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1、基因工程练习一、选择题（本大题共5小题，共0分）1基因工程中常见的载体是( ) A.质体 B.染色体 C.质粒 D.线粒体2基因工程中称为“基因剪刀”的是（ ）A. DNA连接酶B. DNA聚合酶C.蛋白质水解酶 D.限制性核酸内切酶3下列关于基因工程技术的叙述中，错误的是（ ） A.实现了物种间的DNA重组B.全过程都在细胞外进行C.可定向地改造生物的遗传性状 D.可能通过对天然基因库的影响对生物圈的稳态带来不利4下列有关基因工程技术的叙述，正确的是（ ）A.重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶和运载体B.所有的限制酶都只能识别同一种特定的核苷酸序列C.选用细菌为重组质粒的受体细胞是因
2、为质粒易进入细菌细胞且增殖快 D.只要目的基因进入了受体细胞就能成功实现表达 【答案】C5（2010 浙江 理 2）在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( ) A用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C将重组DNA分子导入烟草原生质体 D用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞【答案】A【解题关键点】本题考查基因工程的有关知识,基因工程的一般过程:用限制性核酸内切酶切割含目的基因的DNA分子(除草剂基因)和运载体(质粒), 用DNA连接酶连接切割好的目的基因和运载体重组DNA分子导入受体细胞,因为是植物可以说是原生质体
3、用相应的试剂和病原体筛选转基因细胞用植物组织培养技术培养抗除草剂的转基因烟草(表达).所以答案是A二、非选择题（本大题共2小题，共0分）6（2010 江苏 理 27）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，圈l、圈2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： （1）一个图1所示的质粒分子经Sma 切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。 （2）若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。 （3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna 切割，原因是 。 （4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH 和Hind 两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的
4、优点在于可以防止 。 （5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。 （6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。 （7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。【答案】（1）0、2（2）高（3）Sma会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因（4）质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化（5）DNA连接（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞（7）蔗糖为唯一含碳营养物质【解题关键点】本题考查基因工程的限制性内切酶的作用特点（1）质粒切割前是双链环状DNA分子，所有
5、磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团。从图1可以看出，质粒上只含有一个Sma的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团。（2）由题目可知，Sma识别的DNA序列只有G和C，而G和C之间可以形成三个氢键，A和T之间可以形成二个氢键，所以Sma酶切位点越多，热稳定性就越高（3）质粒抗生素抗性基因为标记基因，由图2可知，标记基因和外源DNA目的基因中均含有Sma酶切位点，都可以被Sma破坏，故不能使用该酶剪切含有目的基因的DNA（4）只使用EcoR I，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用连接酶连接时，会产生
6、质粒和目的基因自身连接物，而利用BamH 和Hind 剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，用DNA连接酶连接时，不会产生自身连接产物。（5）质粒和目的基因连接后获得重组质粒，该过程需要连接酶作用，故混合后加入DNA连接酶。（6）质粒上的抗性基因为标记基因，用于鉴别和筛选含有重组质粒的受体细胞。（7）将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体后，含有重组质粒的个体才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作为唯一碳源的培养基进行培养受体细胞，含有重组质粒的细胞才能存活，不含有重组质粒的因不能获得碳源而死亡，从而达到筛选目的。7日本下村修、美国沙尔菲和美籍华人钱永健因在研究绿色荧光蛋白（GFP）等方面
7、的突出贡献，获得2008年度诺贝尔化学奖。GFP会发出绿色荧光，该蛋白质在生物工程中有着广阔的应用前景。请据图回答相关问题：（1）绿色荧光蛋白基因在该实验中是做为 基因。（2）在过程进行转基因体细胞的筛选时，比较简易的筛选方法是 。（3）在过程培养重组细胞时，培养液中通常含有葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和_等。（4）以上培育过程中应用到的生物技术有_ _等。（5）科学工作者在实验过程中为了保证实验成功，往往一次做多个核移植，为了从乙兔体内一次获得多个卵细胞，往往需要向乙兔体内注入的是 激素。 （6）在以上核移植过程中，乙兔提供的细胞应是_，移核之前要对此去核的原因是 。【答案】(1)目的 (2)通过设备检测，发出明亮的绿色荧光细胞即为转基因体细胞(3)动物血清(4)转基因技术、核移植技术、动物细胞培养技术、胚胎移植技术(5)促性腺(6)次级卵母细胞 使获得的荧光兔的遗传物质基本上全部来自转基因的甲兔细胞【解题关键点】如图表示把目的基因（绿色荧光蛋白基因）导入兔的成纤维细胞，可以通过能否发出荧光筛选出转基因细胞，取出细胞核和去核的卵细胞（次级卵母细胞）重组（核移植），体外培养形成胚胎后，进行胚胎移植；要使兔超数排卵，需要注射促性腺激素；4
