《预封装·质粒小提试剂盒说明书.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《预封装·质粒小提试剂盒说明书.doc（4页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、预封装质粒小提试剂盒（48孔板）预封装质粒小提试剂盒（48孔板）Plasmid DNA Extraction Kit (Magnetic Beads)目录号：PDEP-P-5001运输条件：225；保存条件：主试剂板 28，、号溶液28保存，其他组分室温；试剂盒组成： Kit Component试剂盒组成4块板适用于16*4份样品24块板适用于16*4份样品试剂 PDEP-Buffer 1质粒悬浮液15mL80mL PDEP-Buffer 2质粒裂解液15mL80mL PDEP-Buffer 3质粒复性液25mL150mL Elute Buffer洗脱液5mL10mL RNase A100mg
2、/mL60L320L预封装部分试剂板16T/板*4板16T/板*24板耗材磁棒套2个/包*4包2个/包*24包特别说明：1）使用前请将 RNase A 全部加入 PDEP-Buffer 1中，并置于4保存；2）使用前先检查 PDEP-Buffer 2 是否出现浑浊，如有混浊现象，置于37水浴几分钟，即可恢复 澄清。PDEP-Buffer 2 和 PDEP-Buffer 3 使用后应立即盖紧盖子；3）本操作指南经公司反复验证，使用前请仔细阅读，并且按照操作指南的建议操作。【产品简介】 试剂盒中独特分离作用的磁珠和缓冲液系统，可从2.0 5.0 mL菌液中分离纯化10 20g高质量质粒DNA。磁珠
3、表面修饰有特殊化学基团，在一定缓冲液体系中对质粒DNA具有极强的特异性亲和力，而当缓冲液体系改变时，磁珠可逆地释放质粒DNA，从而达到快速分离纯化质粒DNA的目的。此外，复性液中含有特殊磁珠，可最大限度的特异性结合并去除蛋白质及其它杂质，从而保证提取质粒DNA的纯度。 本试剂盒适用于直接在48孔板中完成摇菌、收菌、重悬、裂解和复性，预分装的试剂板直接在自动化核酸提取仪上完成质粒DNA提取，大大降低了实验人员的工作量以及实验中的人为误差。 使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如酶切、测序、文库筛选、连接和转化等。【注意事项】1 试剂板严禁反复冻融，以免磁珠受到损害；2 所有离心
4、步骤均为室温下进行，其中复性步骤冷冻离心效果更佳；3 提取的质粒DNA量与细菌的培养浓度、宿主菌、质粒拷贝数等因素有关；4 复性液使用前需充分摇匀使磁珠充分重悬；5 质粒复性后的离心步骤应尽可能轻拿轻放48孔板（保证蛋白质和基因组沉淀紧附于48孔板底部），以避免转移上清液时吸取到杂质；6 试剂板使用前务必颠倒混匀使磁珠充分重悬；7 试剂板使用前务必使用甩板机进行离心（500rpm*1min），使试剂及磁珠集中到孔板底部；8 使用前小心撕去铝箔封口膜，避免孔板振动，防止液体溅出。【试剂盒说明】样品类型样品量DNA提取范围单样品提取时间菌液1.0 5.0mL10 20g40min【自备仪器和试剂】
5、1. 英芮诚ETP-300型核酸提取仪；2. 涡旋混合仪；3. 甩板机；4. 离心机。【仪器自动提取操作步骤】（以英芮诚ETP-300型全自动核酸提取仪为例，同步可完成32个样本的提取）1 准备 1）从试剂盒中取出独立包装的试剂板，用甩板机（500rpm离心1min）使试剂及磁珠都集中到孔板底部，使用前小心撕去铝箔封口膜，避免孔板振动，防止液体溅出。2）将RNase A全部加入溶液PDEP-Buffer 1中，将其与PDEP-Buffer 3于4保存待用。2收集菌体 将48孔板培养的菌液做好记录，4000 rpm离心5 min收集菌体，弃培养液，将离心后的48孔板倒扣在清洁的吸水纸上数次，尽量
6、去除残留的培养液。备注：不同品牌和型号的甩板机离心效果或有差异，请在收菌时和复性后离心时确保沉淀紧附于48孔板底。3菌体悬浮 向收集好的菌体沉淀中加入200L 号溶液（质粒小提悬浮液），将48孔板在4000rpm下涡旋混合12min，确保菌体彻底重悬。4菌体裂解：2min 向菌体悬浮液中加入200L 号溶液（质粒小提裂解液），开始2min倒数计时，将48孔板在400500 rpm温和涡旋混合1min，使菌体充分裂解，直到裂解液基本澄清，静置至2min倒计时结束。备注：如果菌体较多，可以适当延长裂解时间至4min，但不宜超过4min，菌体裂解时间过长会使质粒难以复性。5质粒复性：向菌体裂解液中加
7、入350L 号溶液（质粒小提复性液）；将48孔板在700rpm温和涡旋混合1min，充分混匀，比较好的状态是整个孔板内的沉淀为蛋花状。将48孔板在甩板机上4000rpm低温离心15min，若沉淀未贴附于孔板底部，继续离心5min，使之在孔道底部形成白色沉淀。备注：(1)号溶液（质粒小提复性液）务必提前4冷藏，并且每次吸取前尽量摇晃均匀; (2)如果离心后上清中还有白色沉淀，或发现孔道底部沉淀松散，可以再次离心10min。6自动化提取 转移质粒复性后的上清液600L到预分装试剂板的2/8列孔位，吸取上清时切勿吸取到沉淀，以免质粒DNA的污染。 7上机提取 将已加样的试剂板放入ETP-300型核酸提取仪中，并插入磁棒套；打开仪器的操作程序，参照下表设置仪器参数，并运行程序。 “质粒DNA提取”程序各参数设置如下，如机器和说明书不一致，请以说明书为准： 8核酸转移程序运行完毕，取下试剂板，将洗脱液（试剂板的2/8列孔位内的液体）转移至干净的EP管或者PCR板中，做好标记，-20保存备用，此时可以弃去96孔板。（1701修订版）版权声明： 英芮诚生化科技（上海）有限公司保留本使用指南的所有权利。版本：V201701.0314
