《细胞生物学实验教学大纲.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞生物学实验教学大纲.doc（15页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、细胞生物学实验教学大纲文档来自网络，是本人收藏整理的，如有遗漏，差错，还请大家指正！细胞生物学实验教学大纲学时：21学分：课程性质：必修实验个数：4适用专业：生物系各专业大纲执笔人：康美玲大纲审定人：王洪凯一、课程的性质与任务细胞生物学实验课程是生命科学学院本科各专业一门重要的必修基础课程，在生命学科的本科教学中有着十分重要的地位课程内容包括基础验证和基本技能性实验；综合性实验和开放式、研究型、创新性实验三大类基础验证和基本技能性实验主要是配合理论课的教学，使学生加深理解和掌握有关的知识，同时能够规范地掌握细胞生物学研究的基本操作与基本的实验技能综合性实验和开放式、研究型、创新性实验，目的旨在
2、培养和提高学生实验设计和应用各种实验技术的能力，培养和训练学生的创新意识和创新能力，培养严谨的科学态度和实事求是的作风，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力，为今后独立从事科学研究打下坚实的基础二、实验的目的与要求 1. 配合理论课教学，加深和巩固所学的知识 2. 掌握细胞生物学研究有关的基本技术，学习先进的研究方法和技能 3. 通过开放式、研究型、创新性实验训练，培养和提高学生的实验设计能力，实验动手能力以及文献查阅、论文写作的能力 4. 通过开放式、研究型、创新性实验训练，培养学生的科学思维方法，提高发现问题、分析问题和解决问题的能力在实验教学过程中，要求学生除了掌握基本的操作技能外，实
3、验室还做到全开放，为学生提供进行开放式、研究型、创新性研究的场所，学生可以个人或小组的形式根据自己所学知识、兴趣设计研究课题进行实验参加学校组织的科技大赛三、实验项目与内容提要序号实验项目学时必开选开实 验 类 型内容提要基本综合设计1血涂片的制备和细胞大小的测量3认识红细胞及各种白细胞的典型形态，掌握显微测微尺的使用方法2脂类、DNA、RNA的细胞化学4了解脂类、两种核酸在真核细胞中的分布3死活细胞鉴别3掌握死活细胞鉴别的原理及方法，了解细胞存活率在研究中的应用和意义4细胞器的分离与观察4了解细胞器的分离原理，掌握差速离心和密度梯度离心技术5叶绿体的分离与荧光观察3了解细胞器分离的一般原理方
4、法，观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，熟悉荧光显微镜的使用方法6细胞融合4了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术7动物血细胞的电融合技术4本实验使学生在了解电融合原理的基础上，学会掌握各种细胞悬液的制备及电融合过程的操作8植物原生质体的分离和培养4原生质体是除去细胞壁的裸露细胞在适宜的条件下，分离的原生质体能够再生细胞壁，进行细胞分裂，并再生完整植株通过实验，掌握原生质体分离和培养的基本方法，并对培养结果进行观察和分析9细胞膜的渗透性2了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度10细胞凝集反应2掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理四、实
5、验内容安排实验一 血涂片的制备和细胞大小的测量一、 目的与要求1. 掌握血涂片的制备方法2. 认识红细胞及各种白细胞的典型形态3. 掌握显微测微尺的使用方法二、实验原理 将血液样品制成单层细胞的涂片标本，经瑞氏染液染色后，不同白细胞中的颗粒可以呈现不同的颜色碱性粒细胞的颗粒呈蓝紫色，酸性粒细胞的颗粒呈橘红色，中性粒细胞的颗粒呈粉红色根据细胞中颗粒的颜色、大小及多少，再结合细胞的大小及细胞核的形态，就可以将白细胞进行分类计数三、实验材料医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、载玻片、目镜测微尺和镜台测微尺四 、实验内容1. 学习血涂片的制备方法以及对各种血细胞的形态及染色的观察与鉴别2. 学习使用显微
6、测微尺：包括目镜测微尺和镜台测微尺实验二 细胞化学实验一、 目的与要求 熟悉细胞脂类的显示技术，了解其在细胞中的分布；学习区别定位细胞DNA、RNA的显示方法二、 原理（1）苏木精为碱性染料染细胞核，苏丹红为偶氮脂溶性染料，可显示细胞中的脂类的分布及量； （2）甲基绿与DNA双螺旋外侧的磷酸根基团结合力强，结合后阻止派洛宁从碱基之间插入甲基绿与DNA的结合产物为绿色派洛宁与RNA的结合力强，RNA结构较松散，派洛宁可以插入，从而中和磷酸基团，阻止甲基绿染色，派洛宁与RNA的结合物呈红色，根据颜色的部位可以判断DNA和RNA的定位并且判断两种核酸的相对含量三、 实验材料水浴锅、冰冻切片机、载玻片
7、等；猪肝、花生子叶、四、 实验内容1. 脂类显示用猪肝切片和花生的超薄切片，学习掌握使用冰冻切片机的操作技术，获得理想的切片；2. 对于细胞中DNA和RNA的显示，材料选用猪肝印片，学习如何制备肝印片的片子，而后进行固定、浸洗、染色等即可显示二者在细胞中的分布实验三 死活细胞的鉴定一、 目的与要求 掌握死活细胞的鉴定方法及原理二 、原理 对于死活细胞的鉴定通常采用两种方法：一是荧光排除法；二是染色排除法：采用的染料是台盼蓝与中性红，台盼蓝等很多酸性染料不易通过活细胞，只能将死细胞染色，而中性红为弱减性，特异性在活细胞中积累三 、实验内容 1. 制备口腔颊黏膜上皮细胞的切片至少两张2用04%的台
8、盼蓝和中性红分别染色制成临时装片，镜检2. 计算细胞的存活率实验四 叶绿体的分离与荧光观察一、目的与要求了解细胞器分离的一般原理方法，观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，熟悉荧光显微镜的使用方法二、实验材料荧光显微镜、组织捣碎机、离心机等；菠菜叶 三、实验内容1. 学习荧光显微镜、组织捣碎机、离心机等仪器的使用方法2. 叶绿体的分离与观察3. 菠菜叶徒手切片的观察实验五 细胞器的分离与观察一、目的与要求了解细胞器的分离原理，掌握差速离心和密度梯度离心技术二、实验材料低温高速离心机、组织捣碎机、显微镜等；猪肝三、实验原理 由于不同的细胞器大小和密度存在差异，因此不同的细胞器在介质中的沉降系数各不相同
9、利用这种性质，我们可以利用分级分离的方法来分离不同的细胞器采用差速离心法和密度梯度法两种四、实验内容1组织匀浆2离心3蔗糖密度梯度离心纯化细胞核4通过差速离心进一步的离心制备其他的细胞器5对制备的细胞器进行染色鉴定实验六 细胞融合一、 目的与要求 了解PEG诱导细胞融合的基本原理，通过PEG诱导鸡红细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合技术二 、原理 PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：一可促使细胞凝聚；二是破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个大的双核或多核融合细胞三、实验材料和工具 倒置显微镜、 离心机、刻度离心管、水浴锅等；红细
10、胞四 、实验内容 1. 抽鸡血2调整细胞密度3加PEG 融合4观察细胞融合情况实验七 动物血细胞的电融合技术一、目的与要求本实验使学生在了解电融合原理的基础上，学会掌握各种细胞悬液的制备及电融合过程的操作二、实验原理制备的游离细胞或原生质体，置于电融合室中，在高频交流电场的作用下，细胞被极化，成为偶极子，造成细胞之间相互连接，如果施加的高频交流电压(即正弦波的p-p值)过高或作用时间过长，则细胞连接成串珠状，应适当控制以上条件，尽量使两细胞处于点接触状态，然后施加方波脉冲予以刺激，由于电脉冲的瞬间作用，可击破两细胞接触点部位的质膜，此时质膜的脂类分子发生重组，同时由于细胞表面的张力作用，使两细
11、胞融合逐步完全 三、实验材料细胞电融合仪、倒置显微镜；鸡血四、实验内容 1动物血细胞的制备 2同种血细胞的电融合 3.在倒置显微镜下观察细胞融合现象五、作业与思考题1.绘图表示所观察到的融合细胞2.请写出细胞电融合的注意事项实验八 植物原生质体的分离和培养一、目的与要求原生质体是除去细胞壁的裸露细胞在适宜的条件下，分离的原生质体能够再生细胞壁，进行细胞分裂，并再生完整植株通过实验，掌握原生质体分离和培养的基本方法，并对培养结果进行观察和分析二、实验原理酶解法分离原生质体是一个常用的技术，其原理是植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素和果胶质组成，因而使用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶能降解细胞壁成分，
12、除去细胞壁而使原生质体释放出来原生质体分离纯化或融合后，在适当的培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团，长成愈伤组织或胚状体，再分化发育成苗三、实验器材超净工作台、高压灭菌锅等四、实验内容1分离原生质体的酶液及培养基的配制2叶肉原生质体的分离、培养及愈伤组织原生质体的分离、培养五、作业与思考题1酶解液及原生质体起始培养基中，为何要保持较高渗透压？2如何判断分离原生质体的活力和新壁再生？实验九 细胞凝集反应（选做）一、实验目的与要求掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝集的原理 二、实验原理 凝集素是一类含糖的（少数例外），并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集
13、细胞和刺激细胞分裂的作用凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成桥的结果 三、实验用品1、器材：离心机、离心管、天平、显微镜、移液管2、试剂：PBS缓冲液、生理盐水3、材料：土豆块茎、兔血 四、实验内容PBS缓冲液、低渗溶液的配制，以及2%红细胞和羊血细胞悬液的制备 四、作业与思考除植物凝集素外，还有那些物质可以引起植物的凝集反应？ 实验十 细胞膜的渗透性（选做）一、实验目的与要求并了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度二、实验原理细胞膜为一种半透膜，对物质的通透具有选择性当红细胞放入低渗溶液中时，细胞吸水膨胀而发生溶血当红细胞放入含不同溶质的等渗溶液中时，由于细胞膜对
14、不同溶质的透性不同，细胞发生溶血的时间也会不同，故发生溶血现象时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标三、实验内容1.鸡血细胞悬液的制备：一份鸡血+10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透明的红色液体，此即稀释的鸡血2.低渗溶液：一支试管中，加入10ml蒸馏水+1ml稀释的鸡血，观察溶液颜色的变化？3.鸡红细胞的渗透性观察：（1）在10种等渗溶液中观察细胞溶血现象及时间（2）在显微镜下观察血球凝集现象和不同低渗溶液下的溶血现象四、作业与思考影响细胞膜渗透性的因素有那些，你认为它们对本实验的结果会产生什么样的影响？实验十一 线粒体和液泡系的组织染色与观察（选做）一实验目的观察动、植物活细胞内线粒体和液泡系的形态、数量及分布，掌握细胞超活染色技术及原理二、实验原理
