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1、南京大学 医学系实验报告题目：酵母RNA的提取姓名：彭睿 学号：L日期：2019年3月29日（一）实验目的：掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。（二）实验材料： 市售酵母粉、冰醋酸、无水乙醚、95%乙醇溶液、氢氧化钠溶液（%）（三）实验原理： 电子天平、水浴锅、冷冻离心机、离心管、玻璃棒、抽滤瓶、砂芯漏斗、烧 杯、量筒、广泛pH试纸（四）实验原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解度不同，可 将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原 性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。在碱性条件下，还原糖将3,5-二硝基水杨酸还原为3-氨基-5-硝基水杨酸
2、（棕 红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它产物，在一定范围内，还原糖的量 与棕红色物质深浅的程度呈一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物 质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含 量。此外，多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加 入的水量，测定所得的总糖量乘以 即为实际的总糖量。（五）实验步骤：1. 样品中总糖的水解、提取：称取g山芋粉，加蒸馏水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入锥形瓶，并用约 12ml蒸馏水冲洗，转入锥形瓶中。加入盐酸溶液（6mol/L）约10ml，用沸水浴水解。取1-2滴用碘-碘化钾溶 液检测是否已水解完全，如不显蓝色
3、，则冷却到室温用氢氧化钠溶液中和至 中性，全部转移至100ml容量瓶中。用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液15ml，再定容至100ml。如果取出1ml 总糖水解液，则含量稀释667倍。2. 葡萄糖标准曲线的制作与样品总糖的测定： 此时取9只干净的试管，如表所示进行操作。管号试剂012345678标准葡萄糖溶液/ml00.20.40.60.81待测总糖水解液/ml110.5蒸馏水/ml10.80.60.40.20000.5DNS试剂/ml222222222沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却到室温。蒸馏水/ml999999999葡萄糖含量/mg00.20.40.60.81表 1：标准
4、曲线的制作其中，0 号管为比色时的参照，1-5号管用于制作葡萄糖标准曲线，6-8 号管用于总糖水解液的测量。（六）实验数据：-.管号 试剂012345678标准葡萄糖溶液/ml00.20.40.60.81待测总糖水解液/ml110.5蒸馏水/ml10.80.60.40.20000.5DNS试剂/ml222222222沸水浴中准确煮沸5min，取出，用自来水冷却到室温。蒸馏水/ml999999999葡萄糖含量/mg00.20.40.60.81540nm00.0830.1940.3070.4650.5960.2840.2830.12表2： 540nm处实验数据系实验报告图 1：数据原表葡萄糖标准曲
5、线图 2：拟合曲线根据计算，6、7号管的葡萄糖含量为，8 号管为。根据I .，计算得本次山芋粉的总糖含量为。（七）实验结果与讨论：1. 在实际操作的时候，部分组获得的 6-8 号管显色太浅。本组调整了稀释倍数 进行测量，在初次定容后取了 15ml 水解液，并获得了良好的结果。2. 为什么显色时，要准确煮沸五分钟：因为反应程度不同可能影响显色深浅， 所以所有试管的加热时间要保持相同。3. 关于移液枪的使用，要注意容量在最大量程时是最准的，不同的移液枪，因 为损耗原因，可能精度不同，对于枪头液体的量和自己想要量取的量要有预 估。在线性预测的时候，本组 一开始没有将起始点加入，加入后发现线性关系良好，未对曲线的斜率、截距等 造成影响。 精心搜集整理，只为你的需要4.
