蜂胶的抗氧化及抑菌作用

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1、蜂胶抗氧化和抑菌作用的研究进展蜂胶 (Propolis) 是蜜蜂从植物花苞及树干上采集的树胶， 并混入颚腺分泌物和蜂蜡等物质 加工 而成的一种具有芳香气味的胶状固体物质， 是防护病原微生物、 修补巢房和内环境消毒 1-3 杀菌的高效清洁剂 。蜂胶素有 “自然界中的紫色黄金” 之称， 是一种对健康有很大作用的天然营养品。 大量 研究 表明： 蜂胶中起药理作用的主要有效成分是黄酮类化合物， 其具有增强免疫功能、 抗菌 消炎、排除 毒素、增强免疫、软化血管、净化血液、改善微循环、抗氧化、抗病毒、抗癌作 用，此外，还能调节 大鼠的血糖水平，调节体内蛋白质代谢，对肾脏有保护作用，促进组织 再生等广泛的生

2、物学作用。我 国已有将蜂胶作为主要原料的准字号药品， 2005 版中国药 典第一部已经收录蜂胶。随着蜂胶的多种神奇医疗作用逐渐揭示， 国际蜂胶消费量迅速增长， 国内外学者对蜂胶 的功能 研究日益深入， 尤其在蜂胶的抗菌活性方面进行了广泛的研究。 经研究蜂胶提取物对 革兰阳性菌的 抑制效果较好。 而有关蜂胶抗氧化作用报道也较多， 均表明蜂胶及所含黄酮类 化合物对动物体内的 多种自由基有显著的抑制或直接清除作用。 文章综合近几年蜂胶研究进 展对蜂胶的抗氧化和抑菌作用 综述如下。1. 蜂胶的主要化学成分及其提取方法1.1 蜂胶的主要化学成分目前，已从蜂胶中分离鉴定出的化学成分有黄酮类、 萜烯类、 醌

3、类、酯类、醇类、酚类、 醚类、有机酸和大量的氨基酸、酶类、维生素B1、维生B2、维生素B6、维生素E和维生素A以及各种矿物质等。蜂胶总酚含量很高，要高出蔬菜、水果、植物药材的几万倍至几百万倍。 蜂胶中的酚类化合物主要包括黄酮类化合物和酚酸类化合物以及它们的缩合体。含有大量的黄酮类、 萜烯类化合物是蜂胶的重要特征。 现已从蜂胶中分离鉴定的黄酮类化合物 135 种，其中黄酮及黄酮醇类化合物 46 种，二氢黄酮及二氢黄酮醇类 36种, 11 种异黄酮类 化合物。查耳 酮和二氢查耳酮类 17种，以及最近几年从蜂胶中鉴定出的新黄酮类似物 25 种。包括白杨素、柚柏 素、芹菜素、金合欢素、槲皮素、高良姜素

4、、芦丁、山萘酚、山萘甲素，鼠李素，松属素等，其 5，7 -二羟基 3，4-二甲黄酮和 5-羟基 4，7 -二甲氧基双氢黄 酮等蜂胶 的特有成分， 蜂胶大部分的生理及药理功能都与此类化合物有密切关系。 蜂胶中挥发性成分萜 烯类化合物等形成了蜂胶特殊香气， 分析鉴定出 94种化合物， 包括长叶烯、 a -古芸烯、去氢白菖 烯、a -雪松烯、香橙烯、a -芹子烯、杜松萜烯、大根香叶烯、a -广藿香烯、桉叶油醇、杜松烯醇等。1.2 蜂胶化学成分提取方法蜂胶的化学成分提取主要采用2. 蜂胶的抗氧化作用在机体中氧自由基 02-通过脂质过氧化损伤、 破坏细胞膜等，最终使组织器官发生病理 改变， 氧自由基又是

5、具有更大毒性的羟自由基和过氧化氢的前体，所以对机体危害较大。 能制衡或清除自由基的物质称抗氧化剂， 它们能干扰自由基链反应的启动和放大， 阻断其反应 过程18抑制其产生。抗氧化剂有两类，一类是酶类抗氧化剂，另一类是非酶类抗氧化剂，蜂 胶属后一类一般认为，抗氧化剂的作用机理主要包括三个方面：(1)对自由基的直接清除作用； (2)阻断自由基的反应链； (3)提高体内抗氧化酶活力和抗氧化物质含量，如谷胱甘 肽等 19 有研究表明，蜂胶黄酮类对自由基有直接的清除作用19。2.1 蜂胶黄酮的抗氧化作用主要原因是由于蜂胶中Krol等(1990)研究发现蜂胶乙醇提取液具有明显的抗氧化功能, 黄酮类化合物与超

6、氧阴离子反应， 阻止自由基反应的引发， 或与铁离子螯合阻止羟基自由基 的生 成，或与脂质过氧化基反应阻止脂质过氧化过程。 Scheller 等 (1990)利用电子顺磁共振 的方法研究蜂 胶乙醇提取液对自由基的作用， 结果表明蜂胶中黄酮类化合物对 2，2 -苯基 -1- 苦肼基游离基有强烈 的抑制作用，可有效地清除自由基。 Rapta 等研究发现，蜂胶醇提取液 中黄酮类和咖啡酸酯类具有较 强的清除自由基和抗氧化能力， 并且采用测定氧化还原电势的 方法分析出抗氧化、清除阴离子自由基 能力最强的是高良姜素和白杨素。 Moon 等(2001) 指 出高良姜属于黄酮类化合物中的黄酮醇类， 在 蜂胶中的

7、含量很高， 具有抗氧化、 清除自由基 活性和抑制化学药物的生殖毒性作用，是一种值得考 虑的作为化疗导致生殖毒性的对抗物 质。化学发光法研究表明， 两种古巴蜂胶醇提取物对黄嘌呤 - 黄 嘌呤氧化酶产生的超氧阴离子均有捕获能力。它们的浓度为5旧/ml和9.5(4)/ml时对超氧阴离子自由基的抑制率为50%,与72(4)/ml SOD或0.15(4)/ml儿茶素等效。对烷氧自由基的半数捕获浓度为0. 6/ml,与0.11/ml维生素E等效。蜂胶醇提取物对鲁米诺-H2O2产生的化学发光也有抑制作用，这可能与其所含的黄酮类化合物有关。陈明之等人发现蜂胶提取液清除 OH 自由基的能力与总黄酮含量呈正相关，

8、但其清除02- 自由基的能力与总黄酮含量并无相关性，其原因有待于进一步深入研究。同时蜂胶提 取液具有良 好的抗油脂氧化能力。徐颖等人通过采用乙醇回流提取法提取蜂胶黄酮,并用乙酸乙酯对乙醇提取物进行精 制，通过邻苯 三酚自氧化法，邻二氮菲一一Fe2+法和DPPH法评价其清除自由基能力，并比较了蜂胶黄酮与VC、银杏黄酮等自由基清除剂的作用效果，研究表明：蜂胶黄酮有较强的自由基 清除能力。2.2 蜂胶挥发油的抗氧化作用赵强等人通过采用超临界 CO2 萃取和冷冻分离得到蜂胶挥发油,用化学发光法测定蜂 胶挥发油对 羟自由基和超氧阴离子自由基具有清除能力。桑慧等人利用在体模型及体外实验研究了蜂胶对总SOD

9、活力及MDA含量的影响，。结果：在 蜂胶水提液抑制Ang I I诱导的平滑肌细胞增殖过程中总SOD活力增加，MDA含量降低，与Ang I I 组均差异显著(P 0.01 );蜂胶能增加高脂血症兔的总SOD活力，降低LDL、MDA含量，与模型组相比，差异显著(P0.01 )。结论：在抑制动脉粥样硬化病变过程中，蜂胶 具有抗脂质过氧化作用。蜂胶挥发油中含量最高的化合物分别为 : 172 三十五碳烯 (20. 00% ) , 12 二十二烯 (14. 86%),二 十七碳烷(7. 28%) ,a 2桉叶油醇(6. 89%),羊毛甾醇醋酸酯 (5.31%),其中萜烯 类及其衍生物总相对含 量为15.

10、21%，黄酮类化合物为 2 , 6 2二羟基2 42甲氧基查尔酮和柚木柯因两种 ,其含量为 2. 32%。据文献报道 ,巴西蜂胶具有多种生理活性,而其主要成分类别为萜烯类、 含异戊二烯基衍生物和对 2 羟基桂皮酸 162 18 ，在蜂胶挥发油中萜烯 类化合 物很可能是产生抗氧化效果的主要成分。2.3 蜂胶中咖啡碱酯类的抗氧化作用Kimo t o等(1 9 9 9 )研究发现蜂胶提取物中的咖啡酸苯乙酯(C A P E )可明显降低三 醋酸睛铁 盐氧化引起的肾损伤，阻止肾脏和肺脏病变的发生。S u d i n a ( 1 9 9 3 )等指出CAP E是蜂胶提取 液中的活性成分之一，能在微摩尔的浓

11、度范围内抑制5-脂加氧酶催化的亚油酸和花生四烯酸的氧化过程。在 10凶浓度时，可完全阻断人的噬中性粒细胞反应性 氧化物的产生和黄嘌吟-黄嘌吟氧化酶系统。A t i l l a等认为O2-或O H自由基在外伤或多次灌注所致 局部缺血引起的脊髓神经元损伤的发病机理中扮演着重要角色。并通过大白兔大动脉堵塞并多次灌流的实验方法来研究蜂胶中的CA PE对脊髓神经元的保护作用。C A PE组剂量为1 0呵ol/k g，阳性对照组用3 0 m g/k g的甲基强的松龙。结果发现蜂胶中的CA P E具有良好的抗氧化活性，能明显降低组织中MDA的含量，对脊髓神经元表现出明显的保护作 用，降低脊髓神经元损伤的程度

12、。蜂胶中的活性物质 CAPE 还是脂氧合酶的水竞 争性抑制剂，当CAPE浓度为10/ml时，它可以完全阻断人中性白细胞和黄嘌吟-黄嘌吟氧化酶体系产生的活性氧。2.4 蜂胶中其它组分的抗氧化作用Basnetp 等从巴西蜂胶的水提取物中分离出一种苯基丙烯酸衍生物的化合物，其抗氧化活性强于维生素C和维生素E。蜂胶水提取物还可以保护纤维细胞免受高压氧的胁迫，使得蜂胶水提取物具有抗炎症作用。德国学者 vol-pert ( 1 993) 研究发现，蜂胶的水提取物对 心肌黄嘌呤 和黄嘌呤氧化酶催化的氧化反应均有抑制作用， 对吲哚乙酸的过氧化反应也有抑 制作用，其抗氧化作 用可能与所含的单酚和多酚化合物有关。

13、H ilm i等(1 9 9 9 )研究了蜂胶对硒诱导型白内障模型的影 响，主要是利用蜂胶的抗氧化作用，结果发现，蜂胶、环氟拉嗪、砾精和维生索C抑制硒诱导 型白内障生成率分别为70、 60、 58.4和 4 0，而白果制品 E g b 7 6 1 对白内障的形成几乎无效果。说明蜂胶的抗氧化作用不仅仅来源于 黄酮类化合 物， 其它成分也起一定的作用。2.5 提取方法和种类对蜂胶抗氧化作用的影响曹炜等 (2001) 以抑制非细胞体系产生的超氧阴离子和羟基自由基为方法研究蜂胶的抗 氧化活 性， 结果表明蜂胶能有效地清除机体外产生的 02-和 OH 自由基， 并呈现量效关系。 ARju n 等 (20

14、00 )研究了巴西、秘鲁、荷兰和中国等多种蜂胶的细胞毒性、保肝活性和清 除D P P H自由基的能 力，结果表明，巴西蜂胶和中国蜂胶水提取物清除DPPH自由基的能力比醇提取物强、而秘鲁和荷兰蜂胶的醇提物清除DPPH 自由基的能力比水提物强。巴西蜂胶的水提取物、 甲醇提取物和氯仿提取物均有清除 1,1 -Ciphenyl-2-picryhydrazyl 自由基 和氧自由 基的作用。 L i n ( 1 9 9 9 ) 等研究了蜂胶乙醇提取液对酒精慢性中毒引起的谷胱甘 肽和微粒体酶的影 响，发现剂量为3 0 m g/k g体重时，可以明显抑制细胞色素P-4 5 0、还原型辅酶n代谢依赖的细胞色素C

15、还原酶的活性，减少谷胱甘肽和羟基苯胺的产生，阻止脂质氧化过程。沈海涛 ( 2 0 0 2 ) 研究发现蜂胶对油脂的抗氧化能力随提取液浓度的增 加而增 强， 但在清除氧自由基试验中发现氧自由基的清除能力与总黄酮、总酚无对应关系，说明蜂胶中除了黄酮类化合物之外还有其它的抗氧化作用成分。孙丽萍等人以蜂胶为原料，分别以甲醇、乙醇、氯仿、蒸馏水为溶剂进行萃取，测定各 萃取物总 酚与黄酮类物质的含量，通过测定还原能力，清除DPPH 自由基能力的测定来比较 4 种不同萃取物的抗氧化性。 结果表明： 甲醇萃取物具有较强的抗氧化性。 甲醇萃取物浓 度为 0.25mg/ml 时还原力高达 1.162，且浓度为 0

16、.05mg/ml 时对 DPPH 自由基清除率为 64.676%。乙醇 萃取物通过石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮依次分级萃取后所得到4 种萃取物各项指标测定结果表明， 氯仿萃取了蜂胶乙醇萃取物中主要成分， 但乙酸乙酯和丙酮萃取物 的还原 能力及清除 DPPH 自由基清除能力较佳，在浓度为 0.05mg/ml 时还原力分别为 2.087和 1 .798， DPPH 自由基清除率达 87.724%和 88.013%。3. 蜂胶的抑菌作用蜂胶，除具有调节免疫 、抗氧化、抗疲劳、抗癌、抗菌等生物学和药理学作用外，还 具有良好 的抑菌作用， 但其抑菌作用机理还尚未报道。 一般认为， 天然抗菌物质的抗菌机理 分为两大类： (1)破坏菌