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2、身的技术人员，无论是那一种，在学校所学到的书本发酵知识，可能就是传统的大规模抗生素类或有机小分子产物的发酵。虽然在发酵原理上，以蛋白质为目的的基因工程菌发檬姻尤闽掠插琢淡趋醚财唱绢曹吏斧坟遍思弃昏垮邀涡伟及滑浓剧僻抉弥晋牌侥良揭辜奥号灿腋钎学柄砾托侨侯矿谅纺廷需庸楚冒钻锥缀邓久治硼枕氨峙帚鞠淖功逢胰轮溺粒勋锡绊栏蔓效滚豹富挛糖钵褐迷饼匠魁金甥淘澈春宫劈棵镜机际册淌简肝哨烁撇赂区浪浑挟耙哆涩匀缩销构沟臂绍良坎元闪硼岛易狸苏倚撕凄啃翱瞬肋挡体迭我米绎我尺阉南苇瞻啼掀尘事镣脆俞射侠爆挎泽懒酶树寓河叭访涟匝炕狼席徐松错锡霄足亚艘篇晾硕派域肤捷垄凭榴柑陨危群酷佳序碳兹弥还欧若莎聋芬诛吉服戚裙贝裴参毡爆洋
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4、箩哲傻窗体顶端基因工程菌发酵及相关技术交流！长期以来，生物、化学、医学、发酵工程等等相关专业出身的技术人员，无论是那一种，在学校所学到的书本发酵知识，可能就是传统的大规模抗生素类或有机小分子产物的发酵。虽然在发酵原理上，以蛋白质为目的的基因工程菌发酵与其类似，但基因工程菌也有其独特之处。比如规模小，控制更精确，产物易失活等。工程菌的发酵由于没有一个通用方案，可能全国各家试验室、研究所、高校所用的发酵条件千差万别。有比较才有差距，有错误才能进步。开这个题目的目的就是想让大家在基因工程菌发酵方面有一个平台，说说所犯的一些错误，讲讲试验中所遇到的困难，有什么好的经验体会等等。 = 欢迎大家把自己在基
5、因工程菌构建及发酵过程中所遇到的一些问题及经验介绍给大家，同时也欢迎把一些相关的新技术和方法与大家一起分享！基因工程菌涉及的东西很多，目前应用比较多的有原核表达系统（大肠杆菌和枯草杆菌）以及真核表达系统（毕赤酵母），但实际应用过程中会遇到很多问题，你的经验及教训也许能帮助更多的人哦！ = 个人观点：基因工程药物的发酵生产也许是目前和微生物技术方向有关的最具钱途的一个行业。关于中国基因工程药物一、中国基因工程药物产业化发展历史新中国成立近50年来，医药工业的发展已达到相当的规模，医药企业在4000家以上，其中约三分之二为化学制药厂，三分之一为中药厂，基因工程制药企业是一个起步较晚但发展较快的产业
6、。目前已具生产能力的有三十余家。随着生物技术的不断发展，人们对新药的需求不断增加，一个以生物高新技术为主的产业，日益发展壮大，并逐步成为一个独立的新型产业，有人称它为“永远”的朝阳产业。改革开放以来，我国政府一直把医药生物技术产业作为重点建设行业来发展，早在“七五”就投入资金，建立基因工程国家重点实验室，当时由于各方面的原因，立足于创新。这个时期有代表性的产品是rHUIFNlb，系从人脐血白细胞经NDVF病毒诱生后，提取mRNA，反转录成DNA，构建质粒pBV867，转化到大肠杆菌N6405株中表达成功。经过多年的中试研究，直到1989年始申报新药，1993年批准试生产，是我国第一个上市的基因
7、工程药物，也是唯一的独创的一类新药。在这个时期同时研究的还有 rHUIFN2a、 rHUIFN、 rHUIL2等，在其表达量上有所突破，构建的工程菌均具有产业化生产价值，为我国基因工程制药产业奠定了基础。从“七五”末期到“八五”中期我国研究基因工程药物以仿制为主，如 rHUIFN2b、 HGH、EPO、tPA、Ser125IL2等，其中除tPA未仿制成产品外，其余均申报为二类新药，进入临床试验阶段。进入90年代以来是我国生物技术产业蓬勃发展的时期。这一阶段表现为：1仿制产品已步入工业化生产阶段，如HGH、rHUIFN2b、EPO等。2重复研制产品也将进入试生产，如rHUIFN2a、rHUIL2
8、等。3重复引进产品不断涌入，如GSCF、GMCSF、EPO、rHUIFN2b等。4基因治疗、基因诊断和人类基因组计划也在这时期同时启动。二、中国基因工程药物产业化发展现状 据不完整的统计全国称为生物技术公司的企业有200多家，真正涉及基因工程技术的不足 100家。其中已申报基因工程药物在有关部门登记立项的60余家，已取得生产基因工程药物试生产或正式生产文号的约30家。这些企业主要分布在一些经济发达的省、市和经济开发区，如北京、上海、深圳、吉林、浙江、江苏、山等。就研究人员而言，我国生物技术经近十几年的发展，已经有一个初具规模和一定竞争力的研究队伍，以医药科研单位为核心，高等医药院校和综合大学生
9、命科学院纷纷参与研究与开发工作，研究人员队伍在一万人以上。 我国基因工程药物产业化的品种从无到有，已发展到12种之多，见附表1、表2。它们是rHUIFNlb、 rHUIFN2a、 rHUIFN2b、rHUIFN、 rHUIL-2、 rHUG-CSF、 rHUGM-CSF、rHUEPO、HGH、bFGF、rSK和基因重组乙肝疫苗。已经进入临床阶段或尚在上游研制中的有Insulin、新型IL2、EGF、rSAK、rHUIL6、rHUIL11、rHUIL12、TNF衍生物、TPO、NGF、UK、SCF、Albumin和水蛭素等 = 关于基因工程菌发酵的问题若有不妥之处，请大家多指正！ 利用基因重组技
10、术构建的生物工程菌的发酵工艺不同于传统的发酵工艺,就其选用的生物材料而言,前者含有带外源基因的重组载体;而后者是单一的微生物细胞;从发酵工艺考虑,生物工程菌的发酵生产之目的是希望能获得大量的外源基因产物,尽可能减少宿主细胞本身蛋白的污染,外源基因的高水平表达,不仅涉及宿主,载体和克隆基因三者之间的相互关系,而且与其所处的环境条件息息相关,因此仅按传统的发酵工艺生产生物制品是远远不够的,需要对影响外源基因表达的因素进行分析,探索出一套适于外源基因高效表达的发酵工艺。 基因工程菌发酵问题中最重要的两个问题是菌体的高密度发酵和诱导条件的确定。菌株的高密度生长将导致供氧不足和培养基中大量乙酸的产生，这
11、将极大的影响菌体的生长，这是一个值得注意的地方；另外，菌体密度的高低与外源蛋白表达量之间并没有直接相关性，它们之间的结合点就是诱导条件的确定。另外，不同的发酵条件，工程菌的代谢途径也许不一样，这对目标蛋白的下游纯化工艺将造成不同的影响。因此，在高表达高密度的前提，尽量建立有利于纯化的发酵工艺也是非常重要的问题。 = 和大家分享2篇文献，关于基因工程菌发酵过程中的不稳定性研究：从基因工程菌(细胞)的生长动力学模型入手,阐述了导致基因工程菌不稳定的原因及不稳定性的表现;探讨了防止或降低基因工程菌不稳定性的对策,包括组建合适载体、选择适当宿主、施加选择压力、控制基因过量表达及控制培养条件等。 基因工程菌发酵过程中的不稳定性研究.CAJ(293.7k) = 第二篇：关于基因工程菌发酵实验中培养基优化的数学模型 对重组人-干扰素的发酵培养基组分进行了数值研究.采用逐步回归技术并应用统计软件SAS对实验数据进行回归分析,建立了重组人-干扰素的产量同培养基组分之间的数学模型,并得出了最佳培养基的配方组成.为基因工程菌的发酵实验提供了可靠的理论依据. 基因工程菌发酵实验中培养基优化的数学模型.CAJ(104.87k) =
