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1、实验1蛋白质热变性DSC测试实验一、实验目的与要求了解用差示扫描量热法(DSC)测量蛋白质热变性的方法，用差扫描量热法研 究白蛋白在纯水和乙二醇溶液中的热变性行为,比较在这些体系中蛋白质变性的 差异，并测量分析新鲜蛋清的热变性行为。二、实验装置1差示扫描量热仪 (Pyris Diamond DSC)。2标定物质：高纯度铟(99.99)，高纯度锌(99.99)。 3高纯度氮气。5标准液体铝皿。6被测样品。7压样机。8高精度电子天平。9. DSC取样附件。三、实验方法与步骤1、原理一般认为，凡是能引起蛋白质天然构象的变化、而不涉及肽键断裂的任何过 程，都叫变性。由于加热而产生的蛋白质变性称为热变性
2、。变性会使物理性质、 化学性质和生物性能发生改变。蛋白质在生命活动中表现出的种种生物功能,完 全取决于其特定的构象,一旦这种特定的构象受到破坏,其生物功能就会随之消 失。因此研究蛋白质在不同条件下的热变性规律具有非常重要的意义。示差扫描 量热法能直接给出蛋白质热变性过程的温度和能量变化,是研究蛋白质构象变化 和结构稳定性的一种非常有效的方法。2、操作方法(1) 配制溶液，制备样品；(2) 按照仪器使用手册，在指导教师的指导下对仪器进行基线优化、温度 标定、炉子标定和热流标定；(3 )称取被测样品5-10mg，装入样品皿，用压样机封样；(4) 编制温度程序，以10K/min速率在3090C范围内
3、升温，记录实验曲 线；(5) 换其他不同样品，进行相同的操作。四、实验注意事项1、试样放入样品皿时，要保证试样充分摊开，和样品皿的底部充分接触；2、加样和取样时要规范操作，不能用力过大，以免损坏仪器。3、因为蛋白质的构象转变和热历史有关，所以测量要在相同的实验条件下进 行。五、实验记录1、白蛋白在纯水中的浓度、热流曲线；2、白蛋白在乙二醇溶液中的浓度、热流曲线；。3、实际蛋清的热流曲线。六、实验数据处理通过实验记录的热流曲线，利用仪器自带软件，计算变性温度 T 和变化焓 H。比较不同样品在相同溶剂中的异同和相同样品在不同溶剂中的异同。d白蛋白在不同溶剂中的变性热力学参数样品纯水乙二醇T/KH/J g-iT/KH/J g-i
