唾液淀粉酶最适pH的测定

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1、唾液淀粉酶最适 pH 的测定摘要】酶是具有高效催化能力的生物大分子物质,底物浓度相同时,酶的催化活性主要受 温度、pH值等因素影响。温度一定时，酶活力最高时的pH值为该酶在该温度的 最适pH。在不同pH值下，通过测定淀粉酶水解底物的程度，测定唾液淀粉酶的最 适 pH 值。在不同 pH 条件下,淀粉被唾液淀粉酶水解,与碘液反应呈现颜色反应, 通过对颜色的观察和分光光度计测量产物吸光值的大小,可知底物的反应程度,从 而可以判断出唾液淀粉酶的最适 pH。Enzymes are highly efficient catalytic ability of biological macromolecula

2、r material, phase at the same time, initial concentration of enzyme catalytic activity was mainly affected by factors such as temperature, pH value. At a certain temperature, the highest enzyme activity of enzyme in the pH value of the temperature of the optimum pH.Under different pH, by measuring t

3、he degree of hydrolysis enzyme substrates, determination of salivary amylase optimum pH value. Under the condition of different pH, starch is saliva amylase hydrolysis, and iodine liquid reaction to colors, through the observation of the color and the size of the spectrophotometer absorbance value m

4、easurement products, shows the reaction degree of substrates, which can determine the optimal pH of salivary amylase. 【关键词】唾液淀粉酶、最适pH、碘-淀粉比色法【引言】新陈代谢是生命活动的基础。这一过程是有许多酶促反应所组成。由于有了酶这 一高效催化剂，使生命赖以存在的许多化学反应能在生理条件下迅速完成。可以 说，生命之大厦是建筑在酶作用的化学过程之上的。目前所知，临床上不少的先 天性及遗传性疾病是由于酶的异常所致，而许多其他疾病过程又伴随着酶的改变。 因此，酶学的研究在生

5、化领域及临床医学上均具有重要的理论及实践意义。为了测定人唾液淀粉酶的最适pH，我们实验小组设计了以下实验。【正文】一、实验目的测定人唾液淀粉酶的最适pH；解pH对酶活力的影响二、实验原理影响酶反应活力的因素很多，影响胞外酶的因素主要包括PH值、温度和金属离 子、抑制剂及其他小分子，以及酶浓度等因素。pH 值对酶反应活力的影响：酸或碱可以使酶的空间结构破坏，引起酶的活力丧 失，这种丧失活力可以是可逆的或者是不可逆的，对可逆的来说，改变PH值后 可使活力恢复。三、实验器材电热恒温水浴锅，试管20 支,试管架，小烧杯，移液管(1mL, 2mL, 5mL, 10mL), 洗耳球， 722 型分光光度计

6、等。四、实验材料1. 2.5g/L 淀粉溶液 100mL； 2. 0.2mol/L Na2HPO4 溶液 200mL； 3. 0.2mol/L NaH2PO4 溶液 200mL； 4.0.01mol/L 碘应用液取碘贮存液，用蒸馏水稀释 10 倍，贮于棕色瓶； 5. 蒸馏水； 6.人的唾液。五、实验步骤1.不同 pH 缓冲液的配制磷酸缓冲溶液配制表（用量：ml）试管12345678pH5.86.06.26 .46.66.87.07.2Na2HPO40.400.620.931.331.882.453.053.60NaH2PO44.604.394.083.683.132.551.951.40H2O

7、5.005.005.005.005.005.005.005.00唾液的获取蒸馏水漱口 12次，然后含一大口水约1min,期间做咀嚼运动，然后收集至杯 子中。3.酶液稀释倍数的确定酶稀释倍数（用量： ml）试剂12345稀释倍数510152025酶液1.00.50.40.250.2H2O4.04.55.64.754.8另取试管各取配好的稀释液 0.1ml 于试管管号123456稀释倍数510152025稀释液0.10.10.10.10.1pH=7.0缓冲液0.90.90.90.90.90.92.5g/L 淀粉0.50.50.50.50.50.5唾液0.10.10.10.10.10.1混匀，观察颜

8、色变化，并选择颜色变化适中的 2 号管，记录其稀释倍数为 10 倍。 故我们组选择了稀释 10 倍的唾液继续试验。4.淀粉用量的确定（用量：ml）试剂1234空白pH=7.0 缓冲液0.90.90.90.90.92.5g/L 淀粉0.10.20.30.40.0唾液（稀释10倍）0.10.10.10.10.1混匀，37 C水浴 7.5min,然后向每管加 1 滴碘液H2O5.95.85. 75.66.0混匀，按颜色由浅至深排列，并选择颜色深浅适宜的试管 1，记录酶用量 0.2ml。5.最适 pH 的确定用量： ml）编号1234567PH试剂6.06.26.46.66.87.07.2PH 缓冲液

9、0.90.90.90.90.90.90.92.5g/L 淀粉0.20.20.20.20.20.20.2唾液稀释液0.10.10.10.10.10.10.1混匀，37 C水浴 7.5min.然后向每管加 1 滴碘液。h2o6.06.0 6.06.0 6.0 6.06.0混匀，用一号管调零，测定A66 Onm。以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管中溶液的吸 光度 A 值，记录数据。A660nm0.006 0.018 0.016 0.013 0.003 0.022 0.042六、数据处理以 A660 为纵坐标， PH 值为横坐标，作最适 pH 曲线:唾液淀粉酶PH-A660图PHOPOA七、实验结果

10、本次实验中，在pH值6.08.0范围内吸光度值随pH的增大先减小，根据图表， 吸光度A值最小是唾液淀粉酶pH值为6.8时，即本次实验所测唾液淀粉酶的最 适pH值是6.8，与其它化学文献中正常人体内唾液淀粉酶pH值相符。八、实验讨论1、淀粉的量不能太多，否则在加入碘液之后，将会导致溶液的颜色过深，太难 辨别。2、加入碘液后，立即摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，才能得到理想效 果。3、提供唾液淀粉酶的同学，也要注意自己的唾液分泌量，如果太少将会导致实 验时间大大延长，而且实验效果不明显。在制备前，可以用话梅之类，目的使其 能分泌足够的唾液淀粉酶，但要注意漱口清理口腔。【感谢】感谢我们实验组的同

11、学一起准备完成实验！【参考文献】1 唐睿谦.唾液淀粉酶最适pH值的测定G. 2015.2 许冰，袁媛，赵文献.pH值对酶活性影响的实验观察J .临床合理用 药， 2010（10）3 吴耀生.医学生物化学与分子生物学实验指南M .北京：人民卫生出 版社， 20074 尚渤程，黎一苇.人体常见pH值J .生物学教学，20095 徐秀兰. 生物化学实验与指导. 北京：中国医药科学出版社， 1994年汪开圣.温度、pH值、激活剂和抑制剂对酶促作用的影响，生物化学，北京， 人民卫生出版杜， 1995， 1817严莉莉影响酶促反应速度的因素，生物化学，北京，中国医药科技出版社， 1999， (1):190罗纪盛.生物化学简明教程，北京，高等教育出版杜，1988，90120.9 京师范大学生物系生物化学教研室，基础化学实验，北京，高等教育出版社， 1992 l 13610 刘恒烈生物化学，江蓖，高校出版杜， 1993， 477011 聂剑初生物化学简明教程，北京，高等教育出版杜， 1989， 7889