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1、长春工业大学毕业论文摘 要中国林蛙，属于两栖类珍稀动物。中国林蛙以其独特的营养价值与药用价值日益受到人们的重视，是蛙类中最有经济价值的一种。林蛙富含多种氨基酸、激素、微量元素和维生素等营养成分，在药用、滋补和美容等方面都具有非常高的利用价值。 林蛙皮是摘取林蛙油后作为饲料或废弃物的物质。本研究立足于中国林蛙资源丰富以及蛙皮中含有大量生物活性物质这一优势，以干燥的林蛙皮为原料，用不同方法对林蛙皮进行胶原蛋白提取试验，利用羟脯氨酸比色法比较了几种方法的提取效果，得出最佳的提法方法，并通过单因素试验及正交试验对最佳提取方法进行优化。结果表明：酸法浸提是从林蛙皮中提取胶原蛋白的最佳方法，液料比为20:
2、1，利用0.1mol/L柠檬酸在37下浸提48h为最佳工艺条件。关键词：林蛙皮；胶原蛋白；方法比较；最佳工艺AbstractRana chensinensis, belongs to the amphibian of rare animals. The rana chensinensis has been paid increasingly attention by people with its unique nutrition value and medicinal value, and becomes one of the frogs which have most economic v
3、alue. Rana is rich in amino acids, hormones, trace elements, vitamins and other nutritions, and has very high value in the use of pharmaceutical, tonic, cosmetic and other aspects. Rana skin is gathering after rana oil as feed or waste material. This study bases on the advantage that rana chensinens
4、is resources are rich and rana skin contains a lot of biological active substance, with dry rana skin as raw materials, using different methods to the extraction test by rana skin collagen, then compared several methods of extraction effect by hydroxyproline colorimetric method to get the best extra
5、ction method，and through the single factor experiment and orthogonal experiment, the best extraction method is optimized. The results show that: acid extraction is the best method of collagen protein extracted from the frog skin, liquid to solid ratio 20:1，using 0.1 mol/L citric acid in 37 soaks rai
6、ses 48h is the best technological conditions. Key words: Rana skin; collagen protein; comparison of methods; best technological conditions 目 录摘 要IAbstractII目 录III第一章 前 言1第二章 文献综述22.1 林蛙皮32.1.1 林蛙皮的功能32.1.2 林蛙皮中胶原蛋白52.1.3 林蛙皮研究现状和应用前景62.2 胶原蛋白72.2.1 胶原蛋白的结构72.2.2 胶原蛋白的功效82.2.3 胶原蛋白的应用112.2.4 胶原蛋白的发展趋
7、势132.3 胶原蛋白的提取方法142.3.1 酸法142.3.2 碱法142.3.3 酶法142.3.4 盐法142.3.5 热水法152.4 本论文的研究内容及研究意义15第三章 实验部分163.1 材料与设备163.1.1 原材料163.1.2 主要仪器163.1.3 主要试剂163.2 林蛙皮中提取胶原蛋白试验方法173.2.1 胶原蛋白的提取工艺方法173.2.2 对二甲氨基苯甲醛法测定林蛙皮中胶原蛋白的含量173.3 结论与讨论193.3.1 羟脯氨酸标准曲线的绘制193.3.2 胶原蛋白提取的试验结果比较与讨论203.4 最佳提取方法的工艺优化213.4.1 酸法提取溶剂的选择2
8、13.4.2 单因素试验223.4.3 正交试验25第四章 结论与展望274.1 结论274.2 展望27致 谢28参考文献2931长春工业大学毕业论文第一章 前 言 中国林蛙（Rana chensinensis），是我国山区，尤其是东北山区，包括长白山脉、小兴安岭大部、张广才岭腹地，纯野生动物，亦被称作哈什蚂（哈士蟆）。其与蛤蟆、田鸡完全是非同原动物。唯中国仅有，已被列为易危物种。是集药用、食补和美容功能于一体的珍稀两栖类动物1。中国林蛙凭借其特有的营养价值与药用价值日益受到人们的重视，成为蛙类中最有经济价值的一种。在各地所产的林蛙中，以东北地区的林蛙体格大、产油率高、体制健壮、繁殖率高而成
9、为林蛙中的极品。中国林蛙富含18种氨基酸、4种激素、13种微量元素和9种维生素2，在药用、滋补和美容方面都具有非常高的利用价值。林蛙的营养价值比较高，俗称“大补品”。由于其主要以昆虫类为食，因此又称“农林卫士”和“纯绿色食品”，在近些年市场上显现出了巨大的商机。 中国林蛙皮中含有丰富的胶原蛋白资源。胶原蛋白富含除半胱氨酸和色氨酸外的18种氨基酸，其中有7种是维持人体生长所必需的氨基酸，在胶原蛋白中甘氨酸占30，而脯氨酸和羟脯氨酸含量共占约25，是各类蛋白质中含量最高的，此外，丙氨酸和谷氨酸的含量也都比较高2，同时胶原蛋白还含括了一般蛋白质中极少见的羟脯氨酸和焦谷氨酸以及在其他种类蛋白质中几乎不
10、存在的羟基赖氨酸。有资料报道：胶原蛋白肽可以被人体主动且无障碍吸收3。由此可见，胶原蛋白具有十分丰富的营养。 本课题立足于中国林蛙资源丰富以及蛙皮中含有大量生物活性物质这一优势4，以干燥的林蛙皮为原料，对从林蛙皮中提取胶原蛋白相关提取方法比较做重点研究。目前广泛采用的提取胶原的方法主要分为酸法、碱法、酶法、盐法以及热水浸提法5类。本课题以干燥的林蛙皮为原料,研究其胶原蛋白的酸法、碱法、酶法、盐法及热水法提取工艺条件,对比不同提取方法提取得到的胶原得率，比较出最佳的胶原提取方法，并通过单因素试验及正交试验对最佳的提取方法进行优化，从而得出最佳的工艺条件。第二章 文献综述 中国林蛙（Rana ch
11、ensinensis），俗称哈什蟆，在分类上属于两栖纲、无尾目、蛙科、蛙属2，主要分布在中国东北山区，包括长白山脉、小兴安岭大部等地，是纯野生动物，为国家二级保护动物1。中国林蛙与蛤蟆、田鸡完全是非同原动物。近年来由于过量捕获，林蛙已被列入中国濒危动物红皮书，为易危（v）物种1。中国林蛙是集药用、食补和美容功能于一体的珍稀两栖类动物。中国林蛙凭借其特有的营养价值与药用价值日益受到人们的重视，成为蛙类中最有经济价值的一种。在各地所产的林蛙中，以东北地区的林蛙体格大、产油率高、体制健壮、繁殖率高而成为林蛙中的极品。中国林蛙富含18种氨基酸、4种激素、13种微量元素和9种维生素，在药用、滋补和美容方
12、面都具有非常高的利用价值2。林蛙的营养价值比较高，俗称“大补品”。林蛙全身是宝：这其中林蛙皮是高级制革业的主要原材料；林蛙卵中富含卵磷脂和性激素；林蛙肉凭借其低脂肪、高蛋白的特性可加工成高级保健品5；林蛙雌蛙输卵管的干燥物即林蛙油，又称哈什蟆油，是极其珍贵的药材6。哈什蟆油是我国医学中记载使用的滋补强壮之药物，有补虚、增精、解毒、退热、消肿、润肺、益肝肾、健脾胃之功效，可治疗神经衰弱、失眠眩晕、脾胃虚弱、体弱气虚、咳嗽肺虚、创痛肿毒、水肿腹胀、肝炎和疮疾、肺结核等疾病2。此外，提取到林蛙油后的副产品，如骨骼、内脏、肌肉等也可作为毛皮动物的饲料，又可浸泡后入药。林蛙除了药用、美容、保健、饲料价值
13、外，在中国东三省和广东、台湾及东南亚等地又被人们充分的认可，具有纯天然的绿色的药用和食用价值，因而，具有广泛的消费市场。 中国林蛙中雌蛙体长约为75mm左右，雄蛙体长较小；林蛙的头部很发达，位于身体的前端，背面观呈三角形，扁而宽，头长路小于头宽，头长与体长相比较，为体长0.32-0.38倍；林蛙的口宽阔，位于吻端腹面，吻尖，向前突妯，略长于下颌，吻端上方有一对外鼻孔，其上有瓣膜，可随时开闭，以控制气体进出，头两侧有大而凸出的眼，眼有上下眼睑，下眼脸的上方有二层折叠的眼睑，可以上下移动遮着眼球以适应陆地生活，两眼后方各有一圆形鼓膜、遮着鼓室并传导空气中声波产生所觉；雄蛙在鼓膜后的两侧各有一个声囊
14、；林蛙的躯干部自颈椎部起至体后端正中部分，即鼓膜之后为躯干部，是身体各部分中最大的一段，短而宽，躯体腹部较膨大，雌性比雄性大，没有明显的颈部，末端有二个泄殖腔孔，为泄殖腔的开口；林蛙的前肢由上臂、前臂、腕、掌、四指组成，短而细，上臂部与手部长度相比，上臂略短于手长，指瑞无爪并钝圆，关节下瘤、趾基下瘤及内外掌突均明显，指间无蹼，指长顺序为3、1、4、2；前肢背面有3-4条环形黑斑，雄蛙第一手指内侧有一瘤状物为软婚垫；林蛙的后肢发达，由股、胫、跗、五趾组成，其长度为前肢的2.5-2.7倍，胫长超过体长之半，后肢拉直前伸，即胫跗关节前伸可超过眼部，伏卧时两后肢的脚跟部常相互重叠，膝部内侧有一明显的突
15、起；趾细而长，具五趾，第1脚趾很短，第4趾特长，为第1趾长的4倍，趾长顺序为4、5、3、2、1，趾间有蹼，很发达，呈薄膜状，蹼殊缘有浅凹，除第4耻外均达趾端，蹼膜宽顺序为5-4、4-3、3-2、2-1，后肢肌肉发达；因此，林蛙善于跳跃、游缺、攀登、爬行。2.1 林蛙皮2.1.1 林蛙皮的功能 中国林蛙皮在生命停止后，无论在水中泡或是烈日下晒，还是在阴干的地方存放，它的形体几十年不会变质、不会霉烂。冬季东北林蛙在河水冻成冰时，由于胸腹呼吸困难，因此可用皮肤进行呼吸，夏季在进入森林中，用皮肤从土地中、露水中吸水，其性格被堪称动物中典范。 (1) 林蛙皮的保湿功能 林蛙可以用皮肤呼吸并吸收水分，其机体具有完善的保湿系统，林蛙的某些组织中天然保湿因子含量较高，尤其是保湿因子的典型代表物透明质酸(Hyalu ronic acid，HA)的含量与牛眼玻璃体中HA的含量接近，而牛眼玻璃体中HA的含量是至今为止动物性原料中HA含量最高的。HA是目前世界公认的性能优越的保湿因子，其分子中的羧基和其他极性基团可与水形成氢键而结合大量的水，当含量低于0.1时，HA可结合其质量1000倍的水。这种天然保湿因子可使皮肤含水量增加，表皮角质层柔软，改善皮
