《基因工程和基因重组》由会员分享，可在线阅读，更多相关《基因工程和基因重组（11页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、内容提要：细菌的基因转移包括接合作用、转化作用、转导作用等。当细胞与细胞或细菌通过菌毛 相互接触时，质粒 DNA 从一个细胞转移至另一个细胞，这种类型的 DNA 转移称为接合作用。 通过自动获取或人为的供给外源DNA，使细胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型，这就是 转化作用。由病毒携带将宿主 DNA 片段从一个细胞转移至另一细胞的现象或机制，称为转导 作用。在接合、转化、转导或转座过程中，不同DNA分子间发生的共价连接即为重组。重组 DNA 技术是在人们对自然界基因转移和重组的认识基础上创立的新技术。为研究基 因的结构与功能，从构建的基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣的基因就是
2、基 因克隆或分子克隆，又称重组DNA技术。一个完整的基因克隆过程应包括：1.分，即目的基 因的获取及基因载体的选择。目的基因指科学家感兴趣的外源基因，其来源有几种途径：化 学合成、PCR技术、基因组文库或cDNA文库中获得。载体是目的基因的携带者，常用的载体 有质粒、噬菌体等。2.切，即限制性核酸内切酶的应用。限制性内切酶是识别DNA的特异序 列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶，是实现重组DNA技术的重要的工具 酶。3.接，即将目的基因与载体连接形成重组体（或重组DNA）。4.转，即将重组体导入宿 主菌（或细胞），根据采用的载体性质不同，将重组体导入宿主菌的方法有转化、转染及感
3、染。 5筛，即重组体的筛选与鉴定，将重组体导入宿主菌后，通过适当形式的培养板生长即可获 得一定的抗药菌落。利用原位杂交，和Southern印迹或免疫学方法对抗药菌落进行筛选，获 得含目的基因的转化子菌落，再经扩增、分离重组DNA获得基因克隆。重组DNA技术在疾病 基因的发现，表达有药用价值的蛋白质，DNA诊断及疾病的预防等方面具有广泛应用价值， 并促进了当代分子医学的诞生和发展。一、选择题【A型题】1. 下列DNA序列属于回文结构的是（）AATGCCGTACGGCBGAATTCCTTAAGCGGCCGGCCGGCCDTCTGACAGACTGECTAGGGGATCCC2. DNA经限制性内切核酸
4、酶切割后，断端易于首尾相接，自行成环。这是因为存在着（）A. 钝性末端B.平端C.粘性末端D. 5端E. 3端3. 限制性内切核酸酶的通常识别序列是（ ）A. 粘性末端B.聚腺苷酸C. 回文对称序列D. RNA聚合酶附着点E.甲基化“帽”结构4. pBR322 是 （）A C E 5A6AB CDE 7A C8 AC E9 AC E10A C11A12 A13A C14A C15A16 A17A C18A19 A经人工改造的大肠杆菌质粒B.天然的大肠杆菌质粒天然的酵母质粒D.经人工改造的大肠杆菌噬菌体经人工改造的酵母质粒免疫球蛋白的生成是通过以下哪个过程（ ）转化B.转导C.转染D.转位E.溶
5、原常用载体-质粒的特点（ ）是线形双链 DNA插入片断的容纳量比入噬菌体DNA大 含有抗药性基因含有同一限制性内切核酸酶的多个切口 不随细菌繁殖而进行自我复制 基因工程的操作程序可概括为（ ） 切、转、接、筛、分B.转、接、筛、分、切接、筛、分、切、转D.筛、分、切、转、接E.分、切、接、转、筛cDNA 文库指（ ）B. 个生物组织和细胞的全部mRNA信息D. 个物种的全部mRNA信息B.由噬菌体提取而得D可将两个DNA分子连接起来一个生物组织和细胞的全部基因信息 一个生物组织和细胞所表达的mRNA信息 一个物种的全部基因信息 限制性内切核酸酶（ ） 可将单链DNA任意切断 可将双链DNA序列
6、特异地切开 不受DNA甲基化影响在重组DNA技术中，不常用的酶是（） 限制性内切核酸酶B. DNA聚合酶E. DNA 解链酶DNA连接酶D.反转录酶可作为重组DNA的目的基因的是（）E. mRNA和基因组DNAmRNAB. tRNA C. rRNAD.基因组 DNA以质粒为载体，将外源基因导入受体菌的过程称（ ）转化B.转染C.感染D.转导E转移最常用的筛选转化细菌是否含质粒的方法是（ ）营养互补筛选免疫学方法a -互补筛选法属于（抗药性标志筛选标志补救筛选B. 抗药性筛选D. PCR 筛选）B. 酶免检测分析D. 原位杂交筛选E. 分子杂交筛选E免疫学方法F 因子从一个细胞转移至另一个细胞的
7、基因转移过程称为（ ）转化B.转导C.转染D.转座E.接合由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为（ ）转化B.转导C.转染D.转座E.接合发生在同源序列间的重组称为（ ）位点特异的重组B. 非位点特异的重组基本重组D.随机重组E.人工重组在重组DNA技术中催化形成重组DNA分子的是DNA （）聚合酶B.解链酶C.连接酶 D.拓扑酶E.内切酶在重组DNA技术领域所说的分子克隆是指（）建立单克隆抗体B.建立多克隆抗体E.有性繁殖DNAE.自我表达能力C.构建重组DNA分子D.无性繁殖DNA20. 无性繁殖依赖DNA载体的最基本性质是（）A. 青霉素抗性B.卡那霉素抗性C. 自我复制能力D.自我
8、转录能力21. 在已知序列的情况下获得目的 DNA 最常见的是（ ）A. 化学合成法B.筛选基因组文库C. 筛选cDNA文库D.聚合酶链式反应E. DNA合成仪合成 22.重组DNA技术领域常用的质粒DNA是（）A. 细菌染色体DNA的一部分B.细菌染色体外的独立遗传单位C. 病毒基因组DNA的一部分D.真核细胞染色体DNA的一部分E.真核细胞染色体外的独立遗传单位23. 直接针对目的 DNA 进行筛选的方法是（ ）A. 青霉素抗药性 B.氨苄青霉素抗药性C.分子杂交D.分子筛E.电泳24. “克隆”某一目的DNA的过程不包括（）A. 基因载体的选择与构建B. 外源基因与载体的拼接C. 重组D
9、NA分子导入受体细胞D. 筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞E. 表达目的基因编码的蛋白质25. 表达人类蛋白质的最理想的细胞体系是（）A. E. coli表达体系B.原核表达体系C.酵母表达体系D.昆虫表达体系E.哺乳类细胞表达体系26. 不能用作克隆载体的DNA是（）A.质粒DNAB.噬菌体DNAC.细菌基因组DNAD.腺病毒DNAE.逆转录病毒DNA27. 关于重组体的叙述，下列哪项是错误的（ ）A. 包括外源性的目的基因B.包括载体C.重组体有独立繁殖的能力D.重组体要回到细胞水平表达E. 目的基因和载体通过连接酶连接28. 基因组代表一个细胞或生物体的（ ）A. 部分遗传信息B.整套
10、遗传信息C.可转录基因D.非转录基因E.可表达基因29. 下列常用于原核表达体系的是（ ）A.酵母细胞B.昆虫细胞C.哺乳类细胞D.真菌E.大肠杆菌30. 构建基因组DNA文库时，首先需分离细胞的（）A.染色体 DNA B.线粒体 DNA C.总 mRNA D. tRNAE. rRNA31. 构建cDNA文库时，首先需分离细胞的A.染色体 DNAB.线粒体 DNA C.总 mRNA D. tRNAE. rRNA【X型题】1. 限制性内切核酸酶作用特性是（）A. 在对称序列处切开DNAB. DNA 两链的切点常不在同一位点C. 酶切后产生的DNA片段多半具有粘性互补末端D. DNA两链的切点常在
11、同一位点E. 限制酶通常识别46碱基对，有些识别8个或8个以上碱基对2. 一般来说限制性内切核酸酶（）A.只识别一种核苷酸序列B. 其识别不受DNA来源的限制C. 不同生物的DNA经同一限制性内切核酸酶切割后产生相同末端D. 对双链DNA和单链DNA 一视同仁E. 可识别多种不同的核昔酸序列3. 经限制性内切核酸酶切割后的DNA可产生以下哪些情况（）A.产生带有5磷酸基团的伸出股B.产生3-OH的伸出股C.粘性末端D.钝性末端E.以上均不对4. 大肠杆菌质粒经ECoR I切割后，可与经ECoR I切割后的目的DNA重组结合,为得到重组体，需经（）A.加热B.混合C.退火 D. RNA连接酶催化
12、E. DNA连接酶催化5. 有关载体和目的基因连接方法的叙述，正确的是（）A. 平端切口可直接连接B. 平端切口可采用“尾接法”C. 载体与目的基因通过非共价键连接D. 利用人工连接器也可连接E. 需要DNA连接酶参与6. 自然界基因转移可能伴发基因重组的有（）A接合作用B 转化作用C转导作用D转座E以上都不是7. 在分子克隆中，目的 DNA 可来自（）A.原核细胞染色体DNAB 真核细胞染色体DNAC真核细胞mRNA反转录获得的cDNAD. 聚合酶链反应E. 人工合成的DNA8. 从基因组DNA文库或cDNA文库分离、扩增某一感兴趣基因的过程就是（）A.基因克隆B. 分子克隆E.构建cDNA
13、文库E.真核细胞基因组DNAE.感染E. RNA 的制备C.重组DNA技术D.构建基因组DNA文库9可用作克隆基因载体的DNA有（）A.细菌质粒DNAB.噬菌体DNAC.病毒DNAD.酵母人工染色体10. 将重组DNA分子导入受体细菌的方法有（）A.接合B.转座C.转化D.转染11. 下述操作可能用于DNA克隆过程的是（）A. DNA的制备和降解B.不同来源DNA的拼接C. 核酸分子杂交D细菌的生长和繁殖12. 关于质粒DNA的叙述正确的是（）A.是基因组DNA的组成部分B. 具有独立复制功能C. 可以赋予宿主细胞额外的生物学特性D 含有感兴趣的目的DNAE. 含有各种抗生素抗性基因13. 重
14、组DNA时，外源基因又称（）A.目的基因B.目的RNAC.目的DNA D.外源RNAE.重组DNA 14 .作为载体的质粒应具备下列哪些特点（ ） A.分子量相对小B. 常用的质粒载体有pBR322和pUC系列等C. 用作基因工程载体的常是接合型质粒D. 在复制子以外的适当位置，存在几个单一的限制性内切核酸酶位点E. 具有插入失活的筛选标记15载体必需具备下列哪些特点（）A. 本身是一个复制单位，具有复制起点B. 插入外源性DNA后并不影响载体本身的复制C. 进入细胞后用本身的酶系进行复制D. 易进入受体细胞E. 易于鉴定和筛选16.DNA 重组的步骤包括（）A. 用PCR技术合成大量的重组DNAB. 用连接酶将外源性DNA与载体连接C. 通过转化将重组DNA引入受体细胞D. 培养细胞以扩增重组DNAE. 筛选出含有重组体的克隆二、填空题1. 通过自动获取或人为地供给外源，使细胞或培养的受体细胞获得新的，这就是转化作用。2. 由和介导的基因移位或重排，称为转座。3. 基因重组包括、和等类型。4. 依赖整合酶，在两个DNA序列的特异位点间
