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1、项 目谷丙转氨酶（ALT）方 法IFCC速率法目 录1. 检测原理2. 标本采集与处理2.1 受检者的准备2.2 静脉采血2.3 抗凝剂2.4 标本处理3. 试剂3.1 试剂3.2 校准血清3.3 试剂、校准血清的稳定性4. 仪器5. 操作6. 计算7. 操作性能7.1 精密度7.2 准确度7.3 灵敏度7.4 可报告范围7.5 特异性7.6 干扰8. 参考值9. 临床意义附录A: 参数1. 检测原理谷丙转氨酶催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处
2、测定NADH下降速率，即可测出ALT活性。 ALTL-丙氨酸 + a-酮戊二酸 - 丙酮酸 + L-谷氨酸LDHNADH + 丙酮酸 + H+- L-乳酸 + NAD+2 标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。2.2 静脉采血：除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应
3、静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。2.3 抗凝剂：血浆使用肝素或EDTANa2（1mg/mL）作为抗凝剂。2.4 标本处理：血标本室温放置30min45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8保存。3试剂3.1 试剂：本科使用湖南永和阳光科技有限责任公司ALT试剂盒，为液体双试剂，各组分如下： 组 成R1:R2=5:1混合后溶液的浓度R1: Tris缓冲液:80mmol/L PH=7.8L-丙氨酸450mmol/LLDH1200U/LR2: 起动液NADH0.18mmol
4、/La-酮戊二酸18mmol/L3.2：校准血清使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。校准频次：空白定标：每日需做试剂空白定标。全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。3.3 试剂、校准血清的稳定性：原包装试剂储存在2-8至标签所示失效日期。18-22稳定28天，试剂应避免污染。当试剂空白吸光度低于0.8时，试剂按照失效处理。多项校准血清在2-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。4仪器KONELAB 30型号仪器。性能：波长340nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001AB
5、S以上。5操作样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为IFCC法。参数见后附，附录A。试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。6计算A/minVt1000 ALT(U/L) = - = A/minFeVsd式中：A/min 每分钟吸光度变化率； e 18.5 摩尔吸光系数；Vt 反应液总体积（ml）； d 1 比色杯光径（cm）；1000 变化因数； Vs 标本体积（ml）；7操作性能7.1 精密度：批内CV0.22%，批间CV4.21%。7.2 准确度：检测结果的相对不准确度10%。7.3 灵敏度：谷丙转氨酶浓度为：300U/L时，吸光度变化率A340nm/min为0.1260.154。7.4 可报告范围：血清与试剂用量之比为1:12时，测定上限为600U/L。7.5 特异性：测量值在给定值的90%-110范围内。7.6 干扰：内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸300mg/ml对测试结果无明显影响。8参考值038U/L9临床意义ALT主要存在于组织细胞中，只有极少量释放入血液中，所以血清中此酶活性很低，当这些组织病变时，细胞内的酶大量释放入血液中，使血清中该酶的活性增多。各种肝炎的急性期，肝癌、肝硬化等此酶活性显著增高。附录A: 参数
