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1、实习报告实习要求：1掌握寄生虫完全剖检法，通过剖检采集家畜的全部寄生虫标本，并进行鉴定和计数，确定寄生虫的种类、感染率及感染强度，为诊断和了解蠕虫病的流行情况，防治和研究寄生虫病提供科学依据。2掌握寄生虫的粪便学检查方法，虫卵计数。3掌握寄生虫标本的保存方法及制作装片的方法。4熟悉球虫药效力的测定方法、步骤等试验及评价程序指标。实习安排：七天的实习安排如下： 时间 地点 内容2012年5月13日逸夫楼4017兽医院上午徐老师安排实习内容（4017）；下午羊的剖检，采集羊体寄生虫，观察鸡群（兽医院）；晚上羊直肠粪便虫卵检查和计数（计算OPG）（4017）2012年5月14日白天养鸡观察鸡群（兽医
2、院）；晚上对剖检采集的虫体鉴定（4017）2012年5月15日白天养鸡观察鸡群（兽医院）；晚上鸡粪虫卵计数（4017）2012年5月 16日白天养鸡观察鸡群（兽医院），下午鸡分组、称重，接种球虫（兽医院）。晚上收集鸡粪虫卵计数（4017）2012年5月 17 日养鸡观察鸡群（兽医院）。2012年5月 18 日上午收集鸡粪，鸡粪虫卵计数；杀鸡逐只称重，剖检鸡取盲肠，计盲肠球虫卵囊，计算抗球虫指数。下午实习总结。2012年5月 19 日逸夫楼4017写实习报告。实验一 羊体的蠕虫学剖检和虫体采集一实验材料1实验动物：山羊1只2实验器材：塑料水桶1个；塑料脸盆3个；手套一副；玻璃棒2个；不锈钢剪刀1
3、把；手术剪刀3把；大镊子3把；小镊子4把；解剖刀柄 1把；挑虫针5根；500 ml广口瓶2个；100ml烧杯8个；麦氏计数器 2片；6cm培养皿6套；计数器1个。3药品：生理盐水、70%酒精、盐水等。二实验程序路线剖检前绝食2天将羊只牵至指定位置检查体表的寄生虫并采集颈动脉放血处死收集部分血液用于检查血液内寄生虫情况剥皮检查皮内寄生虫有无剖开腹腔检查检查腹腔脏器表面的寄生虫及病变消化系统检查及寄生虫采集剖开胸腔检查检查脏器表面的寄生虫及病变脏器内部寄生虫检查及虫体采集泌尿系统检查及寄生虫采集生殖器官的检查及寄生虫采集其他部位的检查及寄生虫采集三实验内容（一）体外寄生虫的采集羊的体表1毛虱、颚虱
4、、虱蝇、蠕形蚤等将采集到的虫体放于瓶内，饥饿1-2天，加入保存液保存，虱卵应连毛取下放于瓶内或保存液内保存。2疥螨用小刀刮皮肤患部的干硬痂皮，再刮取病部与健康皮肤交界处的皮屑，至微出血为止，将此皮屑放在空瓶内或保存液(甘油酒精液)内保存。3蠕形螨在毛囊内，皮下形成米粒大小的结节，可将结节切开取其内容物涂片镜检，或者连皮肤切下，放在10%福尔马林或70%酒精内固定保存。（二）体内寄生虫的采集体表观察后,放血剥皮,注意观察皮下是否有寄生虫,然后剖开腹腔、胸腔,取出脏器,采脏器时可将肺、气管和心脏一起取出,而后将小肠和胃相连的地方切断用绳扎好,将胃和食道一起取出,再将小肠大肠一起取出,最后将肝脏、膀
5、胱、肾脏取出,并逐一进行检查。1、首先检查食道的正反面,是否有美丽筒线虫及住肉孢子虫, 如果发现寄生虫可连同被寄生的组织一起剪下,保存于巴氏液中。2、肺脏：首先剪开支气管及大支气管,检查是否有大型肺线虫(网尾线虫)，然后检查小支气管或细致地撕开肺的边缘部分看是否有小型肺线虫(原圆线虫、缪勒线虫等)。将采集检查吸附在粘膜到的虫体放于保存液中,肺脏表面还应注意观察是否有细粒棘球蚴的寄生。如有则应连同肺组织一起剪下放于保存液中。3、肝脏：先检查是否有细粒棘球蚴,然后检查胆囊,检查内部,并切开胆管,检查有否肝片吸虫或矛形双腔吸虫的寄生,然后将肝撕成小块用清水反复冲洗至上部液体清亮为止,倒去上清液,将沉
6、渣倒入盘内检查有无虫体。4、胰脏和检查肝脏的方法相同,检查有否胰阔盘吸虫。5、肠系膜：检查肠系膜血管是否有血吸虫,并将肠系膜淋巴结切开检查有无舌形虫的幼虫,注意肠系膜上是否有细颈囊尾蚴的寄生,如有,可取下放于70%酒精或巴氏液中。6、胃：将胃分离,首先切开第一胃(瘤胃)倒出内容物,检查吸附在胃粘膜上的前后盘吸虫。然后将第四胃(皱胃)的内容物倒入瓷盆内,将其翻过来用生理盐水充分洗净,再用生理盐水反复冲洗,最后将沉渣倒入大培养皿内检查是否有捻转血矛线虫、奥斯特线虫、马歇尔线虫以及古柏线虫等,如发现虫体,可用解剖针挑出放于保存液中。7、小肠：沿肠系膜对侧长轴剪开肠壁,先从十二指肠开始,边剪开边检查,
7、并把肠内容物接到搪瓷盘内, 如有寄生虫,用镊子夹到1%盐水内。在羊小肠内可以发现：羊斯克里亚宾吸虫、莫尼斯绦虫、无卵黄腺绦虫、曲子宫绦虫、仰口线虫、类圆线虫、毛细线虫、古柏线虫、细颈线虫、奥斯特线虫、毛圆线虫等。当发现有绦虫时,应轻轻的用剪刀尖紧贴肠壁,避免剪断虫体。其次应留心前端细小的头节不可拉断或失去,要小心的刮下完整头节,如果有头节牢固吸着宿主肠壁则须连同肠壁组织一起取下,一般不超过5分钟。(时间过久水分渗入虫体内,就破坏了内部组织器官,影响鉴定)。洗净的虫体放于70%酒精或巴氏液固定保存。8、大肠：将大肠的内容物倒入桶中,翻转大肠,用水冲净,再将内容物反复冲洗,然后将沉渣倒入玻璃盘内检
8、查,在大肠中主要有毛首线虫、夏伯特线虫、食道口线虫等寄生,另外还应注意检查肠壁上有无粟粒大至豌豆大的结节(食道口线虫引起的结节)。将采集到的虫体组织浸于70%酒精或巴氏液中保存。9、直肠：收集直肠中的粪便入一次性手套中，实验室放4冰箱保存备用。以检查粪便中的虫卵种类和每克粪便中虫卵数量。并将之计入表格中。（三）寄生虫标本的保存 用蠕虫学剖检法采集的虫体上,附有杂物时,可将虫体装入盛有生理盐水的广口瓶内,加以摇荡将虫体洗净然后后放入固定液中。线虫通常是用巴尔巴卡罗氏液(简称巴氏液)固定保存,配方如下：福尔马林液30毫升,食盐7.5克,水1000毫升,吸虫、绦虫和棘头虫则常用70%酒精固定保存。鉴
9、定：小型线虫一般比较弯曲,可把虫体逐条放入40-50热生理盐水内,使虫体伸直,便于鉴定,然后把虫体移入固定液内。在固定保存吸虫和绦虫之前,应先将虫体浸入常水中(或冰箱中12小时)，使之死亡。这样可使虫体的组织松弛。需要制片时,可将虫体平放于载玻片上,加盖一张载玻片,并稍加压力把虫体压平至适当薄度后(依虫体的大小薄厚而定),放在培养皿内,加入10%福尔马林液固定之。一般固定数小时,较大型的虫体要在一天以上。固定后,翻开盖在上面的玻璃片把虫体标本慢慢取下,置于盛有5%福尔马林的玻璃瓶中固定保存。绦虫的幼虫可固定保存于巴氏液中。在固定棘头虫时,如果他们的吻突缩在吻囊里,则须用手轻压,使吻伸出以后,再
10、用70%酒精固定,也可用巴氏液固定保存。（四）鉴定小型线虫一般比较弯曲，可把虫体逐条放入40-50热生理盐水内，使虫体伸直，便于鉴定，然后把虫体移入固定液内。在固定保存吸虫和绦虫之前，应先将虫体浸入常水中(或冰箱中12小时)，使之死亡。这样可使虫体的组织松弛。需要制片时，可将虫体平放于载玻片上，加盖一张载玻片，并稍加压力把虫体压平至适当薄度后(依虫体的大小薄厚而定)，放在培养皿内,加入10%福尔马林液固定之。一般固定数小时，较大型的虫体要在一天以上。固定后,翻开盖在上面的玻璃片把虫体标本慢慢取下，置于盛有5%福尔马林的玻璃瓶中固定保存。绦虫的幼虫可固定保存于巴氏液中。在固定棘头虫时，如果他们的
11、吻突缩在吻囊里，则须用手轻压，使吻伸出以后，再用70%酒精固定，也可用巴氏液固定保存。（五）蠕虫学剖检记录和标签的书写进行蠕虫剖检时,为了避免产生混乱和错误,应及时用铅笔在白色硬纸制成的标签上注明动物的种、剖解编号和器官名称,并将写好的标签投入盛有该器官的器皿中。搜集到的虫体,在已固定装瓶,但还没有经过鉴定的时候,应当向瓶内放入标签,标签正面说明动物的种、性别、年龄、解剖编号、虫体寄生部位和初步鉴定结果。反面注明解剖地点、日期、解剖者姓名、虫体数目。三、实验结果见寄生虫剖检记录表山羊直肠粪便EPG计数寄生虫名称寄生部位鉴定特征山羊毛虱山羊体表体扁平，无翅，头、胸、腹分界明显。头部钝圆，大于胸部
12、，咀嚼式口器。细颈囊尾蚴肠系膜、肝脏表面乳白色，囊泡状，囊内充满透明液体，俗称水铃铛，鸡蛋大小或更大，直径约8cm，囊壁薄，在其中一端的延伸处有一白结，即其头节所在前后盘吸虫瘤胃圆锥形或纺锤形，淡红色，背面稍拱起，腹面略凹陷，有口吸盘和腹吸盘各一。虫卵椭圆形，淡灰色。捻转血矛线虫皱胃呈毛发状，颈乳突显著，雄虫交合伞发达，有一个“Y”形背肋，雌虫有显著的阴门盖，卵壳光滑，稍带黄色。肝片形吸虫肝脏胆管扁平，呈叶片状，活虫棕红色，固定后灰白色。头椎:前端呈圆锥状突出；肩部:头椎后方变宽；肩部以后逐渐变窄；体表生有许多小刺。食道口线虫盲肠乳白色，虫体口囊小呈圆筒形，口缘有叶冠，颈沟，前部表皮膨大成头囊
13、，颈乳突及侧翼膜，交合伞与排卵器发达，有一对等长交合刺。四、实验讨论本组山羊体型消瘦，被毛粗乱，概因其体内寄生的虫体较多，给羊剃毛后其体表几乎被毛虱所覆盖，在大腿内侧对称的部位见有痂块，但未检出疥螨。剖检后在肝脏胆管内发现4条肝片形吸虫，在肠系膜和肝脏背面发现两个水铃铛，在瘤胃内发现大量的前后盘吸虫，在真胃里有少量捻转血矛线虫，盲肠内有三条食道口线虫，在食道表面、心脏、肺脏、胰脏内未见虫体。但肺脏边缘较硬，手摸上去有较硬的颗粒状的突起，经询问老师，证实不是寄生虫，可能是之前羊得过呼吸系统疾病。实验二 线虫制成装片标本一、实验材料1寄生虫：捻转血矛线虫2实验器材：显微镜1台；15cm培养皿2套；
14、9cm培养皿2套；挑虫针3根；玻璃棒2根；6cm培养皿6套；100量筒1个。3. 试剂：无水乙醇、二甲苯、中性树胶二、实验内容福尔马林固定的捻转血矛线虫 挑取部分眼观较好的虫体清水漂洗数次 挑取展开放于70%酒精溶液中脱水（至少0.5h） 80%酒精溶液脱水（至少0.5h） 90%酒精溶液脱水（至少0.5h） 95%酒精溶液脱水（至少0.5h） 100%酒精溶液中脱水（至少0.5h） 二甲苯中透明（根据虫体大小调整透明时间至眼观虫体变得透明） 挑至滴加12显微镜下观察虫体典型结构（交合伞及倒“Y”形背肋虫体后部的阴门盖） 调整虫体的相对位置至观察到最佳的典型结构为止 加盖玻片 玻片晾干 拍照记
15、录 填写玻片标签 上交待考核（本次制作玻片标本请见附图）。三、实验结果见附图四、注意事项1. 虫体于固定的福尔马林取出后应在清水中充分漂洗，之后用挑虫针挑取具代表性的几个于镜下进行初步鉴定，为制作玻片提供初步准备。2. 脱水步骤要做得详细而彻底。最好从50%酒精开始60%酒精70%酒精80%酒精90%酒精95%酒精100%酒精，每次脱水至少为0.5h，可以根据实际情况延长脱水时间。脱水部分耗时较长，但至关重要，否则得到的玻片虫体会变黑，影响制作效果。3. 虫体脱水完毕后，转入二甲苯中透明的时间根据虫体的大小调整，虫体大的延长透明时间。虫体变得通体透明后取出，展开放于载玻片上的中性树胶内，镜下观察配合虫体位置调整，将典型结构的视野调至最佳方可盖片。该片时轻度按压虫体，使得交合伞等结构更加充分的展开，便于观察，提高制片之效果。4. 等待树胶干燥完毕后，对虫体进行详细的鉴定，并贴些标签，上交待考核。五、实验讨论1、由附图6可以看到，捻转血矛线虫的整个镜像都是黑的，脱水没脱好的缘故。只有交合刺是透明的，但交合刺与倒“Y”行的背肋这些
