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1、使用说明书本试剂盒仅供体外研究使用!预期应用法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中含量。实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗抗体、标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物显色。在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的呈正相关。用酶标仪在波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板：一块（96孔）标准品（冻干品）：瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至，盖好后静置分钟以上,然后反复颠倒搓动以助溶解，其浓度为/做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释）后，分别稀释成/样
2、品稀释液直接作为标准浓度，临用前分钟内配制。如配制标准品：取（不要少于）的上述标准品加入含有样品稀释液的管中，混匀即可，其余浓度以此类推。样标品稀释液：检标测稀释液检标测稀释液B：检标测溶液A：）0临0用前以检测稀释液稀0释0，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（孑L）,实际配制时应多配制。如检测溶液加检测稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。检测溶液：瓶（1临用前以检测稀释液稀释。稀释方法同检测溶液A。底物溶液：瓶。浓洗涤液：瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释倍。终止液：瓶（）411覆检膜：5张12使检用说明书：1份自备物品1检酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热）微量加液器及
3、吸头，管3检蒸馏水或去离子水，全新滤纸标本的采集及保存血清：全血标本请于室温放置小时或过夜后于离心分钟，取上清即可检测，或将标本放于C或C保存，但应避免反复冻融。血浆：可用或肝素作为抗凝剂，标本采集后分钟内于离心分钟，或将标本放于C或C保存，但应避免反复冻融。其它生物标本：请离心分钟，取上清即可检测，或将标本放于C或C保存，但应避免反复冻融。样本处理:血清或血浆标本推荐稀释倍，如:稀释倍，取血清或血浆加入样品稀释液。标本使用的稀释（）。注：以上标本置C保存应小于周，C或C均应密封保存，C不应超过个月，C不应超过个月；标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。操作步骤实验开始前，
4、各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在C溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液0余孔分别加标准品或待测样品0注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，C反应分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液工作液（在使用前一小时内配制）,酶标板加上覆膜C反应分钟。3温加育60分钟后，弃去孔内液体，甩干
5、，洗板3次，每次浸泡1-分2钟，大约400每在孔使，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。每孔加检测溶液工作液（同检测工作液），酶标板加上覆膜C反应分钟。5温加育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-分2钟，350每在孔使，/甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。依序每孔加底物溶液，酶标板加上覆膜C避光显色（分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-孔4有明显的梯度兰色，后3-孔4梯度不明显，即可终止）。依序每孔加终止溶液，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。用酶联仪在波长依序测量各孔的光密度（值）。
6、在加终止液后立即进行检测。注：1依试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）最好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。3. 孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态同
7、时应严格遵守给定的孵育时间和温度。4. 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。试剂配制：及在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液工作液、检测溶液工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请精确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置（如吸取检测溶液时，一次不要小于），以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液工作液或检测溶液工作液。6. 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比
8、如，每隔10分钟），如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。7. 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。洗板方法1.手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少注入孔内，浸泡分钟，根据需要，重复此过程数次。自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。特异性本试剂盒可同时检测重组或天然的人，且与其它相关蛋白无交叉反应。计算以
9、标准物的浓度为纵坐标（对数坐标），值为横坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如，根据样品的值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。说明1，在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，试剂避免受到微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。2，小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。请注意在吸取标本/标准品，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。而且，洗涤不充分将影响试验结果。试剂盒保存：部分试剂保存于C,部分试剂保存于C,具体以标签上的标示为准。4，浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。5，刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。6，中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。7，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。，有效期：6个月
