《HPLC日常维护办法之三.doc》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HPLC日常维护办法之三.doc（10页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、HPLC日常维护办法之三：谱图的各种问题 作者：-转贴自：-点击数：339更新时间：2003-11-10文章录入：剡 液相色谱系统的许多问题都能在谱图上反映出来。其中有一些问题可以通过改变设备参数得到解决；而其他的问题必须通过修改操作程序来解决。对于色谱柱和流动相的正确选择是得到好的色谱图的关键。A、 峰拖尾原 因解决方法1、筛板阻塞1、a、反冲色谱柱 b、更换进口筛板 c、更换色谱柱2、色谱柱塌陷2、填充色谱柱3、干扰峰3、a、使用更长的色谱柱 b、改变流动相或更换色谱柱4、流动相PH选择错误4、调整PH值。对于碱性化合物，低PH值更有利于得到对称峰5、样品与填料表面的溶化点发生反应图5、a
2、、加入离子对试剂或碱性挥发性修饰剂 b、更改色谱柱B、 峰前延原 因解决方法1、柱温低1、升高柱温2、样品溶剂选择不恰当2、使用流动相作为样品溶剂3、样品过载3、降低样品含量4、色谱柱损坏4、见A1、A2C、 峰分叉原 因解决方法1、 保护柱或分析柱污染图1、取下保护柱再进行分析。如果必要更换保护柱。如果分析柱阻塞，拆下来清洗。如果问题仍然存在，可能是柱子被强保留物质污染，运用适当的再生措施。如果问题仍然存在，入口可能被阻塞，更换筛板或更换色谱柱。2、样品溶剂不溶于流动相2、改变样品溶剂。如果可能采取流动相作为样品溶剂。D、 峰变形原 因解决方法1、样品过载1、减少样品载量E、 早出的峰变形原
3、 因解决方法1、样品溶剂选择不恰当1、a、减少进样体积 b、运用低极性样品溶剂F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰原 因解决方法1、柱外效应1、a、调整系统连接（使用更短、内径更小的管路） b、使用小体积的流通池G、 K增加时，脱尾更严重原 因解决方法1、二级保留效应，反相模式1、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） c、加入盐或缓冲剂（或离子化样品） d、更换一支柱子 2、二级保留效应，正相模式2、a、加入三乙胺（或碱性样品） b、加入乙酸（或酸性样品） c、加入水（或多官能团化合物） d、试用另一种方法3、二级保留效应，离子对3、加入三乙胺（或碱性样品）H、 酸性或碱性化
4、合物的峰拖尾原 因解决方法1、缓冲不合适1、a、使用浓度50-100mM的缓冲液 b、使用Pka等于流动相PH值的缓冲液I、 额外的峰原 因解决方法1、样品中有其他组份1、正常2、前一次进样的洗脱峰2、a、增加运行时间或梯度斜率 b、提高流速3、空位或鬼峰3、a、检查流动相是否纯净 b、使用流动相作为样品溶剂 c、减少进样体积J、 保留时间波动原 因解决方法1、温控不当1、调好柱温2、流动相组分变化2、防止变化（蒸发、反应等）3、色谱柱没有平衡3、在每一次运行之前给予足够的时间平衡色谱柱K、 保留时间不断变化原 因解决方法1、流速变化1、重新设定流速2、泵中有气泡2、从泵中除去气泡3、流动相选
5、择不恰当3、a、更换合适的流动相 b、选择合适的混合流动相L、 基线漂移原 因解决方法1、柱温波动。（即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。）1、控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图2、流动相不均匀。（流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。）2、使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。3、流通池被污染或有气体3、用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）4、检测器出口阻塞。（高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线）4、取
6、出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。5、流动相配比不当或流速变化5、更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。6、柱平衡慢，特别是流动相发生变化时6、用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。7、流动相污染、变质或由低品质溶剂配成7、检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂8、样品中有强保留的物质（高K值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。8、使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。9、使用循环溶剂，但检测器未调整。9、重新设定基线。当检测器动力学范围发生
7、变化时，使用新的流动相。10、检测器没有设定在最大吸收波长处。10、将波长调整至最大吸收波长处M、 基线噪音（规则的）原 因解决方法1、在流动相、检测器或泵中有空气1、流动相脱气。冲洗系统以除去检测器或泵中的空气。2、漏液图2、见第三部分。检查管路接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换泵密封。3、流动相混合不完全3、用手摇动使混合均匀或使用低粘度的溶剂4、温度影响（柱温过高，检测器未加热）4、减少差异或加上热交换器5、在同一条线上有其他电子设备5、断开LC、检测器和记录仪，检查干扰是否来自于外部，加以更正。6、泵振动6、在系统中加入脉冲阻尼器N、 基线噪音（不规则
8、的）原 因解决方法1、 漏液图1、见第三部分。检查接头是否松动，泵是否漏液，是否有盐析出和不正常的噪音。如有必要，更换密封。检查流通池是否漏液。2、流动相污染、变质或由低质溶剂配成2、检查流动相的组成。3、流动相各溶剂不相溶3、选择互溶的流动相4、检测器/记录仪电子元件的问题4、断开检测器和记录仪的电源，检查并更正。5、系统内有气泡5、用强极性溶液清洗系统6、检测器内有气泡6、清洗检测器，在检测器后面安装背景压力调节器7、流通池污染（即使是极少的污染物也会产生噪音。）7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池8、检测器灯能量不足8、更换灯9、色谱柱填料流失或阻塞9、更换色谱柱10、流动相混合不均
9、匀或混合器工作不正常10、维修或更换混合器，在流动相不走梯度时，建议不使用泵的混合装置O、 宽峰原 因解决方法1、流动相组成变化1、重新制备新的流动相2、流动相流速太低2、调节流速3、漏液（特别是在柱子和检测器之间）3、见section 3。检查接头是否松动、泵是否漏液、是否有盐析出以及不正常的噪音。如果必要更换密封。4、检测器设定不正确4、调整设定5、柱外效应影响a、柱子过载b、检测器对反应时间或池体积响应过大c、柱子与检测器之间的管路太长或管路内径太大d、记录仪响应时间太长图5、 a、 小体积进样（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀释样品b、减少响应时间或使用更
10、小的流通池c、 使用内径为0.007-0.01的短管路d、减少响应时间6、缓冲液浓度太低6、增加浓度7、保护柱污染或失效7、更换保护柱8、色谱柱污染或失效，塔板数较低8、更换同样类型的色谱柱。如果新柱子可以提供对称的色谱峰，则用强溶剂冲洗旧柱子。9、柱入口塌陷9、打开柱入口，填补塌陷或更换柱子10、呈现两个或多个未被完全分离的物质的峰10、选择其它类型的色谱柱以改善分离效果11、柱温过低11、提高柱温。除非特殊情况，温度不宜超过7512、检测器时间常数太大12、使用较小的时间常数P、 分离度降低原 因解决方法1、流动相污染或变质（引起保留时间变化）1、重新配置流动相2、保护柱或分析柱阻塞图2、去掉保护柱进行分析。如果必要则更换保护柱。如果分析柱阻塞，可进行反冲。如果问题仍然存在色谱柱可能被强保留的污染物损坏，建议使用恰当的再生程序。如果问题仍然存在，进口可能阻塞了，更换入口处的筛板或更换色谱柱。Q、 所有的峰面积都太小原 因解决方法1、检测器衰减设定过高1、减少衰减的设定2、检测器时间常数设定太大2、设定较小的时间常数3、进样量太少3、增大进样量4、记录仪连接不当4、使用正确的连接R、 所有的峰面积都太大原 因解决方法1、检测器衰减设定过低1、采取较大的衰减2、进样过多2、减少进样量3、记录仪连接不正确3、正确连接记录仪
