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1、香蕉DNA的粗提取实验广州市第一一三中学 马敏贤一、实验目的1、学习 DNA 的粗提取方法2、学习DNA的化学鉴定方法二、实验原理1、研磨能够破坏细胞结构，释放其中含有的DNA，清洁剂中含有的SDS（十二烷基磺酸 钠）具有使蛋白质变性，与DNA分离的作用。2、DNA可以溶解在一定浓度的NaCl溶液中，3、DNA在酒精中不溶解，所以加酒精后DNA可以析出4、甲基绿为碱性染料，它易与聚合程度高的DNA 结合呈现绿色。三、材料器具器具：研钵、纱布、漏斗、烧杯、玻璃棒、量筒（10ml支）、滴管、试管（20ml两支）材料：香蕉、洗洁精、95%酒精、蒸馏水、0.015mol/L的NaCl溶液、2mol/l
2、的NaCl溶液、 甲基绿试剂四、方法步骤1、制备材料切取一段2厘米长的香蕉，切碎，置于研钵内加入2毫升洗洁精，充分研磨加入10毫升2mol/l的氯化钠溶液，继续研磨2、过滤将研钵内的香蕉糊用漏斗和纱布过滤到烧杯中。3、提取 DNA往上述液体中加入到约两倍体积的95%的酒精，轻轻摇动或用玻璃棒轻轻搅拌，很快就 会看到白色纤维状粘稠物质从滤液中析出来，这就DNA粗提取物。4、鉴定方法一：取两支试管，分别编为1号、2号，各加入0.015mol/L的NaCl溶液2ml，将所得 的白色絮状物质取出一部分放入1号试管，搅拌使其溶解，然后向两支试管中分别加入两滴 甲基绿试剂，1 号试管呈现绿色，则说明白色絮
3、状物是 DNA。方法二： 用玻璃棒卷起白色絮状物，并在白色絮状物中直接滴加甲基绿染液，用蒸馏水洗 去浮色，絮状物呈现绿色，说明该白色絮状沉淀为DNA。五、实验结构与结论研磨能够破坏细胞结构，释放其中含有的DNA，清洁剂中含有的SDS（十二烷基磺酸钠） 具有使蛋白质变性，与DNA分离的作用。DNA在氯化钠溶液中的溶解度在2mol/L时最大， 因而在香蕉碎的研磨过程中加入洗洁精和2mol/L的氯化钠溶液，主要目的是让香蕉的DNA 与蛋白质分离并溶解。由于 DNA 不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原 理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。在此过程中若用冷的酒精效果会
4、更好，因为用 冷的酒精可以降低DNA的溶解性，同时又可以增加DNA的韧性。甲基绿对DNA具有亲和力，能使DNA呈现绿色。利用此原理，若析出的白色絮状物 能够与甲基绿反应呈现绿色，则该白色絮状物为DNA。鉴定方法一中使用到0.015mol/LNaCl溶液，其作用是将所提取的DNA再次溶解，在此 溶液中加入甲基绿，若溶液呈现绿色，则证明析出的白色絮状物为DNA.六、创意自评本实验是高中旧课本中利用鸡血细胞粗提取DNA的改良实验，由于实验步骤不是特别 复杂，因而我认为可以作为课外活动的实验安排在七年级上册第二单元第二章第二节细胞核 是遗传信息库后面。让学生通过自己动手操作对DNA进行粗提取，化微观的、抽象的内容 为直观地、实在的物质，让学生对DNA有一个直观的认识，亲身感受到DNA的真实存在。由于DNA在酸性环境下遇二苯胺经沸水浴后会染成蓝色，在传统实验中往往都将二苯 胺作为鉴定DNA的试剂。但是芳香胺很毒而且容易渗入皮肤，无论吸入它的蒸汽，或皮肤 与之接触都能引起中毒。二苯胺属于芳香胺，也有上述性质，同时在使用过程中会挥发出刺 激性的有毒蒸汽，实验后的废液对环境的污染很大，并且持续时间也很长。出于对学生身体 健康和环境保护角度的考虑，本实验采用了甲基绿对粗提取的DNA进行鉴定。同时由于二苯胺法鉴定DNA需要对试管进行沸水浴，甲基绿鉴定法则不需要加热，简 化了实验操作步骤。
