3,,5-二硝基水杨酸比色法测定糖的浓度.doc

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1、1在样品的总糖提取时,为什么要用浓HCl处理?而在其测定前,又为何要用NaOH中和?答:因为要先将它彻底水解成单糖。 因为还要加DNS 不中和会影响结果的。 DNS在碱性条件下与还原糖共热会发生2.标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什么要同步进行?答:时间差别大,吸光度会产生较大误差,虽然溶液在一定时间范围内是保持相对稳定的,但是分光光度计本身存在局限性,要求时间不能太长。3.比色测定的操作要点是什么?方法的基本原理是什么?答:操作要点:1.用相同型号的比色管。2.配制等体积的系列标准样品。3.配制待测样品(与标准样品等体积)。4.对比,找出相同的浓度。基本原理:基于被测溶液的颜色显色剂后

2、生成的有色溶液,其颜色强度和物质含量成比例。溶液中的物质在光的照射激发下,产生对光的吸收效应。4.72型分光光度计的原理及使用时的注意事项是什么?答:原理:72型分光光度计的基本依据是朗伯比耳定律,它是根据相对测量原理工作的,即先选定某一溶剂作为标准溶液,设定其透光率为100%,被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的,即让单色光分别通过被测试样和标准溶液,二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。注意事项:1.保持其干燥,且不能置于高温环境使用。2.定期使用,日常维护工作中要定期更换仪器的硅胶。3. 每次装入比色皿的溶液不要过满,一般装2/3即可,并在每次倒溶液时应小心操作,减少对进

3、光面的擦洗次数,以防进光面磨损而影响透过率。4. 分光光度计是计量仪器,必须定期检定或校准,若经修理后必须重新检定,经检定合格后方可使用。5.比色测定时为什么要设计空白管?答:减除溶液的差异,以便消除实验的误差。6.3,5-二硝基水杨酸比色法是如何对总糖进行测定的?答:黄色的3,5-二硝基水杨酸(DNS)试剂与还原糖在碱性条件下共热后,自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比,在波长为540nm处测定溶液的吸光度,查对标准曲线并计算,便可求得样品中还原糖的含量。再通过还原糖求出总糖含量。7.如何正确绘制和使用标准曲线?答:标准曲线应在坐标纸上绘制,横坐标轴距坐标纸底边1.5-2cm,标示出刻度和葡萄糖的毫克数;纵坐标轴距坐标纸左边1.5-2cm,标示刻度和光密度值;曲线为过原点的直线,测定点均匀分布在直线的两侧;标准曲线只能在测试条件完全相同的情况下,用于确定样品中的物质含量。对于重复的测定,应取吸光度的平均值查标准曲线;测定数据不应记在标准曲线上。8.糖测定过程中的干扰物质有那些?如何除去?答:具有还原性的物质。过滤除去9.在提取糖时,其他杂质是否会影响到测定?答:会,会影响到吸光度,所以先除出去杂质。

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