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1、基因工程一、考点分析知识内容等级要求1、基因工程的原理及技术A2、基因工程的应用B3、蛋白质工程A【学习方案】活动一 难点突破难点1：熟悉基因工程中目的基因获取方法及比较1、逆（反）转录法：模板mRNA的来源：在生物体内，只能在特定细胞的细胞质中获得需要的mRNA，如生长激素mRNA只能在动物的 细胞质中获得，原因是 经逆转录形成的目的基因结构是不完整的，缺少基因的哪些结构，这些结构有什么作用？ 2、PCR：下面是PCR过程示意图：PCR的原理是 。图中“酶”的特点是 。引物的设计是PCR的关键之一，引物是一段含有2030个脱氧核苷酸的单链DNA，引物序列越长，特异性越高，原因是 ，引物中G/
2、C含量一般在50%左右，G/C含量高，引物容易和模板结合，但如果过高，在变性阶段双链DNA不容易 。在一次PCR中需要加入两种引物，原因是 ，加入的两种引物上碱基不能发生互补配对，这是因为 。应用PCR技术主要实现了目的基因的扩增，若n表示扩增次数，N0表示向反应系统中加入的模板DNA数量，N表示扩增获得的DNA总数，试建立扩增次数与DNA总量之间的公式模型 。难点2、限制性内切酶的选择一个环状DNA在受到不同的酶切割之后形成大小不同的片段，电泳之后形成的条带见下图，请将各酶切位点在环状DNA中标注出来。例1、限制酶是一种核酸内切酶，可识别并切割DNA分子上特定的核苷酸序列。下图为四种限制酶B
3、amH、EcoR、Hind 和Bgl的识别序列和切割位点切割出来的DNA黏性末端可以互补配对的是ABamH和EcoR BBamH和Hind CBamH和Bgl DEcoR和Hind 例2、下列有关限制性内切酶识别的叙述，不正确的是A从反应类型来看，限制性内切酶催化的是一种水解反应B限制性内切酶的活性受温度、pH的影响C一种限制性内切酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列D限制性内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小例3、已知正常的珠蛋白基因(以A 表示) 经Mst限制酶切割后可得到长度为1.15 kb 和0.2 kb 的两个片段(其中0.2 kb 的片段通常无法检测到)
4、，异常的珠蛋白基因(以S 表示)由于突变恰好在Mst限制酶切割点上，因而失去了该酶切位点，经Mst限制酶处理后只能形成一个1.35 kb 的DNA 片段，如图1；现用Mst限制酶对编号为1、2、3 的三份样品进行处理，并进行DNA 电泳（电泳时分子量越小扩散越快），结果如图2，则1、2、3 号样品的基因型分别是(以A、S表示相关的基因)难点3、载体的构建、目的基因的检测与鉴定例4、下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是A需要限制酶和DNA连接酶 B必须在细胞内进行C抗生素抗性基因可作为标记基因 D启动子位于目的基因的首端例5、（多选）科学家为了研究抑制基因表达的机制，在基因启动子后插入
5、一段颠倒的转录区序列（如图所示），导致新基因转录形成的mRNA因分子内部形成互补区而失去功能。该操作A需要限制性内切酶和DNA连接酶B在细胞外实现了人工基因突变C干扰了基因表达中的翻译过程D转录形成的mRNA分子内部靠AT、CG配对形成互补区例6、用含抗四环素基因的质粒将大肠杆菌改造成工程菌，生产鼠的珠蛋白，相关操作不合理的是A利用反转录技术获得珠蛋白基因B用含抗四环素基因的质粒构建基因表达载体C用Ca2+处理有四环素抗性的大肠杆菌使其变成感受态D用含有四环素的培养基筛选导入重组质粒的工程菌活动二 热点检测 例6、（2010年江苏生物）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图l、图2中箭
6、头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：（1）一个图1所示的质粒分子经Sma 切割前后，分别含有 个游离的磷酸基团。（2）若对图中质粒进行改造，插入的Sma酶切位点越多，质粒的热稳定性越 。（3）用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Srna 切割，原因是 。（4）与只使用EcoR I相比较，使用BamH 和Hind 两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 。（5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入 酶。（6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了 。（7）为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在 的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。例7、下图是乳腺生物反应器的培育过程，请思考：（1）图示过程涉及的主要涉及的现代生物技术有 。（2）不同基因拼接运用的工具酶是 ，由两个基因形成“融合基因”的变异类型是 。（3）外源蛋白基因与乳腺特异性表达的调控基因（乳蛋白基因）拼接的目的是 。（4）融合基因导入受精卵前必需的操作是 ，其目的是 。（5）卵母细胞常用的采集方法有 ，进行卵母细胞培养的目的是 。（6）早期胚胎培养的目的 。移植胚胎的发育时期 。（7）对受体母畜进行同期发情处理的方法是 ，其目的 。（8）为获得更多的转基因动物，可以利用 技术，这一技术的原理是 。1
