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1、白细胞显微镜计数法（一） 原理 取稀释酸溶液，将血液稀释一定倍数并破坏红细胞，滴入计数池，计数一定范围内白细胞数，然后换算成每升血中白细胞数。（二） 试剂 白细胞稀释液：冰乙酸1.0ml，加蒸馏水至100ml，再加10g/l亚甲蓝（或结晶紫）1滴，可使白细胞略着色，用时便于区别红细胞稀释液。（三） 器材1. 显微镜：普通生物显微镜。2. 微量吸管：吸管上刻有10和20ul两个刻度（误差+-1%）。微量吸管由于生产厂家不同，质量也不相同，但不论哪家产品，在使用前均需经严格校正，且应做到每位患者1支。3. 细胞计数板：计数板是用优质厚玻璃制成，每块计数板又分两个计数池。在计数池两侧各有一条支柱，与
2、计数池高度差是0.1mm。所以将一块平整的血细胞计数盖片放在两条支柱上时，盖片底面与计数池之距离为0.1mm。 目前国内通用的是改良Neubauer计数板。这类计数板中，每个计数池的边线长宽各为3mm，并被精密地刻划成9个大方格，每个大方格长宽各为1.0mm，其面积为1m。加盖玻片后的容积为1m0.1mm.其中四角上的大方格用单线划成16个中方格，作白细胞计数用；中央1大方格则用双线划成25个小中方格，每个小中方格又用单线划成16个小格，总计为400个小格。大方格每边长的误差是+-1%；盖片与计数池面之距离误差为+-2%。4. 白细胞盖片：这是特制的血细胞计数用盖片，要求表面光滑平整，两面平整
3、度为0.002mm以内，有一定重量，不被血细胞悬液浮起。其厚度应为0.40.7mm，通常大小为24200.6mm。盖片是否平整，可用光波干涉现象进行鉴定。其方法是：将盖片擦净后，平整放在标准平面平晶上，用日光灯照射，观察在平面平晶上所见到的干涉条纹，判断其是否合格。盖片在使用前应当用干净、柔软的吸水纤维制品拭净，特别注意勿让手接触使其污染，否则充液时易产生气泡。（四） 操作1. 取小试管（1275mm）一支，加白细胞稀释液0.38ml。2. 采指血20ul，吸入稀释液中，混匀。3. 用小滴管或点眼棒取少量混悬液，滴入计数池中，静止23min.4. 用低倍镜计数四角大方格的白细胞。计数时应按一定
4、顺序，对压线的白细胞应按数上不数下，数左不数右的原则计数。（五） 计算白细胞/L=四大方格白细胞数（N）/41010 620=N5/10010 9=N/2010 9/L式中：1/4标示平均一大方格中白细胞数。10表示10大方格内白细胞数。10 6表示1升稀释液中白细胞数。20为稀释倍数。血小板显微镜计数（一） 原理 利用能保护血小板的稀释液，将血液稀释一定倍数，滴入计数池，计数一定范围内血小板数，即可换算成每升血中血小板数。（二） 稀释液1. 草酸铵稀释液草酸铵 1.0gEDTA-Na2 0.012g蒸馏水 加至100.0ml配好后用数层滤纸过滤，清亮后使用。此液对红细胞破坏力较强，血小板形态
5、清楚。但只加草酸铵，不加EDTA盐，则易产生草酸钙结晶。2. 许汝和式稀释液尿素（AR或GR） 10.0g柠檬酸钠 0.5g甲醛溶液 0.1ml蒸馏水 加至100.0ml混合后过滤即可备用。此稀释液破坏红细胞完全，视野清晰，血小板清楚。但尿素易分解，可因室温升高和保存过久而失效。一般只能使用10d，4摄氏度冰箱中保存，可稍延长使用期。一次配量不宜过多。归纳血小板稀释液的成分包括抗凝剂，如柠檬酸盐、EDTA盐等；固定防腐剂，如甲醛等；溶血剂，如尿素、草酸铵等，以及等渗剂等。一种好的稀释液应具备：（1）能有效地防止血液凝固；（2）迅速固定血小板，防止其聚集和形态改变；（3）要求红细胞破坏完全；（4
6、）组成简单，易保存，不生长细菌。（三） 操作1. 取稀释液0.38ml，采末梢血20ul加入稀释液中，混匀，静置10min左右。2. 混匀后取出少许滴入计数池，在温室中静置1015min。3. 在显微镜下（低倍或高倍）计数中央大方格中5个小中方格（与红细胞同）的血小板数。（四） 5小中方格血小板数（N）5102010 6=N10 9/L（五） 注意事项1. 如血小板数过低，可计数25个中方格中的血小板数，结果200.2. 凡影响红白细胞计数的技术因素都应注意。3. 全部器材和稀释液应十分清洁。因为血小板形态不规则且细小，任何灰尘斑点都可给计数造成困难，甚至误认。4. 刺入皮肤深度要适当（23m
7、m）,血液应自然流出，避免挤压。动作要快，以防止血小板聚集。5. 如和血常规一起做，应先采血小板计数用血。6. 因血小板易聚集，所以滴入计数池之前应充分混匀，但又不能用力过度，以防止破坏血小板。7. 血小板在计数池中，完全下沉后方可计数。沉积时间短，结果偏低。但过长，计数池中稀释液容易蒸发，尤其是夏季。所以最好将计数板放入温室中。8. 用尿素稀释液，一般应在1h内计数完毕，放置时间过长，计数结果偏低.（六） 质量控制 血小板计数质控较难，但应按操作规程，并认真参照注意事项，减少血小板聚集，破坏，排除干扰，切实辨认血小板形态，减少误认。此外，还可根据经验进行质控，即在血片上观察血小板与红细胞密度比例，估计血小板数量。根据陈缃介绍：梅10个油镜视野血小板之和乘以2000，约为每微升血中血小板数。
