分析测试试验技术

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1、分析测试实验技术1.文章简要介绍1.1 用臭氧浮选法收获微藻对脂质和 FAME 采收率的影响1 本文从 Nabor Carrillo Lake 采样，臭氧浮选实验在抽样之后迅速进行，使用 950mL 新鲜的、均匀的、处理过的、有本土养殖的微藻的废水在一个有着1.3L容积， 专为微藻臭氧浮选设计的玻璃圆柱容器中进行。用反应器底部放置的玻璃扩散器（孔径10-15 Am）注入臭氧。实验有三个影响因素，臭氧流速（0.2、0.4、0.6L/min）、 臭氧含量（25、35、45mgO3/L）、浮选时间（5、10、15min），共做54轮实验， 测试的响应因素为全部悬浮固体（TSS）和浑浊度的变化。获得的

2、TSS和浑浊度变 化效率被用一个方差分析方法分析，来确定这些实验变量在臭氧浮选中的重要性 然后使用（15000r、4C、10min）离心和冷冻干燥法（-50C、真空0.180Mpa） 干燥微藻。之后根据相似相容溶解提取脂质（三氯甲烷：甲醇=2:1 体积），经过 4C的过夜萃取后用玻璃纤维滤纸真空过滤。然后使用一步萃取法获得FAME（甲 醇：甲苯：2,2-二甲基丙烷：硫酸=39:20:5:2）甲基混合物3.3mL，再加1.7mL正 庚烷，0.2g的干生物量的微藻，然后剧烈震动、60C孵化12h。使用气象色谱法 测定FAME含量。文章最终所得结果为：1.当臭氧剂量达到每mg干重0.23mg时，达到

3、最大 收获量，为TSS移除量的79.6%； 2.当臭氧剂量为每mg干重0.12mg时，微藻中 脂质的提取量由离心法的6%提升到12%，而FAME的产量也由离心法时的1.23% 提升到 3.23%； 3.臭氧浮选技术不仅能从废水中分离微藻，而且能提高从混合藻 类中生产的FAME的量。1.2马氏小管对维持龟蚁中共生微生物的贡献2文章首先从龟蚁中提取马氏小管并在Karnovsky中固定24h，之后经过洗涤脱 水等后在扫描电子显微镜下进行形态观察（图1、图2）。然后将马氏小管标本嵌在 树脂中在Laica光显微镜下进行组织化学的观察。研究结果表明，目前龟蚁的回肠的结构适应可能与中肠和马氏小管中化合物 的

4、使用有关。根据我们对龟蚁组织化学的研究结果表明从马氏小管中提取出的所 有物种有相同的排泄模式。这种趋势表明这个部落具有斐洛遗传学基础，即在消 化道中具有树栖的生活史、同样的食物资源和共生微生物。1.3 比较 Vitek MS 和 Bruker Microflex LT MALDI-TOF MS 在临床微生物实 验室对常见细菌和酵母常规鉴定中的应用本文选取最常用在临床实验室内的生物作为代表株，冷冻的好氧细菌和酵母 在质谱分析之前分别在5%羊血琼脂或沙氏琼脂葡萄糖琼脂上分别分离两次。所 有分离株都在35C下培养并在第二次亚培养时在18-24h进行分析。厌氧生物在 分析前在布氏菌血琼脂上在35C的分

5、析厌氧舱室中进行48h培养。一共分离出477株细菌：161株革兰氏阳性菌、213株革兰阴性需氧菌、34株厌氧细菌和69 株酵母。分别在Vitek MS和Bruker Microflex LT MALDI-TOF MS上对菌株分析。总体来看，对于477个测试生物，两种平台进行比较没有统计证据证明哪个 更具诊断优势。这两种制度远远高于美国食品药品管理局批准的物种的整体分离 鉴定与分析的90%。技术评定专家青睐于Vitek MS。无论选择哪个平台都应注 意特定数据库的分离并考虑非FAD批准的额外测试。2仪器的使用2.1 气象色谱仪2.1.1 工作原理 气相色谱是一种分离技术。色谱仪利用色谱柱先将混合

6、物分离，然后利用检测器依次检测已分离出来的组分。混合物的分离是基于组分的物理化学性质的差 异，气相色谱主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分 离。待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体（即载气，一般是N2、He等）带入 色谱柱，柱内含有液体或固体固定相，由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性 能不同，每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。但由于 载气是流动的，这种平衡实际上很难建立起来，也正是由于载气的流动，使样品 组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解附，结果在载气中分配浓度大的组 分先流出色谱柱，而在固定相中分配浓度大的组分后流出。将从样品注入载气为 计时

7、起点，到各组分经分离后依次进入检测器，检测器给出对应于各组分的最大 信号（常称峰值）所经历的时间称为各组分的保留时间。实践证明，在条件（包 括载气流速、固定相的材料和性质、色谱柱的长度和温度等）一定时，不同组分 的保留时间也是一定的。因此，反过来可以从保留时间推断出该组分是何种物质。 故保留时间就可以作为色谱仪器实现定性分析的依据。2.1.2 操作步骤气相色谱仪在使用时操作步骤如下：1.打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关（或氮气钢瓶总阀）,调整输出压力稳定在0.4Mpa左右。2.打开色谱仪气体 净化器的氮气开关转到“开”的位置。 3.设置各工作部温度。 TVOC 分析的条件 设置：脂肪酸分析

8、时的色谱条件：（a）柱箱：柱箱初始温度140C、初始时间5min、 升温速率4C/min、终止温度240C、终止时间15min; （b）进样器温度是260C, 检测器温度是280C。4.点火：待检测器温度升到150C以上后，打开净化器上 的氢气、空气开关阀到“开”的位置。观察色谱仪上的氢气和空气压力表分别稳 定在0.1Mpa和0.15Mpa左右。按住点火开关（每次点火时间不能超过68秒钟） 点火。同时用明亮的金属片靠近检测器出口,当火点着时在金属片上会看到有明 显的水汽。如果在68秒时间内氢气没有被点燃,要松开点火开关,再重新点火。 在点火操作的过程中,如果发现检测器出口内白色的聚四氟帽中有水

9、凝结,可旋 下检测器收集极帽,把水清理掉。在色谱工作站上判断氢火焰是否点燃的方法： 观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。 5. 打开电脑及工作站（通 道一分析脂肪酸,通道二分析碘）,打开一个方法文件：脂肪酸分析方法或碘分 析方法。显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间。接着可以转动色谱仪 放大器面板上点火按钮上边的“粗调”旋钮,检查信号是否为通路（转动“粗调” 旋钮时,基线应随着变化）。待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按 一下色谱仪旁边的快捷按钮,进行色谱数据分析。分析结束时,点击“停止”按 钮,数据即自动保存。 6. 关机程序：首先关闭氢气和空气气源,使氢火焰检测 器

10、灭火。在氢火焰熄灭后再将柱箱的初始温度、检测器温度及进样器温度设置为 室温（20-30C）,待温度降至设置温度后，关闭色谱仪电源。最后再关闭氮气。2.2扫描电子显微镜2.2.1工作原理扫描电子显微镜的工作原理是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激 发出次级电子，次级电子的多少与电子束入射角有关，也就是说与样品的表面结 构有关，次级电子由探测体收集，并在那里被闪烁器转变为光信号，再经光电倍 增管和放大器转变为电信号来控制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步 的扫描图像。图像为立体形象，反映了标本的表面结构。为了使标本表面发射出 次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属微粒，重金属

11、在电子束的 轰击下发出次级电子信号。2.2.2 操作步骤扫描电子显微镜操作步骤如下：1.安装样品，按“Vent”直至灯闪，对样品 交换室放氮气，直至灯亮；松开样品交换室锁扣，打开样品交换室，取下原有的 样品台，将已固定好样品的样品台，放到送样杆末端的卡抓内；关闭样品交换室 门，扣好锁扣；按“ EVAC ”按钮，开始抽真空，“ EVAC ”闪烁，待真空达到一 定程度，“EVAC”点亮；将送样杆放下至水平，向前轻推至送样杆完全进入样品 室，无法再推动为止，确认“H old ”灯点亮，将送样杆向后轻轻拉回直至末端 台阶露出导板外将送样杆竖起卡好。2样品的观察，操作键盘上按“Low Mag”、 “Qu

12、ick View”,将放大倍率调至最低，按顺序对样品进行观察；取消Low Mag”， 看图像是否清楚，不清楚则调节聚焦旋钮，直至图像清楚，再旋转放大倍率旋钮， 聚焦图像，直至图像清楚，再放大，直到放大到所需要的图；聚焦到图像的边界 一致，如果边界清晰，说明图像已选好，如果边界模糊，调节操作键盘上的“ X、 Y”两个消像散旋钮，直至图像边界清晰，如果图像太亮或太暗，可以调节对比 度和亮度，旋钮分别为“Contrast”和“Brightness”；按“Fine View”键，进行 慢扫描，同时按Freeze”键,锁定扫描图像;扫描完图像后，打开软件上的Save” 窗口，按“Save”键，填好图像名

13、称，选择图像保存格式，然后确定，保存图像； 按“Freeze”解除锁定后，继续进行样品下一个部位或者下一个样品的观察。3. 取出样品，将送样杆放至水平，轻推送样杆到样品室，停顿1秒后，抽出送样杆 并将送样杆竖起卡好，注意观察H old关闭，为样品台离开样品室。参考文献1 S.B. Velasquez-Orta, R. Garcia-Estrada. Microalgae harvesting using ozoflotation: Effect on lipid and FAME recoveries. Biomass and bioenergy, 2014, 80:356-363.2 M.L

14、. Bution, F.H. Caetano. Contribution of the Malpighian tubules for the maintenance of symbiotic microorganisms in cephalotes ants. Micron, 2008, 39: 1179-1183.3 Eszter Deak, Carmen L. Comparison of the Vitek MS and Bruker Microflex LT MALDI-TOF MS platforms for routine identification of commonly isolated bacteria and yeast in the clinical microbiology laboratory. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, 2015,81: 27-33.