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1、 鱼的急性毒性试验一、实验目的和要求：通过本试验，熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤，以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。二、实验原理：鱼类对水环境的变化反应十分灵敏，当水体中的污染物达到一定程度时，就会引起一系列中毒反应，例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变直至死亡。在规定的条件下，使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液，实验至少进行24h，最好以96h为一个实验周期，在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率，确定鱼类死亡50%时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污
2、染程度、检查废水处理的有效成都，也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。三、实验材料：1. 实验鱼的选择和驯养126 小锦鲤鱼 体长7-12cm 体宽3-5cm 体重 7-12g不同浓度的苯酚（mg/L）0、24、48、96、192、3842、实验仪器设备 （1）实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水槽。容器体积可以根据试验鱼的体重确定，通常以每升水中鱼的负荷不得超过2g（最好为1g）。一些小型鱼类幼鱼可选择500ml或1000ml烧杯为实验容器。容器的深度必须超过16cm，水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器，可在容器上
3、加上网罩。实验容器使用后，必须彻底洗净，以除去所有毒性残留物。 （2）其他 吸光光度计3、实验用水： 曝气水四、操作步骤：1、设置5个浓度组，1个空白对照组，选择不同浓度的苯酚（mg/L）0、24、48、96、192、384。每个浓度放入12条小锦鲤鱼。采用直接投毒方式，将配制的苯酚溶液直接倒入水槽中，搅拌均匀。分别分为1、2、3、4、5、6组。染毒后观察其活动状况，并每隔两个小时观察其生长活动、记录鱼死亡数量。在72h后检查受试鱼的状况。如果没有任何肉眼可见的运动，如鳃的山东、碰撞尾柄后无反应等，即可判断该鱼已死亡。观察各处理组鱼的状况，并记录试验鱼的异常行为（如鱼体侧翻、失去平衡，游泳能力
4、和呼吸能力减弱，色素沉积等）试验结束时，对照组的死亡率不得超过10%。2、在连续观察72h后，对鱼进行解剖实验，观察鱼身体内部染毒状况，将肝脏、肾、胆分离，计算肝脏与鱼体重之比3、提取肝脏酶液、，肝脏称重，放入研钵，加入少量石英砂，加3mlPBS缓冲液匀浆，转移至离心管，然后用2mlPBS洗研钵2次，清晰并转入离心管，上清液即为酶的粗提物，进行酶促反应，在365nm波长下测量吸光值参比MAXSAMPLEBackground酶液0.30.3PBS32.42.12.7混匀，静置12minH2O20.60.625摄氏度，避光保存2060min终止显色剂5ml摇匀5min参比（调零）AMASASH根据
5、解剖后的肾重和肝重计算出脏体系数（脏体系数=肝脏/体重100%）；根据测出的吸光值计算：CAT酶的活性=(Am+Ash-As)/ (0.10.3)五、实验报告1、 数据处理以暴露浓度为横坐标，死亡率为纵坐标，在计算机或书概率纸上，绘制暴露浓度对死亡率的曲线。用直线内插法或常用统计程度计算出72h的半致死浓度（LC50）的近似值，即这两个浓度的几何平均值。2、 化学物质急性毒性分级依据LC50值的大小，可以将化学物质的急性毒性分为剧毒、高毒、中等毒、低毒和微毒五级，如表1-1所示鱼起始LC50（mg/L）小于111001001000100010000大于10000毒性分级剧毒高毒中等毒低毒微毒实
6、验结果与分析：(1)试验中鱼的情况投毒时间：2015年11月11日9：40am1组，对照组，无投毒，集聚于池底角落。没有死亡2组，投毒，刚开始大多浮于水面，运动性加强，过了一会后开始加速运动，然后见偶有剧烈运动现象，最后持续剧烈运动。没有死亡3组，投毒，先是剧烈运动，然后开始侧游，之后速度持续下降，最终沉于出池底，偶尔有运动现象。死亡一条，其他大致恢复正常，聚集在箱底4组，投毒，23min开始剧烈运动，然后开始侧游，810min后停下来，然后沉于池底。死亡一条，濒死一条，其他的大致正常。三点四十，濒死的鱼恢复正常。5组，投毒，马上开始剧烈运动，然后开始侧游，大概5min后静止，沉于池底。一条濒
7、死，其他鱼偶有发生侧翻现象，大体正常。三点四十，濒死鱼恢复正常。6组，投毒，不到1min开始剧烈运动，然后速度减缓，开始侧游，5min接近静止，沉于池底。死亡七条，其他濒死侧翻的鱼有三条大致恢复正常，两点五十五，再次死亡两条，三条能够正常缓慢游动并聚集在一起。苯酚浓度对鱼的生命活动影响较大，在加入高浓度苯酚溶液的水中，鱼死亡较多，低浓度苯酚溶液水中没有出现鱼的死亡（2）鱼的体表特征、脏体系数及肝脏酶活性影响注：因第6组鱼缺少，所以没有第6组的实验结果1、 各组鱼解剖前体表特征组别描述项目12345色素沉积无无轻度轻度明显出水无 无有有鳃正常正常带一点深色深色深色鳞片紧密较紧密有轻微脱落有脱落有
8、脱落注：第5组样本经过冷冻保存，无法观察出水2、鱼肝、胆、肾称重记录（单位：g）组别重量/g项目12345肝0.030.060.080.070.04胆0.100.220.240.110.20肾0.040.040.040.040.023、肝脏系数组别脏体系数项目12345肝0.33%0.57%0.82%0.79%0.49%胆1.11%2.10%2.45%1.25%2.44%肾0.45%0.38%0.41%0.45%0.24%体重/g8.9610.469.818.828.184、吸光值（365mn）以及CAT酶的活性（CAT酶的活性=(Am+Ash-As)/ (0.10.3)）项目吸光值组别AsAshCAT酶的活性Am10.0820.0087.420.35920.2960.2227.0030.4150.3336.6040.1150.07710.0950.2790.1636.921内容作参考
