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1、抗IL-14R单抗在SLE患者中对IL-14R的表达及其Ig分泌的影响抗IL-14R单抗在SLE患者中对IL-14R的表达及其Ig分泌的影响2010-02-22 马安伦余奇文张冬青王树军葛海良顾越英 【摘要】目的探索IL-14R与SLE病程的相关性。方法应用抗IL-14R单抗(BA5)分析了30例正常人和43例SLE患者外周血淋巴细胞表面IL-14R的分布与表达。结果发现SLE患者外周血IL-14R阳性细胞百分比(22.56%)明显高于正常人(7.84%)。在活动期和缓解期SLE患者中，IL-14R表达百分比也具有显著的差异(32.02%和13.09%)。结论提示BA5单抗能拮抗B细胞激活后I
2、L-14R的高表达和IgG的分泌。并可能以BA5单抗阻断和调节IL-14R的表达等方面调节B细胞功能的异常，从而为临床提供新的免疫治疗和检测手段。 【关键词】白细胞介素14抗IL-14R单克隆抗体红斑狼疮，系统性 Effect of IL-14 receptor monoclonal antibody on IL-14R expression and Ig secretion in SLE patientsMA Anlun,YU Qiwen,ZHANG Dongqing,et al.Shanghai Second University,Shanghai 200025 【Abstract】Obj
3、ectiveTo explore the IL-14R expression in peripheral blood of SLE patients and to analyse the relationship between IL-14R and course of disease.MethodsIL-14R-positive subset in PBMCs of 30 healthy subjects and 43 SLE patients was determined by flow cytometry with BA5,an mAb anti-IL-14.ResultsSignifi
4、cant difference of the percentage of IL-14R-positive cells was detected not only between SLE patients (22.56%) and healthy subjects (7.84%),but also between the patients in active (32.02%) and in remission periods (13.09%). Moreover,an IL-14-containing supernant of mixed lymphocyte culture (MLRS) in
5、 the experiment to induce a more intensive proliteration and a higher expression of IL-14R in the SAC-stimulated B cells and PBMCs for both patients and healthy subjects.The mAb BA5,however,was capable of blocking the MLRSeffect,resulting in a derease of B cellsrelative response from 100% to 40.18%
6、and 44.70% for healthy subjects and patients,respectively.ConclusionThese results show a promise for immunoprevention with mAb BA5 for control of the autoimmune diseases. 【Key words】Interleukin-14mAb anti IL-14 receptorLupus erythematosus,systemic 本文应用抗IL-14R的单抗，分析正常人群和SLE患者外周血中IL-14R的表达状态，同时利用免疫荧光和
7、ELISA技术检测经细胞激活剂刺激后用IL-14R单抗的阻断效应，并分析其IL-14R表达和Ig分泌状况，以便探索IL-14R与SLE病程的相关性，以建立与SLE密切相关的实验室诊断和病程监控指标。 1资料和方法 1.1研究对象 43例SLE患者皆符合美国风湿病学会1982年修订的诊断标准，根据临床病症分为活动期20例，缓解期23例，30名正常对照组均为健康自愿者。 1.2试剂 葡萄球菌COWAN I蛋白（SAC）。IL-14R单抗（BA5）。CD98单抗（广泛表达于激活的细胞）以上由美国华盛顿大学Ambrus教授惠赠。CD19单抗（北京军事医学科学院）。Namalva T淋巴瘤细胞培养上清（
8、NTLS）。ELISA-Ig测定盒（上海第二医科大学）。AET-SRBC（溴化二氨基硫氢化物处理的羊红细胞）。 1.3方法 1.3.1免疫荧光流式细胞仪检测：外周血经淋巴细胞分离液分离得PBMC，分别加入BA5、CD19、CD98单抗，冰浴30分钟，经三次洗涤后，加入FITC标记的兔抗鼠二抗，冰浴30分钟，三次洗涤后，经FACS测定，计5 000只淋巴细胞，以阳性细胞百分率估计上述IL-14R、CD19和CD98的表达量。 1.3.2细胞亚群分离：加入一定量AET-SRBC的PBMC，37 温育15分钟后，4 过夜，然后通过淋巴细胞分离液分离，分别获取T、B细胞，经CD3、CD19单抗荧光鉴定
9、，T细胞纯度95%，而B细胞纯度80%。 1.3.3PBMC的体外诱导和增殖：用SAC激活B细胞，共同培养48小时后，1640营养液洗涤，接种于96孔培养板中，分别加入NTLC、BA5和NTLCBA5。继续培养7天，然后分别收集细胞及细胞培养上清。 1.3.4细胞培养上清中IgG分泌的检测(ELISA检测法)。 2结果 2.1SLE患者中IL-14R与B细胞相关标志的FACS测定：表1是用流式细胞仪对正常人和SLE患者外周血PBMC中IL-14R、CD19和CD98阳性的细胞的分析，结果表明IL-14R阳性细胞在SLE患者中的百分比为22.56%，明显高于正常人(7.84%，P0.001)，而
10、且该百分比在活动期和稳定期SLE中也有显著性的差异，分别为32.03%和13.09%。提示SLE病程中IL-14受体阳性细胞的数量与病情的转归有关。同时表明，CD98在SLE活动期与缓解期阳性率也显著增高，但两者之间无明显差异。 表1IL-14R、CD19和CD98(阴性细胞百分率)与SLE疾病的关联(s) 正常人 SLE n30 总和%n43 活动期%n20 缓解期%n23 IL-14R 7.844.41 22.5617.561) 32.0317.26 13.0912.091) CD19 21.138.18 27.498.202) 29.218.97 24.906.452) CD98 8.8
11、17.85 42.3627.041) 40.5630.74 43.5625.642) 注：1)正常人与SLE总和比较；SLE活动期与缓解期比较P0.001 2)正常人与SLE总和比较；SLE活动期与缓解期比较P0.05 2.2单抗BA5对正常人和SLE患者淋巴细胞增殖后IL-14R的表达影响：见图1，正常人和SLE患者外周血B细胞亚群经SAC激活后，NTLS具有进一步诱导正常人和SLE患者B细胞IL-14R表达的作用(42.26%和38.18%)，然而这种表达能被单抗BA5所抑制。这一结果提示单抗BA5能竞争抑制NTLS对IL-14R的诱导作用。 2.3对SAC激活的PBMC经BA5、NTLS及BA5NTLS调节后的IgG分泌的影响：见图2在加入不同调节剂的四组中(A，B，C和D组)，正常人的B细胞IgG分泌量均无明显差异；在SLE患者中活动期和缓解期的B细胞IgG分泌量(B，C，D组)均高于对照组(A)组；当加入NTLS后，SLE病人的IgG分泌量下降并低于对照组；而这种下降又由于BA5单抗的加入而得以回升。 图1SAC激活的B细胞及各种调节剂图2单抗BA5对SAC激活的B细胞
