《植物组织培养设计方案》由会员分享，可在线阅读，更多相关《植物组织培养设计方案（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、组织培养自主选材实验方案组员：材料月季茎段、10-15cm高的健壮干净的芦荟幼苗茎段、健康干净的百合花所需用品及数量：超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、电热炉XI、镊子X4、解剖刀X2、解剖剪 X2、1L搪瓷量杯XI、500ml烧杯X2、100ml烧杯X2、1L量筒XI、250ml三角瓶X3、 100ml量筒X2、培养皿X10、滤纸、吸水纸、保鲜膜、牛皮纸、100ml三角瓶X30、胶头 滴管X4、100ml量筒X2、广口瓶X2、玻璃棒XI、酒精棉球、橡皮筋X70、3%次氯酸钠、 无水乙醇、 0.1%升汞实验步骤：1、玻璃器皿清洗2、母液配制MS培养基配方（单位：mg） 大量元素（母液I）成
2、分称取量（母液500ml）称取量（母液1000ml）扩大倍数配1L吸取量（ml）nh4no3165003300020x50kno31900038000MgSO47H2O37007400KH2PO417003400CaCl22H2O4400880020x50微量元素（母液II）ZnSO47H2O8601720200x5H3BO36201240KI83166NaMoO42H2O2550CuSO45H2O2.55CoCl26H2O2.55铁盐（母液皿）NaEDTA2比037257450200x5FeSO47比027855570有机物（母液W）甘氨酸100200200x5盐酸硫胺素（B1）2040盐酸
3、吡哆醇素（B6）2550烟酸2550肌醇（单配）500010000100x10按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容 器中，再加入实际配制培养基体积约 2/33/4 的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放 入培养基并使其溶化：30g,以0.6%0.8%的比例加入琼脂：9g。搅拌加热使琼脂完全溶 化，用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HC1调整pH至5.65.8,并用蒸馏水定容至终体 积：1L。3、各激素培养基和灭菌月季：MS基础培养基+05 mg/L6-BA+005mg/LNAA, 250ml,分装为10瓶 芦荟：MS基础培养基+3mg/
4、L6-BA+0.3mg/LNAA，250ml，分装为10瓶 百合花：MS基础培养基+1.0mg/LN AA+0.2mg/L6-BA，250ml,分装为10瓶 分装时应特别注意不要污染瓶口，用裁成适当大小的二层牛皮纸封口，橡皮筋轧口。用记号 笔在瓶口的牛皮上写上组号及处理组名称。分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中灭菌，灭菌条件为温度121C，压力0.105MPa,灭 菌时间与培养基容量的关系如下表所示。注意要把锅内气体放掉。培养基体积与灭菌时间的关系培养基体积（ml）灭菌温度（C）灭菌时间（m in.）20501212050500121255005000125354、其他所需灭菌物品：10套培养
5、皿,若干滤纸,无菌水,若干吸水纸,解剖刀柄,剪刀,镊子等。5、接种操作方法1、材料预处理：（1）月季茎段洗净,带入无菌室；（2）、用自来水冲洗芦荟茎段10分钟,带入无菌室；（3）、将百合花放在0.5%-1.0%的洗衣粉水中漂洗15min,再用清水冲洗30min,带入 无菌室。2、用75%乙醇将净化工作台擦洗干净,将接种所用的、工具、培养基等准备好放入工 作台。打开紫外灯和风机至少20分钟后开始操作。3、用自来水将手洗净,然后用75%酒精将手消毒,才可进入超净工作台开始接种操作。4、关闭紫外灯,点燃酒精灯。5、取一无菌培养皿： 先用 75%酒精浸没月季茎段并轻摇10 秒进行预消毒； 倒出酒精,加
6、入 3% 次氯酸钠浸没,轻摇 11 分钟； 倒净次氯酸钠,用无菌水冲洗 5 遍以上,倒出无菌水。将消毒后的月季茎段放入无菌培养皿中,用解剖剪和解剖刀将嫩叶剪成1*1大小接种到 三角烧杯中,每瓶35个,接10瓶,用牛皮纸封口,并用油性记号笔写上接种日期。 将预处理的芦荟用75%的酒精浸泡30S-60S，然后用无菌水冲洗三次 用0.1%的升汞浸泡8分钟,再用无菌水冲洗三次 、取出芦荟外植体，放入无菌培养皿中进行切割，切割完毕后将芦荟茎段1*1放入培 养基中，每个三角烧瓶放6-7块，接10瓶，用牛皮纸封口, 并用油性记号笔写上接种 日期。 、将预处理的将百合花瓣，用75%的酒精浸泡30s-60s，然后用无菌水冲洗三次 、用0.1%的升汞浸泡5分钟，再用无菌水冲洗45次， 、取出百合花瓣，放入已灭菌的培养皿中进行切割，每次切割花瓣下部2*2大小，切割 完毕后将材料放入培养基中，每个三角烧瓶放34块， 接10瓶，将锥形瓶用牛皮纸包好， 并用油性记号笔写上接种日期。6、接种后的三角瓶用保鲜膜再次封口。置于培养室（靠窗部分）25C条件下，黑暗或光照 培养2-3周，直至愈伤组织形成。茎尖为材料，诱导、继代（丛生芽）培养基为MS+BA 2.5mg/l （以下单位同）+IAA 1.5
