内皮细胞的培养

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1、内皮细胞的培养内皮细胞，用高倍镜观察肠系膜上的毛细血管，可见到内皮细胞，内皮细胞较间皮细胞 小，排列紧密。内皮细胞或血管内皮是一薄层的专门上皮细胞，由一层扁平细胞所组成，呈 多边形，细胞的边缘呈锯齿状，相互嵌合。血管内皮细胞(EC)位于血液与血管组织之间， 它不仅能完成血液和组织液的代谢交换，并且能合成和分泌多种生物活性物质，以保证血管 正常的收缩和舒张，起到维持血管张力，调节血压以及凝血与抗凝平衡等特殊功能，进而保 持血液的正常流动和血管的长期通畅。抗凝血材料表面内皮细胞化，可以减少血栓的形成和 血小板激活。下面以脐带静脉为例介绍内皮细胞的培养：一、试剂准备：(1 )脐带保存液：生理盐水、葡

2、萄糖100 mmoL/L、100 U/ml 青霉素一 100 U/m1 链霉素。(2) 组织消化液：0. 1% I型胶原酶和0. 05%胰酶-0. 02%乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA) 溶液。(3) 内皮细胞培养液：含20%胎牛血清、ECGS、肝素，100 U/m1青霉素-100 U / ml链 霉素的 M199 培养基。(4) 器皿： 0. 2% 明胶包被：用 PBS 配制。二、原代提取(1) 脐带处理：在无菌条件下取新生胎儿脐带，长度20 cm。剪去脐带两端和脐带上有夹 痕及血肿部分，尽量挤干净脐带内血液。用生理盐水冲洗脐带表面至无血色。(2) 脐静脉处理：用输血器内接有穿刺器的软管，找到

3、脐静脉，将软管针头一端插入脐静 脉，用止水夹固定，另一端接 20 m1 注射器，吸取 PBS 反复冲洗脐静脉直至无血色液体流 出为止。(3) 组织消化：将脐带另一端用止血钳夹闭，向脐静脉中灌入0. 1% I 型胶原酶溶液，使 之充盈，夹闭软管，37C水浴中孵育20 min,其间轻轻挤压并旋转脐带，以使酶溶液充分 接触血管内壁，然后将细胞一酶溶液收集于预先装有温培养液小三角瓶中。(4) 收集细胞：用2 倍于消化液的温 PBS 冲洗脐静脉，一并收集于小三角瓶中，将细胞悬 液装入 10 ml 离心管，(5) 离心培养：1 000 r / min离心10 min，弃上清，吹打悬浮，再次离心10 min,重悬细 胞并接种于铺有明胶的 25 cm2 培养瓶中，置于 37C 5% C02 饱和湿度培养箱中培养， 24 h 后更换培养液，以后每隔2 d 换液 1 次。