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1、猪瘟间接血凝抗体检测试验一、原理：用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验,称为正向间接血凝试验（I)。抗原与其对应的抗体相遇，在一条件下形成抗原抗体复合物。但这种复合物的分子团很小，肉眼看不见。将抗原吸附（致敏）在红细胞表面，制成猪瘟血凝抗原,用于检测免疫动物血清中的猪瘟抗体水平。这种经过猪瘟抗原致敏的红细胞与猪瘟抗体相遇，红细胞便出现清晰的凝集现象。二、 主要组分：1猪瘟血凝抗原5m瓶,5瓶/盒；.猪瘟阳性对照血清0.5m/管,管/盒；猪瘟阴性对照血清05ml管，1管/盒；4稀释液0m/瓶，瓶/盒；5.封板膜10张/盒。三、试验器材： 1.96孔10V型医用血凝板; .8道或12道移液器; 3
2、微量振荡器。四、 物理性状:抗原 摇匀呈棕红色（或咖啡色）,静置后，血球逐渐沉入瓶底；2.阴性对照血清 淡黄色清亮稍带粘性的液体；3.阳性对照血清 微红或淡黄色稍浑浊带粘性的液体；4稀释液 淡黄或无色透明液体，低温下放置,瓶底易析出少量结晶，在水浴中加温后即可全溶,不影响使用。五、 作用与用途：用于检测猪瘟疫苗免疫动物血清抗体效价。六、 用法与判定: 1、用法 11加稀释液 在血凝板上1排的110孔、第排的14孔和第孔;加稀释液0l/孔。 1稀释待检血清 待检血清使用前，需经过56水浴灭活3分钟，取待检灭活血清样品50l，分别加入反应板1排的第1孔中，与稀释液混匀后，吸取50l，加于第2孔中,
3、依次作2倍系列稀释至第1孔,第10孔混匀后取出0l弃去。 3稀释阳性对照血清 在血凝板的第排第1孔加阳性血清50l,2倍系列稀释至第10孔,混匀后从该孔取出50l丢弃。此时被检血清和阳性血清的稀释倍数依次为1:：02。 1.稀释阴性对照血清 在血凝板上的第8排第1孔加阴性血清50l,对倍稀释至第孔，混匀后从该孔取出5丢弃。此时阴性血清的稀释倍数依次为1:、1：、1：8。第57孔为稀释液对照,每孔仅加入50稀释液。 1.加血凝抗原血清稀释孔和稀释对照孔加血凝抗原（充分摇匀，瓶底应无血球沉淀)25l/孔。将反应板置微型振荡器上震荡23分钟或用手依次四边轻拍，直至血球分布均匀。封板膜封板,室温下静置
4、2小时判定结果,也可延至翌日判定。2、 判定以呈现“+”血凝反应的血清最高稀释度作为该血清的间接血凝抗体效价。血凝反应强度表示如下：“+” 红细胞全部凝集,形成一层均匀膜,布满整个孔底。“” 红细胞在孔底形成一层薄膜,面积比前者略小。“” 红细胞在孔底形成薄膜凝集，边缘松散或呈锯齿状。“” 红细胞在孔底呈稀薄、散在、少量凝集，孔底有小圆点。“” 红细胞沉于孔底,但周围不光滑或中心有空斑。“” 红细胞完全沉于孔底，呈光滑的圆点。当阳性血清抗体效价1：256、阴性血清抗体效价：8、稀释液对照孔无自凝现象时,试验成立。接种猪瘟疫苗的猪群免疫抗体效价:16为免疫合格。七、 注意事项：1为使您的实验获得
5、正确结果,请您在实验前仔细阅读本说明书；2.收到本试剂盒时,应立即打开包装，取出血凝抗原瓶，用力摇动，使粘附在瓶盖上的红细胞摇下,否则易出现沉渣,影响使用效果；3勿用9和130血凝板，严禁使用一次性血凝板,以免误判结果；4.严重溶血或严重污染的血清样品不易检测，以免发生非特异性反应；.每次检测只做一份阴性、阳性和稀释液对照；用过的血凝板应及时在水龙头下冲净血球。再用蒸馏水或去离子水冲洗次，甩干水分放3恒温箱内干燥备用。检测用具应煮沸消毒，37干燥备用。血凝板应定期浸泡在洗液中也可浸泡在%盐酸液内,48小时取出后清水冲净。内容总结（)猪瘟间接血凝抗体检测试验一、原理：用已知血凝抗原检测未知血清抗体的试验，称为正向间接血凝试验(HA)（2)4稀释液50m瓶,2瓶/盒(3)第57孔为稀释液对照，每孔仅加入50l稀释液（）判定以呈现“”血凝反应的血清最高稀释度作为该血清的间接血凝抗体效价（5)3.勿用9和130血凝板，严禁使用一次性血凝板,以免误判结果(6）检测用具应煮沸消毒，37干燥备用
