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1、一、暗紫贝母内生真菌红色素的提取及稳定性研究张辉东，曾雪丽，陈鹊，吴卫 （四川农业大学农学院，四川雅安625014） 12 方法1. 2. 1红色素的生产和提取工艺菌种一扩培一 发酵一收集菌体一超声波提取一减压浓缩一红色 素粗品。1. 2. 2 菌体培养从保存试管培养基斜面上挑取 单菌落接种于PDA培养基中，28C，恒温培养3 d, 将菌丝转接于装有液体培养基的三角瓶中（150mL/ 250 mL）,总计 20 瓶，放于 26C、110 r / min 恒温 摇床培养7 d,抽滤，弃上清液，得红色菌体。1. 2. 3不同溶剂下红色素的提取方法称湿菌体6份，每份2. 0 g,分别加入去离子水、甲
2、醇、乙醇、甲醇 和丙酮的混合液（1 ： 1, V : V，下同）、丙酮、乙酸乙酯40 mL，在超声功率400 W、超声10 S间歇20 S条件 下超声破碎30 min,过滤除去菌体，即为红色素在 不同溶剂中的提取液。红色素的吸收光谱称取湿菌体 2. 0 g， 20 mL 丙酮作溶剂，超声波法 提取红色素，抽滤得红色素溶液，在25C下用日本 岛津UV2450型紫外分光光度计于190 nm到500nm 范围内扫描测定，测定结果见图 1。由图可知，红 色素在 210 nm 处有一个最大吸收峰，该峰为红色素2. 2 不同溶剂对红色素提取量的影响根据1.2.3所述方法获得的不同溶剂的红色素 提取液，分别
3、在210 nm处用紫外分光光度计测定吸 光度（OD）值。红色素在210 nm处的OD值与红色 素含量呈正比， OD 值越大，单位体积中红色素的含 量越高，即溶解度越大，提取量越高。结果见表1。从 表1可见，红色素在不同溶剂中测得的OD值不同 即溶解度不同。在室温条件下，红色素在丙酮中的OD 值最大，溶解度最大，提取量最大。23 红色素的稳定性分析231 酸碱度对红色素稳定性的影响取红色素提取液12等分，以NaOH和HCI溶液调pH,在室温下用pH酸度计调节各溶液的pH分别为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12,室温（25C）下避光放置 0. 5 h后，在210 nm下测定OD值
4、，结果见表2。由表 2可知，当pHV7时，随着pH降低，红色素溶液OD 值减少，颜色呈浅黄色，pH三7时，红色素溶液OD 值变化不大，颜色呈红色，说明红色素在碱性环境 中较稳定。2. 3. 2 温度对红色素稳定性的影响取 pH 为 9 的红色素溶液，分别在25、40、60、80、100C恒温水浴 中放置0. 0、0. 5、1. 0、1. 5 h,冷却至室温后定容至相 同体积，在 210 nm 处测定 OD 值，结果见表 3。由表 3可知，pH为9时，红色素溶液在25C到100C范 围内，随温度的升高，其OD值有先增大后减小的趋 势，但颜色变化不明显，可能是红色素中某化合物 的吸光基团因温度的升
5、高构象有所改变导致的。说 明该化合物的热稳定性较好。2. 3. 3光照对红色素稳定性的影响将pH为9的 红色素溶液分别置于光照和黑暗环境下，间隔一定 时间测定各溶液OD值，结果见表4。由表4和试验 观察可知，光照条件下，红色素溶液的 OD 值随着时 间的延长逐渐变小，从第3天开始，颜色逐渐变淡， 直至第6天，近于无色，而放于黑暗条件下的溶液， OD 值基本保持不变，而且颜色也无明显变化，说明 红色素对光照不稳定。可能是光照和温度的同时作 用，使得红色素的结构发生变化，减少了其溶液的 OD 值。2. 3. 4 紫外光对红色素稳定性的影响在波长210 nm的紫外灯下照射pH为9的红色素溶液，分别在
6、 照射了 0、20、40、60、80、100 min 时测定 OD 值，结 果见表5。由表5可知，在紫外光的照射下，红色素 溶液在 210nm 处的 OD 值只在一个较小的范围内 波动，说明紫外光对红色素的吸光基团影响不大， 对红色素的稳定性影响不大。2. 3. 5 碳水化合物添加剂对红色素稳定性的影响 取红色素溶液，分别配制含蔗糖、葡萄糖浓度为30 g/L的红色素溶液，在室温（25 C ）下避光放置0. 5 h 后，在210 nm下测定OD值，结果见表6。由表6可 知，不加任何碳水化合物添加剂的红色素溶液（对 照）的最大OD值为1. 486，而加了碳水化合物添加 剂的红色素溶液在放置4 d后
7、，OD值及溶液颜色变 化不大，没有沉淀产生，说明葡萄糖和蔗糖对红色 素的稳定性没有影响。2. 3. 6氧化剂H2O2对红色素稳定性的影响取红色素溶液，配制H2O2浓度为0. 00%、0. 03%、0. 30%、1. 50%、3. 00%（V/V,下同）的红色素溶液，在室温（25C ）下避光放置0. 5 h后，在210 nm处测定OD值，结果见表7。由表7可知，未添加H2O2的红色素溶液的OD值比含有H2O2的红色素溶液的OD值大 很多，且随着H2O2浓度的增大，最大OD值逐渐减小，颜色明显变浅。说明该红色素耐氧化性较差， 易因氧化而退色，应用时应避免强氧化剂的加入。2. 3. 7还原剂Na2S
8、O3对红色素稳定性的影响取红色素溶液，配制Na2SO3浓度为0、2X104、5X104、1X10 3、3X10 3、5X10 3mol / L的红色素溶液，在室温（25C ）下避光放置0、1、2、3、4 d后，在210 nm处测定OD值，结果见表8。由表8可知，该红色素随还原剂Na2SO3浓度的增大，放置时间的增长，颜色变浅， 在前3 d OD值减小，第4天又稍有增大，说明 该色素的耐还原性较差，第4天由于Na2SO3被空气 氧化，还原性减弱，红色素溶液的 OD 值又有所增大。2. 3. 8 金属离子对红色素稳定性的影响取红色素溶液，配制含不同金属离子Na +、K+、Mg2+、Co2+、AI3 +、Pb2+、Sn2+，浓度均为1X104 mol / L的红色素溶液，在室温（25C ）下避光放置不同的时间0、24 h后，在210 nm处测定OD值，结果见表9。从表9可知，24 h后含Co2+的红色素溶液的OD值减小，Pb2+、Sn2 +与红色素发生络合，产生絮状沉淀。Na +、K+、Mg2+、Al3 +对红色素的稳定性影响不大。二、茶树内生真菌H8菌株的鉴定及其产红色色素培养条件卢东升 陈玉栋 王金平 李文锦（信阳师范学院,信阳, 464000）
