固定液和保存液

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1、(七)固定液和保存液 用固定液固定动植物整体或它的一部分组织和气管等，能保存组织内细胞的形态、结构及其组成，尽量使它 近于生活状态。固定液一般有防腐和保存的作用，分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有 乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、升汞等，前两种固定液是中学生物实验室常用的。单纯 固定液的优点是简便，缺点是有一定的局限性，不易达到理想的固定要求。混合固定液有几种不同的药液按 一定的比例混合而成，使各自的优缺点相互补充，成为较完美的固定液。这种固定液的制备虽比较麻烦，但 是效果比较好。常用的混合固定液是醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。 常用的

2、保存液大致跟固定液相同，主要是福尔马林、酒精、甘油以及由这些药物按比例配制成的各种混合液。 有时按特殊保存的需要，再保存液中增加某些药品(如原生标本的保存液)。1、福尔马林 福尔马林在固定组织标本时杀菌能力强，所以防腐性强，渗透力大，固定得快。永福尔马林固定精细的解剖 标本时，要跟甘油、酒精、石炭酸等混合使用。固定液常用的浓度是510% (根据材料的大小、性质和数量而定)。保存液常用的浓度是510%。用福尔马林作保存液，效果好且价格低廉。 在配制福尔马林溶液(固定液或保存液)时，应将3740%的甲醛作为整个溶质来配。例如配制 5%福尔马林 是取市售3740%甲醛溶液5毫升跟95毫升蒸馏水混合。

3、实际上甲醛含量只有1.92%，这样的配法已成为 一般实验室常用的惯例。I .i ( r-*-. r f注意事项：(1) 福尔马林业在长期贮存中会产生蚁酸，可适量的加入碳酸钙( )或碳酸镁( )等碱性物质进行中和。(2) 福尔马林业作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低，并且福尔马林液再保存中往往形成多聚甲醛，使 浸液变浊，影响观察。所以，根据一定保存期的情况，可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液，以防标本 变坏。其中如有白色沉淀物，加热后可使它溶解。(3) 市售的福尔马林液常带有酸性，能腐蚀石灰质，因此，最好不用福尔马林液浸制有石灰质外壳的动物。2、酒精(乙醇) 酒精也是常用的固定液，它有强烈的杀

4、菌作用，对组织材料的渗透力较大，固定的快。但是，它的脱水作用 较强，在高浓度的酒精中容易使材料显著硬化和收缩。一般用于固定浸制标本材料，分一级或二级固定，即 70%或50%与70%的酒精。有些小型材料或精细的解剖材料，最好用二级或三级固定，即用50%、 70%或50%、 60%、70%的酒精，最后再进行保存。从经济效果来考虑，一般酒精应跟福尔马林液等固定液混合使用。 市售的工业用酒精浓度是95%左右，因此用时要重新配制。保存液的浓度通常是70%。I .i I r-*-. r f注意事项：(1) 在固定材料时要注意固定的效果，小型材料一般放在固定液中固定。大型材料必须先往体内注射一部 分固定液，

5、再放入固定液中，防止材料内部腐怀变质。用福尔马林液固定也是如此。(2) 高浓度的酒精有脱水、脱脂作用。含有多量脂肪或拟脂标本(如脑、脊髓)等都不宜用较高浓度的酒 精作保存液。(3) 为了防止酒精使标本硬化，保存一些精细的材料或解剖标本时，因加入少量甘油，因为甘油具有润软 组织的作用。(4) 忌跟铬酸、锇酸和中铬酸钾等氧化剂配合。3、醋酸醋酸即乙酸，纯醋酸在低于16.7 摄氏度时会凝成冰状固体，所以叫冰醋酸。醋酸能很快穿透组织，因为它 不能沉淀细胞质中的蛋白质，组织不会硬化。一般常跟酒精、福尔马林、铬酸等容易引起组织变硬和收缩的 液体混合，以起到相互抵消的作用。醋酸固定液的常用浓度是0.3%5%

6、。4、苦味酸苦味酸是一种黄色结晶，能溶于水（溶解度是0.91.2%）、酒精（溶解度是4.9%）和苯（溶解度是10%）。 苦味酸也能沉淀一切蛋白质，穿透较慢，固定后，组织收缩明显，但不使组织硬化。苦味酸固定液可以在100毫升蒸馏水中加入苦味酸约1.5克，制成饱和水溶液。固体苦味酸易爆，长制成饱 和水溶液保存。5、升汞 升汞又叫氯化汞，是白色粉末，以针状结晶为最纯。通常固定时用饱和水溶液，有时也用70%酒精作溶剂， 不单独用作固定剂。升汞的穿透力较弱，通常用于小型材料，对蛋白质有强烈的沉淀作用，硬化程度中等。 固定液用饱和溶液，浓度约为7%。6、卡尔氏（Carls）液配方95%酒精 170毫升蒸馏

7、水 280毫升福尔马林 60毫升冰醋酸 20毫升冰醋酸要在临用前加入。这时极好的昆虫保存液，常用来杀死和保存小型、身体柔软的种类入螨、蜈蚣、马陆等。在这溶液里加入少 量甘油，能防止虫体变脆。7、卡诺氏（Carnoys） 液配方纯酒精 6份 冰醋酸 1份氯仿 3份这种固定液能固定细胞质和细胞核，尤其适宜于固定染色体，所以多用于细胞学的质片，还用来固定腺体、 淋巴组织以及原生动物的胞壳等。这种固定液穿透得快，因此一般小块组织固定2040分钟，大型材料不 超过34小时。固定后用95%或纯酒精洗涤，换液两次，移到石蜡中或用80%酒精保存。8、吉尔桑氏（Gilson ）液配方60%酒精 50毫升 冰醋酸

8、 2毫升80%硝酸 7.5毫升升汞 10克蒸馏水 440毫升这是常用的固定液，适用于肉质菌类，特别是柔软胶质状的材料如木耳等，也广泛用于无脊椎动物和一般组 织和蛙胚的固定。固定时间1820小时，然后用50%酒精冲洗材料，除去升汞。如果用水冲洗，会使材料 膨胀。混合液保存2 4小时后失效。9、福尔马林-醋酸-酒精溶液（FAA）液配方50%酒精 85 毫升 福尔马林 10 毫升冰醋酸 5 毫升这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织，昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定12 小时，木质化组 织要固定1 周，材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在 50%酒精中冲洗 12 次。4、细胞质染色剂配方

9、一 伊红染液伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。（1）取 1 克伊红，溶于 99 毫升蒸馏水中，即成 1%伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨 水稀释液来代替本溶液）。（2）取 1 克伊红，溶于 99 毫升 70%酒精中，即成 1%伊红-酒精溶液。配方二 甲基蓝染液取1 克甲基蓝，溶于29 毫升 70%酒精中，加入 70 毫升蒸馏水，即成 1%甲基蓝染液。配方三 亮绿染液取 0.5 克亮绿，溶解在 100 毫升蒸馏水中，即成 0.5% 亮绿溶液。5、细胞核染色剂配方一 甲基绿染液取1 克甲基绿，溶于99 毫升蒸馏水中，加入1毫升冰醋酸。本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁。 配方

10、二 龙胆紫染液取1 克龙胆紫，溶于少量2%醋酸溶液中，加 2%醋酸溶液，直到溶液不呈深紫色止。配方三 美蓝（亚甲基蓝）染液取 0.5 克美蓝，溶于 30 毫升 95% 酒精中，加 100 毫升 0.01% 氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内 。 此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。配方四 硼砂-洋红染液取4 克硼砂，溶于96毫升蒸馏水中。再加入2 克洋红，加热溶解后煮沸30 分钟，静置3 日，用100毫升 70%酒精冲淡，放置 24 小时后过滤。此染液能染细胞核，还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色，如水螅、血吸虫等整体标本。配方五 德氏（Delafields）苏木精染液甲液 取 1

11、 苏木精，溶于 6 毫升无水酒精中，即成苏木精-酒精溶液。乙液 取 10 克铵矾溶于90 毫升蒸馏水中，即成 10%铵矾水溶液。取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使它充分氧化。34天后将溶液过滤，在滤液中 加入25毫升甘油和25毫升甲醇，保存在密闭玻璃瓶内。静置12个月，待该液颜色变深时过滤，可长 久保存。本染液是染色体的优良染色剂，除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。配方六 席夫（Schiffs）试剂称取0.5 克碱性品红，加到100毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热5 分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液 冷却到50摄氏度时过滤，滤液中加入10毫升1N盐酸。再冷却到

12、25摄氏度时加入0.5克偏重亚硫酸钠（） 或无水亚硫酸氢钠（ ）。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中24 小时。在溶液颜 色退到淡黄色时，加入0.5 克活性炭，用力摇荡1 分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤 液应该是无色的。在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光（瓶外用黑纸或暗盒遮光）。如溶液变成 红色，即失去染色能力。碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏（Feulgens）反应中作为组织化学试剂，以检查DNA。6、染色体染色剂配方一 醋酸-洋红染液取45 毫升冰醋酸，加蒸馏水55 毫升，煮沸后徐徐加入洋红 1 克，搅拌均匀后加入1 颗铁锈钉，煮沸10 分钟，

13、冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。配方二 醋酸-地衣红染液取45毫升醋酸，跟55毫升蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末12克，搅拌溶解后，缓缓煮沸2 小时。冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。配方三 龙胆紫染液 取1克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到100毫升，保存在棕色瓶内。配方四 甲苯胺蓝染液 取0.5克甲苯胺蓝，溶解在100毫升蒸馏水中，即成0.5%甲苯胺蓝水溶液。7、线粒体染色剂配方一詹钠斯绿B（Janus green B）酒精饱和溶液取125毫升詹钠斯绿B，加入到62.5毫升无水酒精中，搅拌，即成烟鲁绿B酒精饱和染液。（1）取詹钠斯绿酒精饱和染液按1：30000比例加蒸馏水稀释，用来

14、染原生动物线粒体。（2）取詹钠斯绿酒精饱和液，按1：10000比例加蒸馏水稀释，用来染新鲜蛙血线粒体。配方二詹钠斯绿B中性红染液先配制詹钠斯绿B和中性红酒精饱和液。詹钠斯绿酒精饱和液见配方一。中性红酒精饱和液配制方法：取 125毫升中性红，加入到50毫升无水酒精中，搅拌。在10毫升生理盐水（两栖类生理盐水浓度为0.65%；哺乳类生理盐水浓度为0.9%）中，加入詹钠斯绿B 酒精饱和液0.71毫升，中性红酒精饱和液2毫升，混合。詹钠斯绿B稀释液是活体染液。8、脂肪染色剂苏丹III染液取0.1克苏丹III,溶于20毫升95%酒精中，即成0.5%苏丹III染液。这染液能染脂肪，还能染木栓、角质层。9、

15、血液染色剂配方一瑞氏（Wrights）染液取瑞氏染料粉末0.1克和甲醇60毫升。把染料放在研钵内，加少量甲醇研磨，使染料溶解，然后把溶解 的染料倒入干净的棕色玻璃瓶。并用完甲醇为止。配制好的染液在室温中保存，即可使用。新鲜配制的染 液偏碱性，放置后呈酸性，染液贮存愈久染色愈好。这染液的适宜pH值是6.46.8。因此，染色时加入 缓冲液，可维持一定的酸碱度，使染色效果更好。这种染液除能染血液，还能染疟原虫。瑞氏染料可以自制。在100毫升0.5%碳酸氢钠水溶液里加入1克美蓝，溶解后放在锅内，蒸上1小时，取 出冷却后过滤。在滤液里加入0.1%伊红水溶液500毫升，随加、随搅拌，使混合液呈紫色。静置一夜后， 用滤纸过滤。滤纸上的沉淀物，在室内风干或放在干燥箱内，充分干燥后研磨成粉末，即成瑞氏染料。配方二 甲基紫染液 取甲基紫0.5克，加到100毫升生理盐水中，溶解后加入冰醋酸0.02毫升。10、吸虫染色剂梅耶氏（Mayers ）明矶-洋红染液取铵明矾（硫酸铝铵）5克，溶于95毫升蒸馏水中，再加入0.5克洋红酸，加热溶解，冷却后过滤。在滤 液中加入少量防腐剂，如麝香草酚、樟脑粉、水杨酸钠、苯酚（石炭酸）等，以防生霉。这种染液适合于染小型动物材料，如吸虫等寄生虫的整体，也能染高等植物的表皮和蕨类植物的原叶体。1