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1、第六章 电泳技术和常用电泳仪习题参考答案一、名词解释1电泳：指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的现象。 2毛细管电泳的电场强度：在给定长度的毛细管两端施加一个电压后所形成的电效应强度。3蛋白质的等电点：当溶液的酸碱度处于某一特定pH值时，它将带有相同数量的正、负电荷（即净电荷为零），致使蛋白质分子在电场中不会移动，称此特定的pH值为该蛋白质的等电点。4电泳速度：在单位时间内，带电粒子在毛细管中定向移动的距离。5迁移率：带电粒子在单位电场强度下的移动速度，常用来表示。6毛细管电泳技术：是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力，根据样品中各组分之间迁移速度（淌度
2、）和分配行为上的差异而实现分离的一类液相分离技术。7电泳淌度：带电粒子在毛细管中定向移动的速度与所在电场强度之比。8迁移时间：毛细管中，带电粒子在电场作用下作定向移动的时间。9毛细管电泳电渗流：在高电压下，溶液中的正电荷与毛细管壁表面的负电荷之间作用，引起流体朝负极方向运动的现象。10焦耳热：在高电场下，毛细管中的电解质会产生自热现象，称该热量为焦耳热。11电渗：电场中液体对于固体支持物的相对移动。12. 吸附作用：介质对样品的滞留作用。二、选择题【A型题】1C 2D 3B 4E 5 A 6B 7C 8E 9D 10A 11E 12E 13D 14C 15E 16A 17D 18C 19E 2
3、0B 21C 22D 23E 24B 25D 26E 27D 28B 29C 30A 31B 32D 33C 34D 35B 36C 37D 38 D【X型题】1ABCE 2ABCD 3ABCDE 4ABCE 5ABCD 6ABCE 7ABE 8ACE 9ABC 10ACDE 11ABCD 12ABCDE 13ABCE 14ABCD 15BCDE 16ABCDE 17BCDE 18ABCE 19ABDE 20ABCDE21ABCD 22ABCD 23ABCE 24ABCD 25BCDE 26ABDE三、简答题1简述电泳、电泳技术的概念。答：电泳是指带电荷的溶质或粒子在电场中向着与其本身所带电荷
4、相反的电极移动的现象。利用电泳现象将多组分物质分离、分析的技术叫做电泳技术。2简述电泳的基本原理。答：物质分子在正常情况下一般不带电，但是在一定的物理作用或化学反应条件下，某些物质分子会成为带电的离子（或粒子），不同的物质，由于其带电性质、颗粒形状和大小不同，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，因此可使它们分离。3影响电泳的外界因素有哪些？答: 外界因素有电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度、电渗作用、粒子的迁移率、吸附作用等。4临床常用的电泳分析方法有哪些？答：纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、等速电泳、双向凝胶电泳（二维电泳）、免疫电泳。5溶液的Ph值对电
5、泳速度有何影响？答：溶液的pH值决定了带电质点的解离程度，也决定了物质所带电荷的多少。对蛋白质、氨基酸等两性电解质而言，pH值离等电点越远，颗粒所带的电荷越多，电泳速度也越快。反之，则越慢。6何谓蛋白质的等电点（pI）？答：当溶液的酸碱度处于某一特定pH值时，它将带有相同数量的正、负电荷（既净电荷为零），致使蛋白质分子在电场中不会移动，称此特定的pH值为该蛋白质的等电点。7什么是粒子的迁移率？迁移率与哪些因素有关？答：迁移率为带电粒子在单位电场强度下的移动速度，常用来表示。主要与颗粒直径、形状以及所带的净电荷量等有关。8电泳技术根据分离原理如何分类？答：根据分离原理可分为移界电泳、区带电泳、等
6、速电泳、等电聚焦、免疫电泳等。9通常所说的电泳设备可分为哪些？答：可分为主要设备（分离系统）和辅助设备（检测系统）。主要设备指电泳仪电源、电泳槽。辅助设备指恒温循环冷却装置、伏时积分器、凝胶烘干器等，有的还有分析检测装置。10电泳设备对支持物一般有何要求？答：要求不溶于溶液，不导电，吸液量多而稳定，不带电荷，没有电渗，不吸附蛋白质等其它电泳物质，热传导度大，结构均一而稳定，分离后的成份易析出等。11醋酸纤维素薄膜电泳的特点是什么？答：分离速度快、电泳时间短、样品用量少。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。12简述聚丙烯酰胺凝胶电泳特点及应用范围。答：特点：具有机械强度好、弹性大、透明、
7、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小（1g100g）、分辨率高等。应用范围：可用于蛋白质、核酸等分子大小不同的物质的分离、定性和定量分析。还可结合去垢剂十二烷基硫酸钠（SDS），以测定蛋白质亚基的相对分子质量。13简述等电聚焦电泳法的原理、特点。答：原理：不同的蛋白质等电点不同，如果分子处于pH和等电点一致的溶液中，则泳动就停止进行。如果溶液内的pH是位置的函数，或者说有一个pH的位置梯度，那么在一个稳定连续的线性pH梯度的溶液（两性载体电解质）中进行分离，每一种被分离的两性物质都移向与它的等电点相一致的pH位置，在那里不再移动（称为聚焦）。由于在这点净电荷（正负抵消）为零，因而又称等
8、电聚焦。特点：使用两性载体电解质，在电极之间形成稳定的、连续的、线性的pH梯度；由于“聚焦效应”，即使很小的样品也能获得清晰的、鲜明的区带界面；电泳速度快；分辨率高；加入样品的位置可任意选择；可用于测定蛋白质类物质的等电点；适用于中、大分子量（如蛋白质、肽类、同工酶等）生物组分的分离分析。14等速电泳的特点是什么？答：特点：一是所有谱带以同一速度移动，二是区带锐化，在平衡状态下，如果有离子改变速度扩散进入相邻区带，界面清晰，能显示很高的分离能力。三是区带浓缩，即组分区带的浓度由前导缓冲液决定，一旦前导缓冲液浓度确定，各区带内离子的浓度亦即为定值。15简述双向凝胶电泳（二维电泳）的工作原理。答：
9、第一维采用等电聚集（isoelectric focusing, IEF）电泳。当把蛋白质加人到含有pH梯度的载体时，如果蛋白质所在位置的pH值与其等电点不同，则该蛋白质会带一定量的正电荷或负电荷，在外加强电场的作用下，蛋白分子就会分别向正极或负极泳动，直到pH值与其等电点相等的位置，蛋白质不再泳动，而浓缩成狭窄的区带，将蛋白质进行分离。第二维采用了十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。蛋白质的电泳迁移率取决于各种蛋白质所带的静电荷、分子量的大小以及形状的不同。SDS-PAGE就是按蛋白质分子量的大小使其在垂直方向进行分离。蛋白质样品经过双向凝胶电泳两次分离后，呈现为斑点状。1
10、6免疫电泳的优点是什么？该方法的研究目的是什么？答：优点：一是加快了沉淀反应的速度，二是将某些蛋白组分跟据其带电荷的不同而将其分开，再与抗体起反应，从而使本法更为微量化，多样化，使其应用范围日益扩大。研究目的：抗原和抗体的相对应性；测定样品的各成分以及它们的电泳迁移率；根据蛋白质的电泳迁移率，免疫特性及其它特性，可以确定该复合物中含有某种蛋白质；鉴定抗原或抗体的纯度。17简述毛细管电泳基本工作原理和毛细管电泳的特点。答：基本工作原理：溶液中的带电粒子以高压电场为驱动力，沿毛细管通道，以不同速度向与其所带电荷相反的电极方向迁移，并依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离。特点：高灵敏
11、度，高速度，高分辨率，样品少，成本低，易自动化，应用范围广。18毛细管电泳分离模式有哪些？答：毛细管电泳有多种分离模式，如毛细管区带电泳，毛细管胶束电动色谱，毛细管凝胶电泳、等电聚焦毛细管电泳、毛细管等速电泳和毛细管电色谱等。19简述毛细管区带电泳的应用范围。答：毛细管区带电泳(CZE)适用于小离子、小分子、肽类、蛋白质的分离，在一定限度内适合于DNA的分离。应用CZE还可分离人血清中氨甲喋呤（MTX）及其代谢产物7羟基氨甲喋呤（7OHMTX）。20简述毛细管电泳仪的基本结构。答：毛细管电泳仪的结构主要有高压源、毛细管柱、检测器，以及两个供毛细管两端插入而又可和电源相连的缓冲液槽。输出讯号和记
12、录装置相连，记录装置可以是一个普通的记录仪、积分仪，也可以是有控制功能的计算机工作站。21高效毛细管电泳的应用范围有哪些？答：从小分子、无机离子到生物大分子，甚至整个细胞，从带电粒子到中性分子都可用高效毛细管电泳方法进行分析。在临床医学中，根据被测对象的不同，可分为药物分析、蛋白质、多肽及氨基酸分析、DNA、RNA分析、体内代谢产物分析、离子分析、激素分析、酶及同工酶分析、维生素分析、糖类等。22理想的毛细管柱条件是什么？答：理想的毛细管柱应是化学和电惰性的，紫外和可见光可以透过，易于弯曲，有一定的柔性，耐用而且便宜。23对各种检测器检测方法进行比较。答：各种检测器检测方法的比较见下表： 检测
13、方法 质量检测极限 浓度检测极限 备 注 （Mol） （mol/L） 紫外 10-1310-16 10-510-8 用得最多，通用性强，扫瞄迅速 荧光 10-1510-17 灵敏，但样品通常需衍生激光诱导荧光 10-1510-20 10-1410-16 极其灵敏，但样品通常需衍生，费用高安培 10-1810-19 10-1010-11 用得多，灵敏，检测简单，提供信息少电导 10-1510-18 10-710-8 通用，需要专门元件和毛细管改性柱质谱 10-1610-17 10-810-9 灵敏，鉴别能力强，提供结构信息拉曼光谱 210-15 通用，灵敏度较相应的直接紫外低 24临床进行尿蛋白电泳的主要目的是什么？答：确定尿蛋白的来源；了解肾脏病
