实验二 革兰氏染色法

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1、实验二 革兰氏染色法【实验目的】1. 学习并初步掌握革兰氏染色法。2. 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。3. 巩固显微镜油镜的使用方法。【实验仪器、材料】1. 菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌菌液。2. 染色剂：革兰氏染色试剂盒（结晶紫染色液、碘液、脱色液（95% 乙醇）、复红染液）。3. 仪器及其他物品：显微镜、香柏油、无水乙醇、载玻片、擦镜纸、滤纸、酒精灯、 试管架、废液缸、记号笔、接种环、镊子、打火机等。【实验内容】革兰氏染色法一、染色标本制备1. 涂片 取一张洁净的载玻片，滴加少许生理盐水，用无菌操作方法 从试管中沾取菌液一环，与生理盐水研磨均匀，做一薄而均匀、直径

2、约 1cm 的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。（事先在载玻片的反面滴 加菌液的相应位置做好标记）2. 干燥 于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干 燥。（温度不宜过高）3. 固定 目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常 用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3 次，以热而不烫为宜， 防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。二、染色1. 初染滴加结晶紫覆盖菌膜，染lmin，自来水缓缓冲洗，甩去积水。2. 媒染滴加卢氏碘液，染lmin，水洗，甩去积水。3. 脱色 滴加95%乙醇数滴，20s30s，见紫色脱下立即用水冲洗，甩 去积水。4. 复染滴加石炭酸复红液，染lmin，水洗，甩去积水，标本片用滤 纸吸干。三、镜检 待染色片充分干燥后，用油镜观察。【实验结果】 葡萄球菌呈葡萄状排列，呈紫色，为革兰氏阳性菌； 大肠杆菌为散在的短小杆菌，呈红色，为革兰氏阴性菌。【结果分析、讨论（结论与评价）】注：分析你的染色结果是否正确？如果不正确，请分析原因