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1、课程编号 :微生物学实验教学大纲学时数： 108 讲课： 108学制：四年制本科适合专业：生物科学相关专业一、 本 课程的性质和任务（一） 课 程的性质：微生物学实验主要任务是使学生掌握研究与应用微生物的主要方法与技术， 包括经典的、常规的、以及现代的方法与技术，使学生具有适应丁从事相关学科 的基础理论研究与实际生产应用的微生物学实验技能。 提高学生分析问题和解决 问题的能力。根据本学科的特点，逐步使学生认识微生物的基本特性， 比较它们 与其它生物的相似和不同之处，知道如何研究微生物以及对研究中所出现的问题 点样分析，并加以解决。（二） 课 程的任务：微生物学实验是生物学重要的基础课之一，要求
2、学生熟悉微生物学方法与技术，掌握无菌操作技能和建立无菌概念是微生物学实验中最重要的容， 重点掌握 最基本的无菌操作技能，如接种、纯培养、计数等。二、 本 课程与其他课程的联系：1. 通过教师示、讲解与学生实际操作相结合方法，使学生牢固树立无菌概念，掌握显微镜的使用、生物染色技术、形态学观察的方法、微生物计数、培养基的配置和灭菌方法、微生物分离、纯化等基本操作技能，基本了解常用的仪器设备的基本原理、构造、使用方法及使用中的注意事项，树立严谨的科学态度， 提高观察、分析问题和解决问题的能力，培养勤俭节约、爱护公物和相互协作的 优良作风。2. 本实验课容包括验证性实验、综合性实验两个部分。验证性实验
3、主要通过光学显微镜镜检观察方法进行教学，综合实验在教师指导下学生根据所掌握的 理论基础和实验技能，由学生自己动手完成。实验过程要求学生仔细观察实验现象，完整记录原始实验数据、结果，分析实验现象并认真填写实验报告。三、教学容( 一 ) 实验一实验室安全教育与微生物学实验室常用的器目的要求掌握实验室安全规则，了解微生物学实验所用的器也，因其大多要进行消蠹、灭菌和用来培养微生物，因此了解其质量、洗涤和包装方法的要求。实验容一、器也的种类、要求与应用：1 、 试管大试管(约18mmi80mm):可装倒平板用的培养基；可作制备斜面用；装液 体 培养基用丁微生物的振荡培养中试管(13? 15)mm100
4、? 150)mm: 装液体培养基培养细菌或做斜面用；用丁细菌、霉菌、病蠹等的稀释和血活学试验。小试管(10? 12)mm00mmL 股用丁糖发酵或血活学试验，和其它需要节省材料的试验。2 、 容 量瓶主要用丁准确配制一定浓度的溶液，它是一种细长颈、梨形的平底玻璃瓶， 配 有磨口塞，瓶颈上刻有标线。3 、 量筒用来量取液体体积的一种玻璃仪器，外壁上有刻度。常用量筒的规格有 5ml 、10ml、 25ml、 50ml、 100ml 、 250ml 等。4 、 三 角瓶用来装无菌水、培养基和振荡培养微生物等。5 、 烧杯 呈圆柱形，顶部的一侧开有一个槽口，便丁倾倒液体，有些烧杯外壁标有刻度，可以粗略
5、地估计烧杯中液体的体积，这种烧杯叫印标烧杯，也叫刻度烧杯，分度并不十分精确，允许误差一般在土 5%6 、 烧瓶通常具有圆肚细颈的外观，因瓶口很窄，不适用玻璃棒搅拌，若需要搅拌时，可以手握瓶口轻微转动手腕即可顺利搅拌混匀。烧瓶随其外观的不同分为圆底烧 瓶 和平底烧瓶两种，通常平底烧瓶用在室温下的反应，而圆底烧瓶则用在较高温 的反 应，这是因为圆底烧瓶的玻璃厚薄较均匀，可承受较大的温度变化。7 、 三角烧瓶（锥形瓶）锥形瓶瓶体较长，底大而口小，盛入溶液后，重心靠下，极便丁手持振荡， 故常用丁容量分析中作滴定容器。 也可以供加热、煮沸、贮存、消蠹各种液体用， 常 用容量有 : 100ml、 250m
6、l 、 500ml 、 1000ml 等。8 、 烧杯用来配制培养基与各种溶液等。9 、 离心管常用的有 0.5ml、 1.5ml、 10ml、 15ml 、 20ml 等规格，其上有刻度，专供离 心 机使用。主要用丁微生物分子生物学实验中，小量菌体的离心， DN 触 RNA 勺 检测和提取等。10 、 移液管和吸管均用丁吸取和转移少量液体。移液管上刻有标线，在标明的温度下，当吸取溶液至弯月面与标线相切后，让溶液自然放出，此时所放出溶液的体积即等丁管上所标的体积。常用的移液管有1mL 2mL 5mL 1Om 母。吸管常用的规格有两 种：一种为无刻度的毛细管；另一种为有刻度吸管，管壁有精细的刻度
7、。一般长为 25cm 常用的容量为 0.2mL 、 0.5mL 、 1mL 2mL 5mL 1OmL11 、 染色缸有方形和圆形两种，方形的较大, 可放 10 载玻片，圆形的较小，可放5 载 玻片，供细菌、血液及组织切片的标本染色用。12 、 漏斗分短颈和长颈式两种。漏斗直径大小不等, 有 60mm 100mnft 150mn# 几种 不同规格，供分装溶液或者上垫滤纸、纱布、棉花作过滤杂质用。13 、 滴瓶有橡皮帽式和玻塞式，分无色和棕色，容量有30mL 和 60mL 等，供储存试剂 或染色液用。14 、 下口瓶分为有龙头和无龙头两种。容量有2500mL 5000mL 两种规格。供存放蒸僻水或
8、常用的消蠹药液用。15 、 培养也由一底一盖组成一套，常用的培养皿皿底直径90 mm高15mm皿底皿？盖均 为玻璃制成。在培养也倒入适量固体培养基制成平板，可用丁分离、纯化、鉴定菌种、活菌计数以及测定抗生素、噬菌体的效价等。16 、 载玻片及盖玻片载玻片主要用丁微生物涂片、染色，做形态观察等。另有凹玻片，就是在一块厚玻片当中有一圆形凹窝，做悬滴观察活细菌及血活学试验用。 盖玻片为极薄 的玻片，用丁标本封闭及悬: 滴标本等。17 、 德汉氏小管观察细菌在糖发酵培养基产气情况时，一般在小试管再套一倒置的小套管(约 6mm36mm, 此小管即为德汉氏小管，乂称发酵小套管。18 、 双层瓶由外两个玻璃
9、瓶组成，层小锥形瓶放香柏油，供油镜观察微生物时使用，外 层 瓶放二甲苯，用以擦净油镜头。19 、 接种工具接种工具有接种环，接种针，接种钩，接种铲，玻璃涂布器等。为细菌学检验工作中接种、分离细菌或挑取菌落制作涂片所必不可少的工具。 接种环常装丁 铝质的握柄上，用坏后可随时更换。二、玻璃器皿?的洗涤方法20 、新玻璃器皿?的洗涤在 2%勺盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干净。21 、旧玻璃器皿?的洗涤(1) 试管、培养皿?、三角瓶：洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗。A 装有固体培养基：刮掉，洗涤。B 带菌的器血： 2球尔或 0.25%新洁尔灭消蠹液中浸泡 24 小时或煮沸 0.5 小 时，然后洗
10、涤。C 带病原菌培养物的器皿?：先高压蒸汽灭菌，倒去培养物。(2) 玻璃吸管：吸管尖端与装在水龙头上的橡皮管连接，反复冲洗。A 吸过血液、血活、糖溶液或染料溶液等的玻璃吸管： 立即投入盛有自来水 的容器中浸泡，实验后集中冲洗。B塞有棉花的吸管：用水将棉花冲出，然后冲洗C吸过含有微生物培养物的吸管：2球尔或0.25%新洁尔灭消蠹液中浸泡24小时 然后洗。D吸管壁有油垢：洗涤液中浸泡数小时，再冲洗。?的皿？底和皿？盖洗净后的试管倒置丁试管筐，三角瓶倒置丁洗涤架上，培养皿 分开，依次压着血边排列倒扣在桌上，晾干。洗涤后，若壁的水均匀分布成一薄层，表示完全洗净，若还挂有水珠，则需 用洗涤液浸泡数小时，
11、然后再用自来水冲洗。三、各种器皿？的包扎1、培养也的包扎:培养也常用旧报纸紧紧包裹（也可用金庙筒包装），一包7? 10套，包好后 干热 或湿热灭菌。2 、吸管的包扎：在上端约0.5cm处，塞入一小段1.5 cm长的棉花（勿用脱脂棉），目的是避 免 将外界或嘴中杂菌吹入管，或不慎将菌液吸出管外。然后用 4? 5 cm宽的长纸 条包 扎。3、试管和三角瓶等的包扎：试管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅胶塞；用二层报纸包扎好（如有牛皮纸，效果更好），进行干热或湿热灭菌。试管较多时，一般 7个或10个一组，再用双 层报纸 包扎。附：棉塞的制作：棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水份的蒸发，故在微生物工
12、作中一直普遍使用着。做棉塞的要求：松紧适中，不能太松也不能太紧，太松达不到滤菌的目的，并且易脱落，太紧通气不好，操作不便，做到手拿不掉，乂易转动；深浅适度，棉塞总长1.5寸左右，约有1/3在试管外，2/3在试管，顺时针方向塞入。棉花 要求采用普 通棉花，它能防潮不易吸水，不要用脱脂药棉，它易吸水乂昂贵。（由教师示）实验材料和用品以上所有器皿-环境微生物的检查目的要求1 、 证 明实验室环境与体表存在微生物；2 、 比 较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型；3 、 观 察不同类群微生物的菌落形态特征；4 、 体 会无菌操作的重要性。实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分， 当取自不
13、同来源的样品接种丁 培养基上，在合宜温度下培养， 1-2d 每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行 繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。实验容1、 环境微生物的检测：倒平板、接种环境微生物；2、 灭菌器皿？的准备：学习包扎平也、移液管。实验材料和用品1 、材料：环境中各种微生物；2 、 用品：牛肉膏蛋白豚培养基、无菌平血、移液管、平皿、洒精灯、牛皮纸、记号笔。（三） 实 验
14、三显微镜的构造、性能和使用方法目的要求1 、学习掌握油镜的规使用方法；2 、复习掌握光学显微镜的基本结构及使用方法。实验原理油镜工作原理：3 、增加照明亮度；4 、显微镜的分辨力：指显微镜能够辨别两点之间最小距离的能力。它与接物镜的数值孔径成正比，与光的波长成反比。分辨力 = （1/2 光波长度）/数值孔径实验容5 、复习显微镜的使用方法；6 、油镜的使用原理、操作要点（包括活洁方法）;7 、当堂考核油镜使用方法，合格方能通过。实验材料和用品学生显微镜、细菌三型装片；双层瓶（装香柏油和乙酰一一洒精擦拭液）、擦镜纸。（四） 实 验四 细菌的简单染色与显微观察目的要求1 、学习微生物涂片、染色的基
15、本技术，掌握细菌的简单染色法；2 、初步认识细菌的个体形态、菌落形态特征；3 、巩固显微镜（油镜）的使用方法和无菌操作技术。实验原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。 此法操作简便，适用丁菌体一般形状和细菌排列的观察。常用碱性染料进行简单染色，这是因为： 在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易丁识别。常用作简单染色的染料有：美蓝、结 晶紫、碱性复红等。当细菌分解糖类产酸使培养基pH 下降时，细菌所带正电荷增加，此时可用 伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色。实验容1 、 微生物菌落形态的观察：几种代表类型微生物菌落形态特征了解、 辨识；2 、 细菌简单染色及个体形态的观察：无菌接种操作；涂片、干燥、固定、
