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1、草莓高效再生体系的建立和抗除草剂Bar 基因工程菌的构建本试验以适合安徽省栽培的草莓(Fragariaananassa Duch)优良品种丰香、鬼怒甘和章姬为试材, 通过对茎尖增殖、叶片愈伤组织诱导、生根培养、移栽基质的筛选研究 , 建立起草莓简单、 快速、高效的茎尖离体再生体系, 为草莓转基因研究提供基础。再者, 利用以 LBA4404(pAL4404)、HB101(pRK2013)、DH5a(pBI121-bar) 进行三亲杂交 , 为 bar 基因转化提供工程菌。另外 , 对草莓 bar 基因转化农杆菌侵染体系作了初步探索。试验研究获得的主要结果如下 :1 、草莓茎尖消毒不同处理的效果存
2、在显著差异。其中 , 处理效果最好 , 成活率达到 90%,与其他处理的差异达到了极显著水平。 2、在茎尖培养中 , 当外植体大小 0.7mm时, 成活率高达 95.6%, 外植体0.3mm时成活率不到 20%;外植体大小为 0.3 0.5 mm、0.5 0.7 mm时 , 成活率分别达到了 80%、84%。3、丰香、鬼怒甘及章姬的最佳增殖培养基分别为:MS+BA 0.5 mg/L+NAA0.10mg/L 、MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.10 mg/L、 MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.20 mg/L 。说明不同基因型的品种最佳增殖培养基存在差异。4、应用 SPSS软件分
3、析 , 得出诱导叶片愈伤组织的最佳培养基是:MS+BA3.0mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+IBA 0.3 mg/L。5、丰香、鬼怒甘、章姬生根的最适培养基分别为是 :1/2MS+IBA 0.1 mg/L、1/2MS+IBA0.0 mg/L、1/2MS+IBA 0.2 mg/L。6、分步炼苗后移栽 , 发酵过的稻壳 +菜园土 (1:1),成活率达到 98%左右 ; 其它配方成活率也到达了90%左右。 7、利用三亲杂交法将真核表达载体pBI121-bar转入根癌农杆菌LBA4404,通过菌落 PCR、质粒 PCR、质粒双酶切电泳检测 , 证明工程菌构建成功。8、试验筛选出浓度为25 mg/L 和 20 mg/L 的卡那霉素分别是草莓试管苗、叶片愈伤组织分化阶段的适宜选择压。9、对工程菌抑制抗生素浓度筛选,Cef 与Carb 有效抑菌浓度均为200 mg/L 。
