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1、高效液相色谱法测定山楂合剂中枸橼酸的含量目的：建立高效液相色谱法测定山楂合剂中枸橼酸的含量。方法：采用Agilent C18 色谱柱（ZORBAX SB C18 4.6mmx250mm, 5pm）；流动相为 0.5% NH4H2PO4水溶液（用磷酸调节pH至2.8）；检测波长为210nm，流速为1.0mL /mi n,柱温为25C。结果：枸橼酸进样量在0.05829.0yg（r=0.99999）范围内与 峰面积线性关系良好，平均加样回收率为99.29%, RSD=0.56%（n=9）。结论：本 法简便、快速、专属性强、重现性好；可作为山楂合剂的质量控制方法。标签：枸橼酸；高效液相色谱法；山楂合
2、剂；含量测定山楂合剂是由山楂、乌梅、陈皮等药制成，具有消食健胃、理气健脾、安蛔 的功效。质量标准中没有规定含量测定方法。本文根据中国药典2005 年版 一部“山楂”和“乌梅”项下选择枸橼酸为质量控制指标，采用 HPLC 法测定山楂与 乌梅的主要成分枸橼酸的含量。获得满意的结果。1 仪器与药品高效液相色谱仪（美国Agilent 1100系列仪）。包括自动进样装置、VWD可变 紫外检测器、柱温箱等；METTLERAE240型电子分析天平。除高效液相色谱检 测所用试剂为色谱纯外，其他试剂均为分析纯。枸橼酸对照品 （CHEMSERVICE Lot： 281 76A,纯度99%,含1分子的结晶水C6H8
3、O7H2O,分子量为：210）； 山楂合剂由本院制剂室配制（批号 070523、 070718、 070722）。2 方法与结果2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18 色谱柱（Z（）RBAX SB C18 4.6mmx250mm, 5pm）；流动相：0.5%NH4H2PO4 水溶液（用磷酸调节 pH 至 2.8）； 流速：1.0mL / min；柱温：25C ；检测波长：210nm；进样量：5卩1。理论板数 按枸橼酸峰计算为 5000。2.2溶液的制备精密称取枸橼酸对照品64.08mg（实际含量二64.8x99% X192m210=58.0mg）,置10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻
4、度，摇匀，即得每 1mL中含枸橼酸5.8mg的溶液（贮备液），分别精密吸取溶液（贮备液）0.01mL、 0.05mL、0.1mL、0.5mL、1 mL、5mL；分别置5mL量瓶中，加水稀 释至刻度，分别得每1mL含0.0116mg、0.058mg、0.116mg、0.58mg、 1.16mg、5.8mg的对照品溶液。取山楂合剂5mL,置25mL量瓶中，用水稀 释至刻度，混匀，用0.45pm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。2.3 方法学考察2.3.1标准曲线和线性范围精密吸取枸橼酸对照品溶液、 、各5pL,分别注入高效液相色谱仪测定。以枸橼酸对照品含量（pg）为横坐 标，峰面积积分值为
5、纵坐标，绘制标准曲线，直线几乎通过原点，所以采用外标 一点法进行含量测定。线性回归方程为Y=87.67X+5.45, r=0.99999，线性范围为 0.05829.0yg。2.3.2精密度试验：取同一枸橼酸对照品溶液5卩1,注入液相色谱仪，连 续测定 6 次，结果峰面积积分值分别为： 229.7922， 225.4753， 227.4164， 228.3199， 227.5747, 225.7234；积分值平均为：227.38, RSD = 0.71%。结果表明仪器精密 度较好。2.3.3稳定性试验 取同一供试品溶液（批号为070523）各5卩1,分别于0, 2, 5, 10, 15, 20
6、, 24h 注入液相色谱仪测定,结果供试品溶液峰面积积分值的 RSD = 1.2%，表明在24h内对照品和供试品的峰面积积分值稳定，说明测定溶液配 制好后，放置24h内测定均可。2.3.4 重现性试验 取同一批号的山楂合剂（批号： 070523）,按供试品溶液 的制备方法重复操作测定 6次,结果平均含量为 3.26mgmL, RSD=1.16%。2.3.5 回收率试验 采用加样回收法,取已知含量的同一批号（070523）山楂 合剂（含量为：3.26mg/mL）适量，分别精密加入枸橼酸对照品适量，按供试品溶 液的制备及测定法操作。结果见表1。2.3.6 阴性干扰试验 照上述条件测定山楂合剂空白（
7、不含山楂、乌梅药材 制成的阴性合剂）制剂，结果在枸橼酸色谱峰相对应的保留时间处无吸收峰，说 明处方中其它药味对山楂、乌梅中的枸橼酸测定无干扰。见图 1。2.4 样品含量测定 按供试品溶液的制备及测定法操作，分别精密吸取对 照品溶液与供试品溶液各5卩1,注入液相色谱仪测定，外标一点法计算。结果见 表 2。S I山槽含桶中曲豐加涯砂诙廟曲果加亠勺 卑枠社iff晶苗毗味酗 bN足憾 i收卿 竽勵貝3LU7. M17.KM30.717. h17.SILU17.554 宝LI 聶$肛“bi慷豈迪W-212 （L?Eflkll|轨時辞胃L储列窖P。再JD.TtI出 4旳 34.373 n.TIS U.7.R111.2）.個関IJ.7Q ZJ.-W3 W.73嵐 令谊匸nyiml.l勺曲苫間:Fl上:1_苗斗羽a.E*mtiax ma mx i呦”幻- ：L II3 143.12I 直lw 如3 讨论枸橼酸是山楂与乌梅中主要的活性成分之一，也是山楂合剂治疗疾病的重要 成分，故选择该物质作为考察指标。用枸橼酸水溶液(1 mg / mL)在190370nm 波长范围内进行扫描测定，结果在210nm波长处，有肩峰，所以选择210nm为 检测波长。本法简便、快速、专属性强、重现性好，可作为山楂合剂的质量控制 方法。
