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1、郭静 1611210748 北大深圳医院 一概念：膜片钳技术是一种通过微电极与细胞膜之间形成紧密接触 的方法，采用电压钳或电流钳技术对生物膜上离子通道的电活动(尤 其是可对单通道电流)进行记录的微电极技术。二应用：在一个细胞上检测多种离子通道用于离子通道电生理特性的研究 研究受体及第二信使对通道活性的作用 生理、药理机制研究中的应用三常用的记录形式：(1) 细胞贴附式：高阻封接后的状态即为细胞贴附式模式，是在细胞 内成分保持不变的情况下研究离子通道的活动，进行单通道电流记录 即使改变细胞外液对电极膜片也没有影响。(2) 膜内面向外式 ：在细胞贴附式状态下将电极向上提，电极尖端 的膜片被撕下与细
2、胞分离，形成细胞膜内面向外模式。此时膜片内面 直接接触浴槽液，灌流液成分的改变则相当于细胞内液的改变。可进 行单通道电流记录。此模式下细胞质容易渗漏，影响通道电流的变化， 如 Ca2+ 通道的 run-down 现象。(3) 全细胞式记录：在细胞贴附式状态下增加负压吸引或者给予电压 脉冲刺激，使电极尖端膜片在管口内破裂，即形成全细胞记录模式。 此时电极内液与细胞内液相通成为和细胞内电极记录同样的状态，不 仅能记录一个整体细胞产生的电活动，并且通过电极进行膜电位固定，也可记录到全细胞膜离子电流。这种方式可研究直径小于20m m以 下的小细胞的电活动；也可在电流钳制下测定细胞内电位。 膜外面向外式
3、（outside-out mode）：在全细胞模式状态下将电极向 上提，使电极尖端的膜片与细胞分离后又粘合在一起，此时膜内面对 电极内液，膜外接触的是灌流液。可在改变细胞外液的情况下记录单 通道电流。四全细胞膜片钳的记录过程：1. DRG 神经元的急性分离2. 玻璃微电极的制备3. 计算机操作（1）打开膜片钳放大器（2）打开计算机，进入 Patchmaster 操作界面。（3）单击“store”，选择好文件名和保存路径，单击“save”（4）单击“current clamp”，编辑所需的刺激模式。4. 巨阻封接形成（1）玻璃微电极内灌注细胞内液（1/3-1/2 即可，不要有气泡）。将 微电极固
4、定在holder，然后安装到膜片钳探头上。（2）在电极内施以正压（推23ml气体）后电极入水，补偿LJ液间 电位，辅助吸气负压抽吸，形成高阻封接（电流波形变平坦）后，进 行快电容补偿。继续负压破膜，形成全细胞状态。（3）进行慢电容补偿，形成全细胞电压钳模式。（4）串联电阻补偿至少 70%以上。5. 实验记录（1）电流钳模式：将神经元钳制在OPA,记录静息电位，此后观 察细胞自放电情况。记录一系列去极化电流（5PA， 100ms），直至诱发出第一个动作电位，记录去极化电流阈值，动作电位爆发阈值，动作电位幅度等。（2）电压钳模式：将电压钳制在-70mV （静息电位平均值），记录电 压门控离子通道的电流或者配体门控离子通道电流5.实验结束（ 1）退出 Pluse 软件，关闭膜片钳放大器。（2）关闭计算机系统及其它设备。
