、试剂使用范围和目的来考虑的，并不考虑杂质的生理作用及毒副作用。药物只有合格品与不合格品，而化学试剂可根据其所含杂质的量分为不同的等级(如基准试剂、色谱纯、优级纯、分析纯及化学纯等)，因此不能以化学试剂代替药用规格。二、杂质的来源和种类（一）杂质的来源药物中的杂质，主要有两个来源：一是由生产过程中引入；二是在贮存过程中产生。1.生产过
4、程中引入的杂质（1）药物在生产合成过程中，由于所用原辅料不纯，或未反应完全、反应中间体或副产物在精制时未能完全除去而引入杂质。例如以水杨酸为原料合成阿司匹林时，可能由于乙酰化不完全而引入水杨酸。（2）生产中所用溶剂的残留以及与生产器皿接触而带入杂质。在生产中使用金属器皿、管道和不耐酸碱的金属工具，可能引入砷盐和铅、铁、铜、锌等金属杂质。（3）药物在制成制剂的过程中，也可能产生新的杂质。如盐酸普鲁卡因注射剂在高温灭菌过程中，可能水解为对氨基苯甲酸和二乙氨基乙醇，而干燥的盐酸普鲁卡因原料药不会存在这两种杂质，因此中国药典（2005年版）中盐酸普鲁卡因原料药不检查对氨基苯甲酸，而其注射剂则要求检查此
5、杂质。2.贮藏过程中产生 药物在储藏过程中，由于保管不善，或贮藏时间过长，在外界条件如温度、湿度、日光、空气的影响下，或因微生物的作用可能发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化，而产生的有关杂质。如青霉素的水溶液遇碱易水解为青霉酸，受热可进一步分解为D一青霉胺和青霉醛而使青霉素失效。此外，在水分和适宜的温度下，微生物可使一些有机药物霉变失效。（二）杂质的分类药物中的杂质可按不同的标准分为不同的类型。1.按杂质的来源分类 可分为一般杂质和特殊杂质。一般杂质是指在自然界中分布广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质，如氯化物、硫酸盐、重金属等。特殊杂质是指在个别药物
6、的生产和贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸；肾上腺素中的肾上腺酮等。2.按杂质的性质分类 可分为信号杂质（指示性杂质）和有毒有害杂质。信号杂质本身一般对人体无害，但其含量的多少可以反映出药物的纯净程度，如氯化物、硫酸盐等，如含量过多，表明药物的纯度差。有毒有害杂质对人体有毒害作用，如重金属、砷盐、氰化物等，所以在质量标准中应加以严格控制，以保证用药的安全。链接：为什么有的人原来对某种药品不过敏，后来却过敏了？人体原来没有接触过某种药品，身体里没有对这种药品的抗体，一般不会发生过敏反应。接触过这种药品后，身体里有了抗体，再遇到这种药品，就可能发生过敏反应。另外，有些人的过敏反应主要是
7、对药品里的杂质、辅料、添加剂过敏。不同厂家采用不同的生产工艺或生产设备，不同的辅料、添加剂，产品的杂质情况不同，也会出现“原来不过敏、后来过敏”的情况。第2节 杂质的限量检查与计算一、杂质的限量药物在生产和贮存过程中，会不可避免地引入杂质，但要把药物中的杂质完全除掉，会增加生产工艺上的难度，使成本增加。从药物的生产、贮藏、使用上来看，不仅不可能，也没有必要完全除去，因此在不影响疗效、不产生毒性以及便于生产、制剂和贮藏的原则下，药物中允许有少量的杂质存在。药物中所含杂质的最大允许量，叫做杂质限量，通常用百分之几（%）或百万分之几（ppm）来表示。对危害人体健康，影响药物稳定性的杂质，必须严格控制
8、其限量，如砷盐、重金属、氰化物等。二、杂质的限量检查与计算药物中杂质的检查，一般不要求测定其含量，而只检查其是否超过限量，这种杂质的检查方法叫做杂质的限量检查。药品质量标准中的杂质检查多为限量检查。杂质的限量检查有以下三种方法：1.对照法 杂质限量检查时多数采用对照法。对照法是指取一定量被检杂质的标准溶液与一定量供试品溶液在相同条件下处理后，比较反应结果(比色或比浊)，从而判断供试品中所含杂质是否符合限量规定。对照法的特点是只需通过供试液与对照液比较即可判断药物中所含杂质是否符合限量规定，不需测定杂质的准确含量。目前，各国药典主要采用该法作为药物中杂质的检查方法。药物中杂质的限量可用下式计算：
9、由于供试品中所含杂质的量是通过与一定量杂质标准溶液进行比较来确定的，杂质的最大允许量即是杂质标准溶液的浓度(C)与体积(V)的乘积，因此杂质限量(L)的计算可用下式表示： 即： 式中：C（g/ml）；V（ml）；（g）。 使用此法时，须遵循平行操作原则，注意所用仪器、器皿的对称性，供试溶液和对照溶液应在完全相同的条件下进行，如加入的试剂、反应的温度、放置的时间等均应相同。只有这样，反应的结果才有可比性。案例分析案例：二羟丙茶碱中氯化物的检查取本品0.25g，加水5ml与氢氧化钠试液1.0ml煮沸30秒钟，放冷，依法检查，与标准氯化钠溶液（(每lml相当于10g的Cl)）7.0ml用同一方法制成
10、的对照液比较，不得更浓。计算氯化物杂质的限量。解： 案例：二羟丙茶碱中重金属的检查取本品1.0g，加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml与水适量使溶解成25m1，依法检查，含重金属不得过百万分之二十，应取标准铅溶液（每1ml相当于10g的Pb）多少毫升？解： 则 2.灵敏度法 灵敏度法是在指供试品溶液中加入一定量的试剂，在一定反应条件下，不得有正反应出现，来判断杂质是否符合限度规定。本法的特点是以该检测条件下的灵敏度来控制杂质限量，不需对照物质。案例：纯化水中氯化物、硫酸盐、钙盐的检查：取本品，分置三支试管中，每管各50ml。第一管中加硝酸5滴与硝酸银试液1ml，第二管中加氯化钡试液2ml，第三管
11、中加草酸铵试液2ml，均不得发生浑浊。3.比较法 是指取一定量的供试品按该药品项下的方法处理，测得待检杂质的吸收度、旋光度、pH值等与规定的限量比较，不得更大。比较法的特点是，可以准确测得杂质的响应值（吸收度、旋光度、pH值等）并与规定限量比较，不需要对照物质。案例：盐酸甲氧明中酮胺的检查：取本品，加水制成每1ml中含1.5mg的溶液，照紫外一可见分光光度法，在347nm的波长处测定，吸光度不得过0.06。案例：苄达赖氨酸中酸碱度的检查：取本品1.0g，加水50ml溶解后，依法侧定，pH值应为5.57.5。第3节 一般杂质的检查方法一、氯化物检查法在药物的生产过程中，经常用到盐酸或将药物制成盐
12、酸盐的形式而被引入。氯化物作为信号杂质，可以反映出药物的纯净程度以及生产过程和贮存条件是否正常，因此要控制药物中氯化物的量。1.检查原理 利用氯化物在硝酸酸性溶液中与硝酸银试液作用，生成氯化银的白色浑浊，再与一定量标准氯化钠溶液在相同条件下生成的氯化银浑浊比较，判断供试品中的氯化物是否符合规定限量。 (白)2. 标准氯化钠溶液的配制：称取氯化钠基准物0.165g，置1000m1量瓶中，加水适量使其溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，精密量取贮备液10ml，置100m1量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于10g的Cl)。3.操作方法 供试品溶液的制备：除另有规定外，取各品种
13、项下规定量的供试品，加水溶解使成25ml(溶液如显碱性，可滴加硝酸使成中性)，再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，应滤过；置50ml纳氏比色管中，加水使成约40m1，摇匀，即得供试溶液。对照溶液的制备：另取该品种项下规定量的标准氯化钠溶液，置50ml纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40m1，摇匀，即得对照溶液。于供试溶液与对照溶液中，分别加入硝酸银试液1.0m1，用水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生的浑浊（供试管的浑浊不得比对照管的浑浊深）。供试溶液如带颜色，通常采用内消色法处理，即取供试溶液适量分成两等份，分置50ml纳氏比色管中
14、，一份中加硝酸银试液1.0ml，摇匀，放置10分钟，如显浑浊，可反复滤过，至滤液完全澄清，再加规定量的标准氯化钠溶液与水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟，作为对照溶液；另一份中加硝酸银试液1.0ml与水适量使成50ml，摇匀，在暗处放置5分钟；与对照溶液同置黑色背景上，从比色管上方向下观察，比较所产生的浑浊。4.注意事项 （1）加入硝酸可避免、等杂质的干扰，同时还可加速氯化银浑浊的生成并产生较好的乳浊；（2）供试溶液如不澄清，可预先用含硝酸的水洗净滤纸中的氯化物，再滤过供试溶液，使其澄清；（3）供试溶液与对照溶液在加入硝酸银试液后，应立即充分摇匀，以防止局部过浓而影响产生的浑浊；比浊前
15、在暗处放置5分钟，是为了避免光线直接照射使单质银析出；（4）由于氯化银为白色沉淀，比较时应将比色管置黑色背景上，从上向下观察浊度，较易判断；（5）应选用配对、无色、直径大小相等、刻度高低一致的纳氏比色管。用后的比色管应立即清洗，不得用毛刷刷洗，以免损伤比色管，影响观察结果。（6）供试液与对照液同时操作，加入试剂顺序一致。(7)标准NaCl溶液1ml相当于10mg的CI，50ml溶液中含5080mg的Cl-所显浑浊梯度明显，相当于标准NaCl溶液58ml。 案例：葡萄糖中氯化物的检查取本品0.60g，依法检查，与标准氯化钠溶液6.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.01%)。二、硫酸盐检查法硫酸盐也是一种广泛存在于自然界中的信号杂质，硫酸盐检查是检查药物中的。1.检查原理 硫酸盐在盐酸酸性溶液中与氯化钡作用生成硫酸钡浑浊液，与一定量的标准硫酸钾溶液在同一条件下生成的浑浊液比较，以检查供试品中硫酸盐的限量。 （白色）2. 标准硫酸钾溶液的配制：精密称取硫酸钾0.181g，置1000m1量瓶中，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml相当于100ug的）3
